【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于多肽表达的多核苷酸、组合物和方法
[0001]本专利申请要求于2019年3月28日提交的美国临时申请62/825,656的优先权，所述美国临时申请的内容出于所有目的以全文引用的方式并入本文中。
[0002]本申请含有序列表，所述序列表已经以ASCII格式电子提交，并且特此以全文引用的方式并入。创建于2020年3月27日的所述ASCII副本命名为01155
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0027
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00PCT_ST25.txt并且大小为967KB。
[0003]本公开涉及用于多肽表达的多核苷酸、组合物和方法，包含来自mRNA的表达和来自表达构建体的表达。
[0004]
技术介绍
和
技术实现思路
[0005]可以通过与多核苷酸(如mRNA或表达构建体)接触的细胞原位产生有用的多肽。然而，现有方法例如在某些细胞类型或生物体(如哺乳动物)中可能提供不如期望的稳健表达，或者可能具有不期望的免疫原性，例如可能引起细胞因子水平的不期望的升高。
[0006]因此，需要改进用于多肽表达的多核苷酸、组合物和方法。本公开旨在提供用于...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种多核苷酸，其包括：(i)对多肽进行编码的开放阅读框(ORF)，其中所述ORF中至少1.03％的密码子对是表1中所示的密码子对；或者(ii)对多肽进行编码的开放阅读框(ORF)，其中所述ORF中至少1％的密码子对是表1中所示的密码子对，并且所述ORF不对RNA引导的DNA结合剂进行编码。2.一种多核苷酸，其包括对多肽进行编码的开放阅读框(ORF)，其中所述ORF包括与SEQ ID NO:6
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10、29、46、69
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73、90
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93、96
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99、102
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105、108
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111、114
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117、120
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123、126
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129或132
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143中的任一个具有至少95％同一性的序列，任选地其中在不考虑所述ORF的起始密码子和终止密码子的情况下测定同一性。3.一种多核苷酸，其包括对多肽进行编码的开放阅读框(ORF)，其中所述ORF中至少75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％的密码子是(i)表5中列出的密码子或(ii)表6中列出的密码子，并且其中所述多肽不是RNA引导的DNA结合剂。4.根据权利要求1到3中任一项所述的多核苷酸，其中所述ORF的重复序列含量小于或等于23.3％。5.根据权利要求1到4中任一项所述的多核苷酸，其中所述ORF的GC含量大于或等于55％。6.一种多核苷酸，其包括对多肽进行编码的开放阅读框(ORF)，其中所述ORF的重复序列含量小于或等于23.3％，并且所述ORF的GC含量大于或等于55％。7.根据权利要求2到6中任一项所述的多核苷酸，其中所述ORF中至少1.03％的密码子对是表1中所示的密码子对。8.根据权利要求1到7中任一项所述的多核苷酸，其中所述ORF中小于或等于0.9％的密码子对是表2中所示的密码子对。9.根据权利要求1到8中任一项所述的多核苷酸，其中所述ORF中至少60％、65％、70％或75％的密码子是表3中所示的密码子。10.根据权利要求1到9中任一项所述的多核苷酸，其中所述ORF中小于或等于20％的密码子是表4中所示的密码子。11.根据权利要求1到10中任一项所述的多核苷酸，其中所述ORF中至少1.05％的密码子对是表1中所示的密码子对。12.根据权利要求1到11中任一项所述的多核苷酸，其中所述ORF中小于或等于10％的密码子对是表1中所示的密码子对。13.根据权利要求1到12中任一项所述的多核苷酸，其中所述ORF中小于或等于0.9％的密码子对是表2中所示的密码子对。14.根据权利要求1到13中任一项所述的多核苷酸，其中所述ORF的GC含量大于或等于56％。15.根据权利要求1到14中任一项所述的多核苷酸，其中所述ORF的GC含量小于或等于63％。16.根据权利要求1到15中任一项所述的多核苷酸，其中所述ORF的重复序列含量小于或等于23.2％。17.根据权利要求1到16中任一项所述的多核苷酸，其中所述ORF的重复序列含量大于或等于20％。
18.根据权利要求1到17中任一项所述的多核苷酸，其中所述ORF中小于或等于15％的密码子是表4中所示的密码子。19.根据权利要求1到18中任一项所述的多核苷酸，其中所述ORF中至少76％的密码子是表3中所示的密码子。20.根据权利要求1到19中任一项所述的多核苷酸，其中所述ORF中小于或等于87％的密码子是表3中所示的密码子。21.根据权利要求1到20中任一项所述的多核苷酸，其中所述ORF的尿苷含量的范围为所述ORF的最低尿苷含量到所述最低尿苷含量的101％、102％、103％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％或150％。22.根据权利要求1到21中任一项所述的多核苷酸，其中所述ORF的A+U含量的范围为所述ORF的最低A+U含量到所述最低A+U含量的101％、102％、103％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％或150％。23.根据权利要求1到22中任一项所述的多核苷酸，其中所述ORF的GC含量的范围为55％
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65％，如55％
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57％、57％
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59％、59
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61％、61
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63％或63
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65％。24.根据权利要求1到23中任一项所述的多核苷酸，其中所述ORF的重复序列含量的范围为所述ORF的最低重复序列含量到所述最低重复序列含量的101％、102％、103％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％或150％。25.根据权利要求1到24中任一项所述的多核苷酸，其中所述ORF的重复序列含量为22％
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27％，如22％
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23％、22.3％
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23％、23％
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24％、24％
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25％、25％
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26％或26％
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27％。26.根据权利要求1到25中任一项所述的多核苷酸，其中所述多肽的长度为30个氨基酸，任选地其中所述多肽的长度为至少50个氨基酸。27.根据权利要求1到26中任一项所述的多核苷酸，其中所述多肽的长度为至少100个氨基酸。28.根据权利要求1到27中任一项所述的多核苷酸，其中所述多肽的长度小于或等于5000个氨基酸。29.根据权利要求1到28中任一项所述的多核苷酸，其中所述多肽包括与SEQ ID NO:6
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10、29、46、69
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73、90
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93、96
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99、102
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105、108
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111、114
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117、120
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123、126
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129或134
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143中的任一个具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％同一性的序列。30.根据权利要求1到29中任一项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸包括与SEQ ID NO:16
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20、78
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80、194
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197或200
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201中的任一个具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％同一性的序列。31.根据权利要求1到30中任一项所述的多核苷酸，其中所述ORF对RNA引导的DNA结合剂进行编码。32.根据权利要求31所述的多核苷酸，其中所述RNA引导的DNA结合剂具有双链核酸内切酶活性。33.根据权利要求31所述的多核苷酸，其中所述RNA引导的DNA结合剂具有切口酶活性。34.根据权利要求31所述的多核苷酸，其中所述RNA引导的DNA结合剂包括dCas DNA结合结构域。35.根据权利要求1到34中任一项所述的多核苷酸，其中所述ORF对酿脓链球菌
(S.pyogenes)Cas9进行编码。36.根据权利要求1到35中任一项所述的多核苷酸，其中所述ORF对核酸内切酶进行编码。37.根据权利要求1到36中任一项所述的多核苷酸，其中所述ORF对丝氨酸蛋白酶抑制剂或Serpin家族成员进行编码，任选地其中所述ORF对Serpin家族A成员1进行编码。38.根据权利要求1到37中任一项所述的多核苷酸，其中所述ORF对以下进行编码：羟化酶；氨甲酰转移酶；葡糖神经酰胺酶；半乳糖苷酶；脱氢酶；受体；或神经递质受体。39.根据权利要求1到38中任一项所述的多核苷酸，其中所述ORF对以下进行编码：苯丙氨酸羟化酶；鸟氨酸氨甲酰转移酶；延胡索酰乙酰乙酸水解酶；葡糖神经酰胺酶β；α
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半乳糖苷酶；运甲状腺素蛋白；甘油醛
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磷酸脱氢酶；γ
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氨基丁酸(GABA)受体亚基(如GABA A型受体δ亚基)。40.根据权利要求1到39中任一项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸进一步包括与SEQ ID NO:177
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181或190
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192中的任一个具有至少90％同一性的5'UTR；和/或与SEQ ID NO:182
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186或202
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204中的任一个具有至少90％同一性的3'UTR。41.根据权利要求1到40中任一项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸进一步包括选自帽0、帽1和帽2的5'帽。42.根据权利要求1到41中任一项所述的多核苷酸，其中所述开放阅读框具有增加所述多核苷酸在哺乳动物中的翻译的密码子。43.根据权利要求1到42中任一项所述的多核苷酸，其中经编码的多肽包括核定位信号(NLS)。44.根据权利要求43所述的多核苷酸...
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