Cdc37在类风湿关节炎预防或治疗方面的应用制造技术

本发明专利技术公开了Cdc37（细胞分裂周期蛋白37）作为类风湿关节炎的预防及治疗靶点方面的应用。本发明专利技术还公开了Cdc37基因的抑制剂在制备预防或治疗类风湿关节炎药物方面的应用。Cdc37基因的抑制剂降低Cdc37在FLS中的表达，进而抑制FLS的增殖，并减弱FLS的炎症反应和迁移能力，从而达到预防/治疗RA的效果。本发明专利技术提供了Cdc37作为类风湿关节炎的预防及治疗靶点的应用，首次发现Cdc37在RA滑膜组织中高表达，抑制Cdc37可明显抑制FLS的增殖，并减弱FLS的炎症反应和迁移能力。Cdc37有作为RA患者特异性诊疗靶标的巨大潜能，并为研发新的抗RA药物提供理论依据。提供理论依据。提供理论依据。

【技术实现步骤摘要】
Cdc37在类风湿关节炎预防或治疗方面的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，涉及Cdc37(细胞分裂周期蛋白37)在类风湿关节炎预防或治疗方面的应用，具体涉及Cdc37作为类风湿关节炎的预防及治疗靶点方面的应用、Cdc37基因的抑制剂在制备预防或治疗类风湿关节炎药物方面的应用、Cdc37基因的抑制剂在制备预防或治疗类风湿关节炎药物方面的应用、Cdc37在筛选类风湿关节炎预防/治疗药物方面应用。

技术介绍

[0002]类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis，RA)是一种累及周围关节为主的多系统炎症性自身免疫疾病。RA病情顽固，致残率极高，进展至后期严重影响日常生活及工作能力，是造成我国劳动力丧失和致残的主要疾病之一。多种类型的细胞，如成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)和巨噬细胞，都参与了RA的慢性炎症过程。既往研究表明，RA关节中促炎细胞因子激活的FLS具有与肿瘤细胞相同的增殖能力，这是RA细胞异常增殖的发病机制之一。FLS分泌的细胞因子和其他因子，如白细胞介素(IL)
‑
6、IL
‑
1β、基质金属蛋白酶(MMP)
‑
3和MMP
‑
9，被认为在持续的炎症、滑膜增生和关节破坏发展中起着主要作用。目前其确切病因尚不清楚。RA的致炎过程极为复杂，是由多种细胞因子、黏附分子和趋化因子等参与的复杂的免疫炎症过程，对于RA的生物治疗，近年来取得了充足的发展，但其疗效仍十分有限。因此，寻找RA特异性预防/治疗靶点势在必行。
[0003]细胞分裂周期蛋白37(Cdc37)作为分子伴侣参与许多生理过程，例如细胞周期进程，细胞信号传导，细胞增殖。Cdc37招募不稳定的激酶到Hsp90，并调节细胞信号通路，如已被证明与RA的发生密切相关的ERK和PI3K/AKT信号通路，然而，Cdc37在RA中的生物学功能尚未见报道。若能将Cdc37作为治疗RA的特异性靶点，并研制相应的药物，将对RA的诊疗具有重要意义。

技术实现思路

[0004]专利技术目的：针对现有技术中存在问题或不足，本专利技术提供Cdc37(细胞分裂周期蛋白37)在类风湿关节炎预防或治疗方面的应用，具体涉及Cdc37作为类风湿关节炎的预防及治疗靶点方面的应用、Cdc37基因的抑制剂在制备预防或治疗类风湿关节炎药物方面的应用、Cdc37基因的抑制剂在制备预防或治疗类风湿关节炎药物方面的应用、Cdc37在筛选类风湿关节炎预防/治疗药物方面应用。
[0005]为实现上述专利技术目的，本专利技术的实施例提供Cdc37作为类风湿关节炎的预防及治疗靶点方面的应用。
[0006]本专利技术的实施例还提供Cdc37基因的抑制剂在制备预防或治疗类风湿关节炎药物方面的应用。
[0007]进一步的，Cdc37基因的抑制剂降低Cdc37在FLS中的表达，进而抑制FLS的增殖，并减弱FLS的炎症反应和迁移能力，从而达到预防/治疗RA的效果。
[0008]进一步的，所述Cdc37基因的抑制剂选自Cdc37基因特异性的Cdc37
‑
siRNA。
[0009]优选的，所述Cdc37
‑
siRNA的序列如下：
[0010]Cdc37
‑
siRNA正义链序列为5'
‑
CGAAUAGAGAAGGCCAUGATT
‑
3'；
[0011]Cdc37
‑
siRNA反义链序列为5'
‑
UCAUGGCCUUCUCUAUUCGTT
‑
3'。
[0012]本专利技术的实施例还提供一种诊断类风湿关节炎的试剂或试剂盒，其特征在于，包括对Cdc37具有检测特异性的抗体、免疫组化的试剂盒。
[0013]本专利技术的实施例还提供Cdc37在筛选类风湿关节炎预防/治疗药物方面应用，其特征在于，筛选采用检测Cdc37表达量的试剂或试剂盒；所采用的生物样品为滑膜组织。
[0014]本专利技术的实施例还提供一种Cdc37蛋白的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采用滑膜组织及FLS的提取，(2)石蜡切片的制备，(3)蛋白裂解法获取全蛋白，蛋白浓度的测定，利用免疫蛋白印迹法和免疫组化检测Cdc37的表达。
[0015]本专利技术的实施例另外还提供一种Cdc37基因在制备类风湿关节炎靶向治疗制剂中的应用，其特征在于，类风湿关节炎靶向治疗制剂通过制备Cdc37特异性干扰序列获得，Cdc37特异性干扰序列用于敲低Cdc37在细胞中表达。
[0016]本专利技术的上述技术方案的有益效果如下：本专利技术提供了Cdc37在RA预防/治疗药物中的应用。本专利技术的实施例研究证实：Cdc37在RA滑膜组织中表达明显上升，本专利技术的Cdc37特异性干扰序列显著降低FLS中Cdc37的表达，同时明显抑制FLS的增殖、炎症反应、迁移能力。本专利技术首次验证了Cdc37在RA中的表达及生物学功能，此发现将一步完善RA发病机制的研究。本专利技术为研发治疗RA药物提供了新的理论依据，以Cdc37作为药物靶点，筛选出Cdc37特异性抑制剂作为RA预防/治疗的候选药物，为临床上提高RA治疗效果奠定基础。
附图说明
[0017]图1为本专利技术的实施例1中建立胶原诱导的关节炎模型(Collagen
‑
Induced Arthritis；CIA)，在加强免疫后第2天对大鼠进行关节炎评分情况图。
[0018]图2为本专利技术的实施例2中提取原代CIA
‑
FLS进行培养，Cdc37表达情况统计图。
[0019]图3为本专利技术的实施例2中使用Cdc37
‑
siRNA抑制Cdc37的表达后，EdU染色和流式细胞术检测CIA
‑
FLS增殖情况图。
[0020]图4为本专利技术的实施例3中采用qPCR方法检测TNF
‑
α处理后CIA
‑
FLS中MMP
‑
3和MMP
‑
9表达的变化图。
具体实施方式
[0021]为使本专利技术要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合具体实施例进行详细描述。
[0022]实施例1：检测胶原诱导的关节炎模型中的Cdc37表达水平
[0023]一、建立胶原诱导的关节炎模型：
[0024]1‑
1、将动物随机分为两组(对照组和实验组)。对照组(n＝10)未进行任何实验操作，同时实验组(n＝10)用不完全弗氏佐剂和牛II型胶原蛋白以1：1的比例乳化。最后，通过皮内注射，将200ul的混合物注入大鼠尾根部。
[0025]1‑
2、7天后，以相同的方式在相同部位注射100ul的免疫增强剂。28天后，在南通大
学实验动物中心大鼠手术室腹腔注射300mg/kg水合氯醛麻醉。腹腔注射10％水合氯醛后，均未出现腹膜炎、疼痛或不适的迹象。
[0026]二、采用关节炎指数本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.Cdc37（细胞分裂周期蛋白37）作为类风湿关节炎的预防及治疗靶点方面的应用。2.Cdc37基因的抑制剂在制备预防或治疗类风湿关节炎药物方面的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，Cdc37基因的抑制剂降低Cdc37在FLS中的表达，进而抑制FLS的增殖，并减弱FLS的炎症反应和迁移能力，从而达到预防/治疗RA的效果。4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述Cdc37基因的抑制剂选自Cdc37基因特异性的Cdc37
‑
siRNA。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述Cdc37
‑
siRNA的序列如下：Cdc37
‑
siRNA 正义链序列为5'
‑
CGAAUAGAGAAGGCCAUGATT
‑
3'；Cdc37
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐华，陈民浩，孙魏巍，王友华，
申请(专利权)人：南通大学附属医院，
类型：发明
国别省市：