一种H9N2亚型禽流感和鸡滑液囊支原体的二联灭活疫苗制造技术

本发明专利技术公开了一种H9N2亚型禽流感和鸡滑液囊支原体的二联灭活疫苗，其包括抗原和疫苗佐剂，其中抗原为灭活的甲型流感病毒FZ株与滑液囊支原体MS

【技术实现步骤摘要】
一种H9N2亚型禽流感和鸡滑液囊支原体的二联灭活疫苗


[0001]本专利技术涉及兽用生物制品
，尤其涉及一种H9N2亚型禽流感和鸡滑液囊支原体的二联灭活疫苗。

技术介绍

[0002]H9N2亚型禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)是当前我国禽流感流行的主要亚型，由于病原流行分布范围广，感染鸡群可引起产蛋下降，或降低鸡群抵抗力，引发继发和混合感染现象，H9N2禽流感给养禽业造成了巨大的经济损失，已成为困扰和危害我国规模化养禽场的主要疫病之一。此外，H9N2AIV宿主广泛，可作为其它新型流感病毒的内部基因供体，加快流感病毒的持续性变异，促进新型流感病毒的产生和流行，在公共卫生健康方面同样具有较大的潜在威胁。
[0003]鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae，MS)是一种主要引起鸡和火鸡出现呼吸道症状和传染性滑膜炎症状的急性或慢性传染性疾病，其病原可直接侵入鸡类软骨组织，导致家鸡的关节肿大肿胀、滑液囊及腱鞘发炎、跛行和瘫痪，感染该病还会降低蛋鸡产蛋率、影响蛋品质，而且鸡滑液囊支原体可以垂直传播，给病原防控带来很大困难。目前H9N2AIV和MS在全世界鸡场中都广泛存在，而且两种病原均容易发生交叉感染，尤其是在高湿高热的福建省地区，临床常发支原体与流感的混合感染情况，给禽类养殖业造成了严重的经济损失。
[0004]当前防控禽流感的主要措施之一是使用疫苗免疫接种，但由于经典H9N2亚型商品化疫苗对新发毒株和变异株的免疫效果不佳，导致传统灭活疫苗不能满足当前我国许多地区的免疫防疫需要，所以急需研发与福建省主要流行毒株匹配性更高的疫苗。对于滑液囊支原体引起的疾病和经济损失，目前主要存在三种不同的措施用以预防和控制：鸡场净化，抗生素治疗和预防接种。但由于中国禽业养殖场的规模和管理级别的不同，净化成本高昂，很难建立和维护无MS感染的种鸡群，而抗生素治疗的方法，不仅容易导致菌株产生耐药性，而且存在药物残留影响食品安全的风险。因此疫苗接种同样成为了防控MS的最佳选择。
[0005]我国目前尚无H9N2亚型禽流感和鸡滑液囊支原体二联灭活疫苗上市。因此研发高效的二联灭活疫苗符合目前养禽业的市场需求，对于我国H9N2亚型禽流感和鸡滑液囊支原体的防控具有重要的意义。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术的目的在于提出一种实施可靠有效、制备便利且可用于鸡滑液囊支原体病和H9N2的免疫预防的H9N2亚型禽流感和鸡滑液囊支原体的二联灭活疫苗。
[0007]为了实现上述的技术目的，本专利技术所采用的技术方案为：
[0008]一种H9N2亚型禽流感和鸡滑液囊支原体的二联灭活疫苗，其包括抗原和疫苗佐剂。
[0009]作为一种可能的实施方式，进一步，所述抗原为灭活抗原，其包括灭活的甲型流感
病毒FZ株和灭活的滑液囊支原体MS
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FJ01；其中，甲型流感病毒FZ株已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉，保藏编号为CCTCC NO:V 202171，保藏日期为2021年9月26日；滑液囊支原体MS
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FJ01已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉，保藏编号为CCTCC NO:M 2021210，保藏日期为2021年3月8日。
[0010]作为一种较优的实施选择，优选的，所述甲型流感病毒FZ株和滑液囊支原体MS
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FJ01采用甲醛灭活。
[0011]基于上述疫苗组成方案，本专利技术还提供一种H9N2亚型禽流感和鸡滑液囊支原体的二联灭活疫苗的制备方法，其包括如下步骤：
[0012]1)将甲型流感病毒FZ株用灭菌PBS做1000倍稀释接种于9～11日龄SPF鸡胚尿囊腔中，置于37℃孵育，48h后收获鸡胚病毒尿囊液，利用1％鸡红细胞做血凝试验，无菌收集HA效价≥256的病毒尿囊液，再保存于
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80℃环境(如低温冰箱)下；然后取用pH值为7.6～7.8的鸡滑液囊支原体培养基，以10比1的比例加入滑液囊支原体MS
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FJ01，然后置于培养温度为37℃、振荡速度为180r/min的环境下，培养至对数期，即菌液变成橙黄后，再置于4℃保存；
[0013]2)抗原灭活：向步骤1)制得的鸡胚病毒尿囊液中加入终浓度为0.1％的甲醛溶液，随加随摇，使其充分混合；然后置于37℃恒温摇床中以200～220r/min摇荡灭活12小时后取出，置4℃环境下(如冰箱)保存备用；将含有滑液囊支原体MS
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FJ01的菌液置于超高数离心机中离心处理菌液，使其浓缩至每毫升活菌含量不低于5
×
10
13
CCU，浓缩后立即在浓缩的菌液中加入终浓度0.2％的甲醛，并在培养温度为37℃、振荡速度为180r/min的条件下，震荡灭活24小时；
[0014]3)以1：1：5.62的比例分别加入步骤2)灭活的甲型流感病毒FZ株病毒液、滑液囊支原体MS
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FJ01菌液和疫苗佐剂，使用HR
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500分散乳化机逐渐从A档到D档开始乳化，令其在低温条件下以15000r/min乳化30分钟。
[0015]作为一种较优的实施选择，优选的，步骤1)中，所述鸡滑液囊支原体培养基的制备方法为：取脑心浸出液肉汤21g、酵母浸出粉5.6g、1wt％的酚红溶液2mL、50mg/mL的L
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半胱氨酸溶液2mL、50mg/mL的精氨酸溶液8mL和250mg/mL的辅酶I溶液0.4mL进行混合，然后定容至900mL，加入灭活的胎牛血清100mL、添加80万单位/L的青霉素，调整pH至7.6～7.8，最后使用0.22μm过滤器过滤至无菌的容器中完成制备。
[0016]进一步，本专利技术还提供甲型流感病毒FZ株和滑液囊支原体MS
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FJ01在制备禽流感病毒诊断用阳性血清试剂中的应用。
[0017]进一步，本专利技术还提供一种禽类二联灭活疫苗，其包括上述所述的H9N2亚型禽流感和鸡滑液囊支原体的二联灭活疫苗。
[0018]采用上述的技术方案，本专利技术与现有技术相比，其具有的有益效果为：
[0019]1、本专利技术方案的疫苗能够诱导鸡产生较高水平的抗体，且持续期长，免疫后H9N2禽流感和鸡滑液囊支原体的发病率明显减少，能够有效预防鸡滑液囊支原体的流行。
[0020]2、国内尚无H9N2亚型禽流感和鸡滑液囊支原体二联灭活疫苗上市，通过本专利技术的甲型流感病毒FZ株与滑液囊支原体MS
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FJ01制备的二联灭活疫苗可以有效的防控这两种传染病，同时也能弥补养禽行业市场空缺。
附图说明
[0021]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.禽流感H9N2亚型病毒毒株，其特征在于：其被命名为甲型流感病毒FZ株，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉，保藏编号为CCTCC NO:V 202171，保藏日期为2021年9月26日。2.一种H9N2亚型禽流感和鸡滑液囊支原体的二联灭活疫苗，其特征在于，其包括抗原和疫苗佐剂。3.如权利要求2所述的H9N2亚型禽流感和鸡滑液囊支原体的二联灭活疫苗，其特征在于，所述抗原为灭活抗原，其包括灭活的甲型流感病毒FZ株和灭活的滑液囊支原体MS
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FJ01；其中，甲型流感病毒FZ株已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉，保藏编号为CCTCC NO:V 202171，保藏日期为2021年9月26日；滑液囊支原体MS
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FJ01已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉，保藏编号为CCTCC NO:M 2021210，保藏日期为2021年3月8日。4.如权利要求3所述的H9N2亚型禽流感和鸡滑液囊支原体的二联灭活疫苗，其特征在于，所述甲型流感病毒FZ株和滑液囊支原体MS
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FJ01采用甲醛灭活。5.如权利要求3或4所述的H9N2亚型禽流感和鸡滑液囊支原体的二联灭活疫苗的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：1)将甲型流感病毒FZ株用灭菌PBS做1000倍稀释接种于9～11日龄SPF鸡胚尿囊腔中，置于37℃孵育，48h后收获鸡胚病毒尿囊液，利用1％鸡红细胞做血凝试验，无菌收集HA效价≥256的病毒尿囊液，再保存于
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80℃环境下；然后取用pH值为7.6～7.8的鸡滑液囊支原体培养基，以10比1的比例加入滑液囊支原体MS
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FJ01，然后置于培养温度为37℃、振荡速度为180r/min的环境下，培养至对数期，即菌液变成橙黄后，再置...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈吉龙，颜世红，李训良，王松，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：