一种COL4A3p.P408H基因点突变小鼠模型及其构建方法、应用和试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种COL4A3p.P408H基因点突变小鼠模型及其构建方法、应用和试剂盒。其包括以下步骤：(1)设计gRNA靶点序列；(2)将Cas9nickasemRNA、靶点序列以及Donor DNA混合物对受精卵进行注射；(3)在小鼠出生后进行基因鉴定，获得COL4A3p.P408H基因点突变小鼠模型，然后再利用高脂喂养联合腹腔注射链脲佐菌素构建糖尿病肾病小鼠模型。本发明专利技术利用CRISPR/Cas9技术剪切COL4A3基因的DNA，同时提供带有点突变的Donor同源模板，通过DNA的同源重组修复在特定外显子实现碱基替换，实现点突变，并以C57BL/6J小鼠为背景构建杂合型点突变小鼠模型。小鼠模型。小鼠模型。

【技术实现步骤摘要】
一种COL4A3 p.P408H基因点突变小鼠模型及其构建方法、应用和试剂盒


[0001]本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种COL4A3 p.P408H基因点突变 小鼠模型及其构建方法、应用和试剂盒。

技术介绍

[0002]随着人们生活方式与饮食结构的变化，糖尿病已经成为威胁全球健康的慢 性非传染性疾病之一，据2016年世界卫生组织发布的“全球糖尿病报告”统计， 截止2014年，糖尿病患病人数为4.22亿人，预计到2030年，全球将有4.39亿 糖尿病患者。糖尿病的激增，必将带来糖尿病并发症的大流行，糖尿病肾病 (Diabetic Kidney Disease,DKD)是糖尿病最常见的微血管并发症之一，是西方终 末期肾脏疾病(End
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Stage Kidney Disease,ESKD)的首要原因；我国2011
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2015 年的流行病学调查显示糖尿病合并慢性肾脏疾病(Chronic Kidney Disease,CKD) 的患者达2430万，DKD已经超过肾小球肾炎，成为CKD的首要原因，ESKD 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种COL4A3 p.P408H基因点突变小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)设计gRNA靶点，其靶点序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2，或SEQ ID NO.3所示；(2)将Cas9 nickase mRNA、靶点序列以及Donor DNA混合物对受精卵进行注射；(3)在小鼠出生后进行基因鉴定，获得COL4A3 p.P408H基因点突变小鼠模型。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述点突变位于21号外显子，由脯氨酸突变为组氨酸。3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述基因鉴定的过程为：抽提小鼠DNA，并采用引物COL4A3
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F/R进行PCR检测，以鉴定其是否突变完成。4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述PCR反应体系为：0.5μL KODFX、5μL DNTPs、12.5μL 2x Buffer、2μL DNA、1μL COL4A3
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F、1μL COL4A3
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R，最后用H2O补足至25μL。5.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘芳，王一婷，赵元成，张杰，杨丰豪，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：