一种类诺卡氏菌、其分离方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种类诺卡氏菌，其微生物学分类命名为类诺卡氏菌ST46，拉丁文学名为Nocardioides sp.；其16S rDNA部分序列如序列表所示；其保藏编号为CGMCC 4.7686。本发明专利技术还公开了所述类诺卡氏菌培养分离方法和制备烟用香料的用途。本发明专利技术的类诺卡氏菌为新的菌株，用其制备得到的烟用香料用于卷烟加香中，烟香丰富性和烟气丰满度显著增加，烟气劲头明显提升的同时，余味和舒适性良好。余味和舒适性良好。余味和舒适性良好。

【技术实现步骤摘要】
一种类诺卡氏菌、其分离方法和应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及类诺卡氏菌、其分离方法和在烟草加香中的应用。

技术介绍

[0002]烟用香精香料是卷烟生产中不可缺少的添加剂，其应用更是与卷烟品牌的树立及卷烟风格的形成发展休戚相关。但随着企业卷烟自主调香步伐的加快，现有香精香料的种类、数量、品质等已不能满足调香技术人员的需求。香精香料研究人员开发更多可应用于自主调香的香精香料，满足企业调香工作的实际情况与需求，已成为卷烟调香和卷烟产品研发面临的现实课题。
[0003]利用微生物发酵技术制备烟用香料，其成本相对较低，不受气候、土地资源的限制，在缩短生产周期的同时，还可提高香料的产量和品质，属于对环境友好、资源节约型的产品技术研发，符合企业绿色、环保、安全、节约减排的发展要求，是烟用香料开发的一个重要方向。但目前能用于制备烟用香料的微生物优势菌株仍然较少，所开发香料的香型和功效作用等较为单调，所以对新型产香微生物开展持续筛选并进行开发应用，以满足烟用香精香料研发和生产需求，具有现实必要性。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于针对现有技术的不足，提供一种新的菌株类诺卡氏菌、其培养分离和鉴别方法；本专利技术的目的还在于提供所述的类诺卡氏菌发酵生物香料用于在烟草加香中的用途。
[0005]本专利技术通过以下技术方案实现上述目的。
[0006]除非另有说明，本专利技术中所采用的百分数均为质量百分数。
[0007]本专利技术第一方面公开了一种具有产香功能的微生物类诺卡氏菌ST46，其是从云南昆明烟草种植基地烟草土壤样品中分离得到的，对其进行了形态学、生理生化性质和16S rDNA分析，鉴定结果表明其属于类诺卡氏菌，微生物学分类命名为类诺卡氏菌ST46，拉丁文学名为Nocardioides sp.。申请人已于2020年9月25日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称：CGMCC)保藏，保藏编号为CGMCC 4.7686，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院中国科学院微生物研究所；于2020年10月15日给出存活证明。
[0008]本专利技术分离得到的类诺卡氏菌ST46菌株的主要形态特征和生理生化性质特征为：在大多数培养基上生长良好，在R2A琼脂培养基上，菌落边缘整齐，中间凸起，呈白色。明胶液化、L
‑
精氨酸双水解酶、V
‑
P反应、过氧化氢酶呈阳性，赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、硝酸盐还原、色安酸脱氨酶呈阴性，不产生硫化氢。能利用D
‑
纤维二糖、果糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘油、L
‑
组氨酸。细胞膜的极性脂成分主要包括磷脂酰甘油、双磷脂酰甘油和磷脂酰肌醇，细胞的呼吸醌为甲基萘醌
‑
8(H4)(MK
‑
8(H4))。
[0009]本专利技术所分离得到的类诺卡氏菌ST46的16S rDNA序列如序列表所示，具有1490bp
个碱基，该序列已递交国际核苷酸序列数据库(GenBank)，序列检索号：MT559270。
[0010]本专利技术第二方面公开了一种分离、培养和鉴别如本专利技术第一方面所述的类诺卡氏菌ST46的方法，包括以下步骤：
[0011]①
从自然环境中取土壤样品，加无菌水，摇床振荡，加无菌水继续稀释并涂布于LB平板培养基上进行培养，挑选单菌落，纯化，得到分离的微生物菌液，加入甘油、置于冰箱中备用；
[0012]②
将步骤
①
得到的微生物菌液接种到LB液体培养基中，摇床振荡，培养至菌液浓度为光密度OD＝2.0，制得种子液；
[0013]③
将步骤
②
制得的种子液接种在筛选培养基中，摇床振荡，筛选产生香气的微生物，构建系统发育树进行分子鉴别，得到所述的类诺卡氏菌。
[0014]优选地，步骤
①
中的土壤样品取自云南昆明烟草种植基地。
[0015]优选地，步骤
①
中摇床振荡温度为30℃，振荡速度180rpm，振荡时间30min，用无菌水稀释至10
‑1、10
‑2、10
‑3、10
‑4、10
‑5倍，在LB平板培养基上的培养温度为30℃，培养时间48h，甘油的加入量为分离得到的微生物菌液体积的20％，冰箱温度为
‑
80℃。
[0016]优选地，步骤
①
中摇床振荡温度为30℃，振荡速度180rpm，振荡时间30min，用无菌水稀释至10
‑1、10
‑2、10
‑3、10
‑4、10
‑5倍，在LB平板培养基上的培养温度为30℃，培养时间48h，甘油的加入量为分离得到的微生物菌液体积的20％，冰箱温度为
‑
80℃。
[0017]优选地，步骤
③
中筛选的培养基为R2A液体培养基。
[0018]本专利技术第三方面涉及一种利用本专利技术第一方面所述的类诺卡氏菌用于制备发酵生物香料的用途。
[0019]优选地，类诺卡氏菌用于制备发酵生物香料，包括如下步骤：
[0020]将类诺卡氏菌扩大培养后接种于发酵培养基中，28℃下摇瓶培养7天后，发酵液经离心或抽滤，滤液在50～65℃条件下浓缩得到密度0.8～1.5g/cm3的浓缩发酵液；浓缩发酵液用浓度30～40％乙醇浸提，其中浓缩发酵液与乙醇的体积比为V:V＝1:20；冷藏静置沉淀4～8h后进行过滤，滤液在50～65℃条件下浓缩得到密度1.0～1.5g/cm3的黄褐色液体，即为发酵生物香料。
[0021]本专利技术第四方面公开了类诺卡氏菌制备得到的发酵生物香料用于烟草加香的用途。将得到的发酵生物香料加入到卷烟烟丝中能使卷烟烟香丰富性和烟气丰满度显著增加，烟气劲头明显提升的同时，余味和舒适性良好。
[0022]本专利技术具有以下有益效果：
[0023]1、本专利技术首次从云南昆明烟草种植基地烟草土壤样品中分离得到新的具有产香功能的试验菌种ST46，经形态学、生理生化性质和16S rDNA分析，鉴定结果表明该菌株是一种新的细菌，属于类诺卡氏菌，微生物学分类命名为类诺卡氏菌ST46，拉丁文学名为Nocardioidessp.。
[0024]2、本专利技术得到的类诺卡氏菌ST46，其发酵提取物可以制备成烟用香料。加入到卷烟烟丝中能使卷烟烟香丰富性和烟气丰满度显著增加，烟气劲头明显提升的同时，余味和舒适性良好。由类诺卡氏菌ST46发酵制备的香料非常适合卷烟加香，具有提升卷烟抽吸品质的用途。
附图说明
[0025]图1为本专利技术类诺卡氏菌ST46在R2A培养基上的电镜照片；
[0026]图2为本专利技术类诺卡氏菌ST46及部分相关菌株依据16S rDNA基因序列构建的系统发育树。
具体实施方式
[0027]以下通过实施例来详细说明本专利技术的技术方案，以下的实施例仅是示例性的，仅能用来解释和说明本专利技术的技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种类诺卡氏菌，其特征在于，其微生物学分类命名为类诺卡氏菌ST46，拉丁文学名为Nocardioides sp.；其16S rDNA部分序列如序列表所示；其保藏编号为CGMCC 4.7686。2.一种分离根据权利要求1所述类诺卡氏菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：
①
从自然环境中取土壤样品，加无菌水，摇床振荡，加无菌水继续稀释并涂布于LB平板培养基上进行培养，挑选单菌落，纯化，得到分离的微生物菌液，加入甘油、置于冰箱中备用；
②
将步骤
①
得到的微生物菌液接种到LB液体培养基中，摇床振荡，培养至菌液浓度为光密度OD＝2.0，制得种子液；
③
将步骤
②
制得的种子液接种在筛选培养基中，摇床振荡，筛选产生香气的微生物，构建系统发育树进行分子鉴别，得到所述的类诺卡氏菌。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤
①
中的土壤样品取自云南昆明烟草种植基地。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤
①
中摇床振荡温度为30℃，振荡速度180rpm，振荡时间30min，用无菌水稀释至10
‑1、10
‑2、10
‑3、10
...

【专利技术属性】
技术研发人员：高莉，段焰青，刘志华，刘秀明，李源栋，杜刚，刘晓飞，蒋举兴，郭青，胡瑞林，
申请(专利权)人：云南中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：