一种CIK细胞冻存液及冻存方法技术

本发明专利技术公开了一种CIK细胞冻存液，由以下成分组成：0.9%氯化钠注射液、低分子右旋糖酐、葫芦素B、葛缕醇、亮啡丝肽、维生素C、肝素钠。本发明专利技术提供的冻存液中亮啡丝肽帮助维持CIK细胞内外渗透压的稳定性，避免在降温过程中细胞局部电解质浓度增高，造成细胞死亡。葫芦素B、葛缕醇对CIK细胞形成保护作用，一方面减少冰晶对CIK细胞造成的损伤；另一方面使CIK细胞保持良好的增殖活性，经复苏后的CIK细胞存活率高，增殖活性不降低，有效保障了冻存后的CIK细胞仍可用于临床的免疫治疗中。本发明专利技术还提供一种CIK细胞的冻存方法，先采用程序降温至

【技术实现步骤摘要】
一种CIK细胞冻存液及冻存方法


[0001]本专利技术涉及免疫细胞领域，尤其涉及一种CIK细胞冻存液及冻存方法。

技术介绍

[0002]CIK细胞，即细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine
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Induced Killer，CIK)是一种新型的免疫活性细胞，具有增殖速度快、杀瘤活性高、杀瘤谱广的特点，对提高患者自身抗肿瘤免疫能力有重要作用。对于无法手术或对化疗耐受的中晚期肿瘤患者也可起到改善生活质量、延长生命的积极作用。但诱导CIK细胞需要花费很长的时间，在临床应用上需要多次诱导和采血，给患者造成了极大的痛苦和经济负担。为了解决上述问题可采用细胞冻存技术将CIK细胞在超低温保存，需要时再复苏、增殖使用。
[0003]细胞冻存是将细胞放在低温环境，减缓细胞代谢，以达到长期储存的一种技术。其原理是将细胞置于
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196℃液氮中超低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将细胞特性保存起来，在需要的时候通过复苏细胞即可使用。细胞冻存时向细胞悬液中加入保护剂，可使溶液冰点降低，在缓慢冻结的条件下，细胞内水分渗透出细胞外，减少细胞内冰晶形成，从而避免细胞在冰冻过程中的损伤。
[0004]而CIK细胞冻存还存在诸多问题。如CIK细胞易受到冰晶损伤，复苏后细胞活率低等问题。细胞冻存液直接影响冻存后CIK细胞的活性，目前常见的CIK细胞冻存液多采用二甲基亚砜作保护剂同时添加胎牛血清，提高细胞膜对水的通透性，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。但是二甲基亚砜存在细胞毒性、胎牛血清成分不确定，可能引入细菌和病毒等污染源，会对人体过继免疫治疗产生一定影响。因此有必要提供一种成分安全的CIK细胞冻存液，保证CIK细胞经冻存后的细胞活率以及增殖活性。

技术实现思路

[0005]为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的之一在于提供一种CIK细胞冻存液，不添加DMSO和胎牛血清，成分安全，不影响细胞活性。
[0006]本专利技术的目的之二在于提供一种CIK细胞的冻存方法。
[0007]本专利技术的目的之一采用如下技术方案实现：一种CIK细胞冻存液，由以下成分组成：0.9%氯化钠注射液、低分子右旋糖酐、葫芦素B、葛缕醇、亮啡丝肽、维生素C、肝素钠。
[0008]优先地，所述CIK细胞冻存液由以下成分组成：0.9%氯化钠注射液90
‑
100份、低分子右旋糖酐1.5
‑
2份、葫芦素B 0.8
‑
1.2份、葛缕醇1.2
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1.8份、亮啡丝肽2.1
‑
2.4份、维生素C 0.5
‑
1份、肝素钠0.1
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0.5份。
[0009]优先地，所述CIK细胞冻存液由以下成分组成：0.9%氯化钠注射液95份、低分子右旋糖酐1.7份、葫芦素B 1.1份、葛缕醇1.4份、亮啡丝肽2.3份、维生素C 0.8份、肝素钠0.3份。
[0010]本专利技术的目的之二采用如下技术方案实现：
一种CIK细胞的冻存方法，采用上述冻存液。
[0011]优选地，所述CIK细胞的冻存方法包括以下步骤：（1）将冻存液分装在无菌冻存管中降温至4
‑
6℃，加入待冻存的CIK细胞吹打均匀；（2）将步骤（1）冻存管程序降温至
‑
80℃，冻存10
‑
12h，然后转移至液氮中冻存。
[0012]优选地，所述冻存液中CIK细胞的密度为5
‑
10
×
106个/mL。
[0013]优选地，步骤（2）中程序降温过程为：4
‑
6℃等待1
‑
2min，以1
‑
2℃/min降温至
‑
20℃，以10
‑
15℃/min降温至
‑
80℃。
[0014]相比现有技术，本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供一种CIK细胞冻存液，亮啡丝肽帮助维持CIK细胞内外渗透压的稳定性，避免在降温过程中细胞局部电解质浓度增高，造成细胞死亡。葫芦素B、葛缕醇对CIK细胞形成保护作用，一方面减少冰晶对CIK细胞造成的损伤；另一方面使CIK细胞保持良好的增殖活性，经复苏后的CIK细胞存活率高，增殖活性不降低，有效保障了冻存后的CIK细胞仍可用于临床的免疫治疗中。本专利技术的冻存液不添加DMSO和外源性血清，成分明确，安全性更好。冻存液中各成分相互配合降低了冻存过程对CIK细胞造成的损伤。
[0015]本专利技术还提供一种CIK细胞的冻存方法，先采用程序降温至
‑
80℃，然后再转移至液氮中冻存，结合本专利技术的冻存液，有效保证了CIK细胞的存活率，经冻存后的CIK细胞仍具有较好的增殖活性。
具体实施方式
[0016]下面，结合具体实施方式，对本专利技术做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。
[0017]实施例1一种CIK细胞冻存液，由以下成分组成：0.9%氯化钠注射液95份、低分子右旋糖酐1.7份、葫芦素B 1.1份、葛缕醇1.4份、亮啡丝肽2.3份、维生素C 0.8份、肝素钠0.3份。
[0018]一种CIK细胞的冻存方法，包括以下步骤：（1）将冻存液分装在无菌冻存管中，每管2mL，降温至4℃，加入待冻存的CIK细胞吹打均匀，冻存液中CIK细胞的浓度为8
×
106个/mL；（2）将步骤（1）冻存管程序降温至
‑
80℃，程序降温过程为：4℃等待2min，以1℃/min降温至
‑
20℃，以10℃/min降温至
‑
80℃，在
‑
80℃冻存10h，然后转移至液氮中冻存。
[0019]实施例2一种CIK细胞冻存液，由以下成分组成：0.9%氯化钠注射液90份、低分子右旋糖酐1.5份、葫芦素B 0.8份、葛缕醇1.2份、亮啡丝肽2.1份、维生素C 0.5份、肝素钠0.1份。
[0020]一种CIK细胞的冻存方法，包括以下步骤：（1）将冻存液分装在无菌冻存管中，每管2mL，降温至4℃，加入待冻存的CIK细胞吹打均匀，冻存液中CIK细胞的浓度为5
×
106个/mL；（2）将步骤（1）冻存管程序降温至
‑
80℃，程序降温过程为：4℃等待2min，以2℃/min降温至
‑
20℃，以12℃/min降温至
‑
80℃，在
‑
80℃冻存11h，然后转移至液氮中冻存。
[0021]实施例3一种CIK细胞冻存液，由以下成分组成：0.9%氯化钠注射液100份、低分子右旋糖酐
2份、葫芦素B 1.2份、葛缕醇1.8份、亮啡丝肽2.4份、维生素C1份、肝素钠0.5份。
[0022]一种CIK细胞的冻存方法，包括以下步骤：（1）将冻存液本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种CIK细胞冻存液，其特征在于，由以下成分组成：0.9%氯化钠注射液、低分子右旋糖酐、葫芦素B、葛缕醇、亮啡丝肽、维生素C、肝素钠。2. 根据权利要求1所述CIK细胞冻存液，其特征在于，由以下成分组成：0.9%氯化钠注射液90
‑
100份、低分子右旋糖酐1.5
‑
2份、葫芦素B 0.8
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1.2份、葛缕醇1.2
‑
1.8份、亮啡丝肽2.1
‑
2.4份、维生素C 0.5
‑
1份、肝素钠0.1
‑
0.5份。3. 根据权利要求2所述CIK细胞冻存液，其特征在于，由以下成分组成：0.9%氯化钠注射液95份、低分子右旋糖酐1.7份、葫芦素B 1.1份、葛缕醇1.4份、亮啡丝肽2.3份、维生素C 0.8份、肝素钠0.3。4.一种CIK细胞的冻存方法，其特征在于，采用权利要求1至3任...

【专利技术属性】
技术研发人员：晋文娟，马瑞，
申请(专利权)人：晋文娟，
类型：发明
国别省市：