确定胃癌极早期发生风险及评估胃癌前病变进展风险的分子标志及其在诊断试剂盒中的应用制造技术

本发明专利技术人在其前期工作(专利号：202080001970.7)的基础上，进一步发现特异标记胃癌极早期细胞的分子标志物(KRT7,KLK10,LAMC2)，制备标志物单克隆抗体，并将其应用到制备基于胃组织或血液确定胃癌或其他消化道肿瘤极早期发生风险的试剂盒中。标志物在多中心318例回顾性队列中实施表明：1)对低级别异型增生进展风险的整体预测准确率达86％，AUC值达0.87；2)准确率与低级别异型增生进展时间密切相关，在胃癌发生前6个月准确率提升至95％，可前移胃癌早诊窗口平均10个月；3)标志物对胃早癌的诊断准确率超97％。标志物还可用于区分胃癌术后复发风险。本发明专利技术可用于确定胃癌及其他消化道肿瘤极早期发生风险，也可作为上述消化道肿瘤极早期防治的干预靶点，应用前景良好。景良好。景良好。

【技术实现步骤摘要】
确定胃癌极早期发生风险及评估胃癌前病变进展风险的分子标志及其在诊断试剂盒中的应用


[0001]本专利技术涉及一种用于辅助确定胃癌及其他消化道肿瘤极早期发生风险以及评估低级别异型增生等胃癌前病变进展风险的标志物组合及其测定系统。

技术介绍

[0002]我国胃癌新发病例占全球四成以上，胃癌早诊意义重大。肠型胃癌作为一种主要的胃癌亚型，其发生会经历异型增生等一系列癌前病变的过程。评估胃癌前病变向胃癌的进展风险、实现胃癌的极早诊断对于胃癌的防治具有重要的意义。
[0003]胃炎癌转化时程长，难以界定胃炎癌转化的关键转化点、亦即“癌变起始点”，这是胃癌极早诊断的关键难点。专利技术人前期通过建立国际首个胃炎癌转化单细胞图谱，发现了一群在胃低级别异型增生阶段开始出现、具有高度癌变风险的胃癌极早期细胞，并将这类细胞作为诊断极早期胃癌的标志[1][2]。发掘胃癌极早期细胞的分子特征，进而建立特异识别胃癌极早期细胞的诊断系统，有望精准评估异型增生等胃癌前病变的进展风险、实现胃癌的极早诊断。
[0004]消化系统其他器官如肠、食管以及胰腺中肿瘤的发生也会经历系列癌前病变的过程。以胃癌极早期细胞相关分子特征为切入点，有望建立消化系统癌症极早诊断的共性方式，对消化系统肿瘤防治也具有十分重要的意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供了一种检测胃癌极早期细胞标志物分子组合(包括KLK10,KRT7以及LAMC2)表达水平的试剂在制备用于评估低级别异型增生向胃癌进展风险及确定胃癌极早期发生风险的应用。其中，标志物组合包含KRT7，KLK10以及LAMC2。本专利技术将上述分子组合在低级别异型增生阶段所标记的细胞定义为胃癌极早期细胞，并将胃癌极早期细胞出现的阶段定义为胃癌极早期阶段。该阶段是低级别异型增生等胃癌前病变向胃癌转化的关键时点，也就是癌变起始点。通过评估胃癌极早期细胞标志物分子组合的表达水平，定量样本中胃癌极早期细胞的含量，进而作为评估低级别异型增生向胃癌进展风险评估以及胃癌极早期诊断的重要依据。
[0006]为了提高标志物分子的特异性，本专利技术进一步制备了相关单克隆抗体，可以更特异地从临床样本中检测出标志物分子的表达。以上述抗体为核心，本专利技术研制了一套用以从临床组织样本中检测评估胃癌极早期细胞含量的试剂盒，并开发了一套用以精准确定胃癌极早期发生风险的系统，有望为胃癌等消化系统肿瘤患者采取相关治疗措施或决策提供有效依据，临床应用前景良好。
[0007]根据本专利技术的一个方面，提供了检测标志物组合的表达水平的试剂在制备确定极早期胃癌诊断的产品中应用，其中所述标志物组合成分包括KLK10、KRT7、LAMC2。组合的方式包括：1)KLK10与LAMC2；
[0008]2)KRT7与LAMC2；3)KRT7、KLK10与LAMC2。
[0009]根据本专利技术的另一个方面，所提供的试剂包括自主制备的KLK10和LAMC2单克隆抗体。
[0010]其中，KLK10单克隆抗体的位点序列为：AEAALLPQNDTRLDPEAYGSPCARGSQPWQVSLFNGLSFHCAGVLVDQSWVLTAAHCGNK
[0011]PLWARVGDDHLLLLQGEQLRRTTRSVVHPKYHQGSGPILPRRTDEHDLMLLKLARPVVLG
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[0013]NNMICAGLDRGQDPCQSDSGGPLVCDETLQGILSWGVYPCGSAQHPAVYTQICKYMSWINKVIRSN，
[0014]LAMC2的单克隆抗体的位点序列为：
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测一种胃癌极早期细胞标志物分子组合在来自被检测者的胃组织或血清样品中的表达水平的试剂在制备用于确定胃低级别异型增生向胃癌进展的风险和/或用于确定胃癌极早期发生风险的产品上的用途，其特征在于：所述极早期细胞胃癌极早期细胞标志物分子组合包含从下列胃癌极早期细胞标志物分子组合中选出的一种：1)KLK10与LAMC2；2)KRT7与LAMC2；3)KRT7、KLK10与LAMC2。2.根据权利要求1所述的应用，其中将所述极早期细胞胃癌极早期细胞标志物分子组合在低级别异型增生样本中所标记的细胞定义为胃癌极早期细胞，并将胃癌极早期细胞出现的阶段定义为胃癌极早期阶段，通过评估所述胃癌极早期细胞标志物分子组合的表达水平定量待测样本中胃癌极早期细胞的含量。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述试剂包括KLK10和LAMC2单克隆抗体，其中，KLK10单克隆抗体的位点序列为：AEAALLPQNDTRLDPEAYGSPCARGSQPWQVSLFNGLSFHCAGVLVDQSWVLTAAHCGNKPLWARVGDDHLLLLQGEQLRRTTRSVVHPKYHQGSGPILPRRTDEHDLMLLKLARPVVLGPRVRALQLPYRCAQPGDQCQVAGWGTTAARRVKYNKGLTCSSITILSPKECEVFYPGVVTNNMICAGLDRGQDPCQSDSGGPLVCDETLQGILSWGVYPCGSAQHPAVYTQICKYMSWINKVIRSN，LAMC2单克隆抗体的位点序列为：>sp|Q13753|22
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1193TSRREVCDCNGKSRQCIFDRELHRQTGNGFRCLNCNDNTDGIHCEKCKNGFYRHRERDRCLPCNCNSKGSLSARCDNSGRCSCKPGVTGARCDRCLPGFHMLTDAGCTQDQRLLDSKCDCDPAGIAGPCDAGRCVCKPAVTGERCDRCRSGYYNLDGGNPEGCTQCFCYGHSASCRSSAEYSVHKITSTFHQDVDGWKAVQRNGSPAKLQWSQRHQDVFSSAQRLDPVYFVAPAKFLGNQQVSYGQSLSFDYRVDRGGRHPSAHDVILEGAGLRITAPLMPLGKTLPCGLTKTYTFRLNEHPSNNWSPQLSYFEYRRLLRNLTALRIRATYGEYSTGYIDNVTLISARPVSGAPAPWVEQCICPVGYKGQFCQDCASGYKRDSARLGPFGTCIPCNCQGGGACDPDTGDCYSGDENPDIECADCPIGFYNDPHDPRSCKPCPCHNGFSCSVMPETEEVVCNNCPPGVTGARCELCADGYFGDPFGEHGPVRPCQPCQCNNNVDPSASGNCDRLTGRCLKCIHNTAGIYCDQCKAGYFGDPLAPNPADKCRACNCNPMGSEPVGCRSDGTCVCKPGFGGPNCEHGAFSCPACYNQVKIQMDQFMQQLQRMEALISKAQGGDGVVPDTELEGRMQQAEQALQDILRDAQISEGASRSLGLQLAKVRSQENSYQSRLDDLKMTVERVRALGSQYQNRVRDTHRLITQMQLSLAESEASLGNTNIPASDHYVGPNGFKSLAQEATRLAESHVESASNMEQLTRETEDYSKQALSLVRKALHEGVGSGSGSPDGAVVQGLVEKLEKTKSLAQQLTREATQAEIEADRSYQHSLRLLDSVSRLQGVSDQSFQVEEAKRIKQKADSLSSLVTRHMDEFKRTQKNLGNWKEEAQQLLQNGKSGREKSDQLLSRANLAKSRAQEALSMGNATFYEVESILKNLREFDLQVDNRKAEAEEAMKRLSYISQKVSDASDKTQQAERALGSAAADAQRAKNGAGEALEISSEIEQEIGSLNLEANVTADGALAMEKGLASLKSEMREVEGELERKELEFDTNMDAVQMVITEAQKVDTRAKNAGVTIQDTLNTLDGLLHLMDQPLSVDEEGLVLLEQKLSRAKTQINSQLRPMMSELEERARQQRGHLHLLET
SIDGILADVKNLENIRDNLPPGCYNTQALEQQ。4.检测一种胃癌极早期细胞标志物分子组合在来自被检测者的组织或血液样品中的表达水平的试剂在制备用于确定被检测者罹患早期胰腺癌、肠癌和/或食管癌的风险的产品上的用途，其特征在于：所述胃癌极早期细胞标志物分子组合包含从下列胃癌极早期细胞标志物分子组合中选出的一种：1)KLK10与LAMC2；2)KRT7与LAMC2；3)KRT7、KLK10与LAMC2。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述试剂包括KLK10和LAMC2单克隆抗体，其中，KLK10单克隆抗体的位点序列为：AEAALLPQNDTRLDPEAYGSPCARGSQPWQVSLFNGLSFHCAGVLVDQSWVLTAAHCGNKPLWARVGDDHLLLLQGEQLRRTTRSVVHPKYHQGSGPILPRRTDEHDLMLLKLARPVVLGPRVRALQLPYRCAQPGDQCQVAGWGTTAARRVKYNKGLTCSSITILSPKECEVFYPGVVTNNMICAGLDRGQDPCQSDSGGPLVCDETLQGILSWGVYPCGSAQHPAVYTQICKYMSWINKVIRSN。6.检测一种胃癌极早期细胞标志物分子组合在胃组织样品中的表达水平的试剂在制备用于确定胃癌术后复发风险的产品上的用途，其特征在于：所述胃癌极早期细胞标志物分子组合包含从下列胃癌极早期细胞标志物分子组合中选出的一种：1)KLK10与LAMC2；2)KRT7与LAMC2；3)KRT7、KLK10与LAMC2。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述试剂包括KLK10和LAMC2单克隆抗体，其中，KLK10单克隆抗体的位点序列为：AEAALLPQNDTRLDPEAYGSPCARGSQPWQVSLFNGLSFHCAGVLVDQSWVLTAAHCGNKPLWARVGDDHLLLLQGEQLRRTTRSVVHPKYHQGSGPILPRRTDEHDLMLLKLARPVVLGPRVRALQLPYRCAQPGDQCQVAGWGTTAARRVKYNKGLTCSSITILSPKECEVFYPGVVTNNMICAGLDRGQDPCQSDSGGPLVCDETLQGILSWGVYPCGSAQHPAVYTQICKYMSWINKVIRSN，LAMC2单克隆抗体的位点序列为：>sp|Q13753|22
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【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书五页说明书七页附图三页，
申请(专利权)人：清华大学，
类型：发明
国别省市：