本发明专利技术公开了一种香柑内酯化合物的药物活性——抗胰腺癌活性，以期用于制备康胰腺癌的药物，属于植物有效成分分离领域和医药领域。本发明专利技术通过CCK
【技术实现步骤摘要】
香柑内酯作为活性成分在制备抗胰腺癌药物中的应用
[0001]本专利技术涉及一种香柑内酯化合物的药物活性——抗胰腺癌活性，以期用于制备康胰腺癌的药物，属于植物有效成分分离领域和医药领域。
技术介绍
[0002]胰腺癌（PC）具有很高的侵袭性和致命性，是目前已知预后最差的恶性肿瘤之一。近年来，我国胰腺癌的发病率呈上升趋势，其死亡率居恶性肿瘤的前10位，5年生存率只有10%。胰腺癌患者中大约有80%
‑
85%的患者无法手术切除或者已经发生转移，即使可以局部手术切除的患者，预后仍然很差，通过手术得到控制的患者只有10%~15%。药物治疗是胰腺癌治疗的主要手段之一，但由于耐药性和缺乏药物特异性，药物总体有效率不到20%。为了延长胰腺癌患者的生存期，迫切需要开发寻找更加安全有效的胰腺癌化疗药物。
[0003]天然产物作为药物的重要来源，在新药的发现和开发中发挥着重要的作用。60%以上的抗肿瘤药物与天然产物密切相关。因此，寻找天然活性化合物，发现新型抗胰腺癌药物，有助于推动寻找高效抗胰腺癌药物。香柑内酯，是从干燥成熟的花椒果中分离出来的天然甘松萜类化合物。其具体分离方法为：花椒干燥果皮用70%乙醇水溶液室温提取3次，每次7天；合并萃取液，减压除去溶剂，得到总萃取物；将总萃取物分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇提取，分别得到石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相；将得乙酸乙酯相减压浓缩，得到提取物；乙酸乙酯相萃取物通过硅胶柱色谱分离，石油醚/丙酮（20:1~ 0:1，v/v）梯度洗脱，共得到 15 种组分（Fr.1
‑
Fr.15）。其中Fr.8经甲醇重结晶得白色粉末，经制备型薄层层析（二氯甲烷
‑
乙酸乙酯，40:1）展开，得到的化合物即为香柑内酯，标记为ZB
‑
1。该化合物通过文献谱图比对确定为香柑内酯(Choi et al., 2012)。Choi, J.Y., Kim, H.M., Lee, J.M., et al., 2012. Antibacterial activity of Zanthoxylum schinifolium. Nat. Prod. Sci. 18 (2), 137
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140。结构如下：。
[0004]香柑内酯是一种重要的线型呋喃香豆素类化合物,是一种具有很强生物活性的天然产物，其对皮肤有光学活性，具有抗微生物活性和杀灭软体动物作用，临床上用于治疗银屑病。现代药理实验研究表明，香柑内酯对肿瘤、细胞增生也有一定的抑制活性，是一种潜在的抗肿瘤药物的中间体。然而，对于香柑内酯的抗胰腺癌活性尚未见报道。
技术实现思路
[0005]本专利技术的目的是提供一种花椒中香柑内酯的抗胰腺癌活性，以期用于制备治疗抗胰腺癌的药物。
[0006]下面通过通过CCK
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8法、抑制CFPAC
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1细胞迁移、诱导CFPAC
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1细胞凋亡实验，对于
香柑内酯类化合物ZB
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1的抗胰腺癌活性进行具体研究和分析。
[0007]、香柑内酯类化合物抑制胰腺癌细胞增殖活性本实验用人源胰腺癌细胞CAPAN
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2、CFPAC
‑
1、PANC
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1、SW1990细胞，取对数生长期的CAPAN
‑
2、CFPAC
‑
1、PANC
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1、SW1990细胞，接种于96孔板（每孔1
×
104个细胞），待细胞贴壁后，分别加入浓度范围为0.1
‑
100
ꢀµ
M梯度的待测化合物，培养72 h，然后每孔加入10
ꢀµ
L CCK
‑
8溶液继续培养4小时，振荡10 min，酶标仪450 nm测定吸光度值，采用CCK
‑
8法检测花椒中香柑内酯类化合物ZB
‑
1对胰腺癌细胞CAPAN
‑
2、CFPAC
‑
1、PANC
‑
1、SW1990细胞的增殖抑制作用，根据OD值计算SW1990胰腺癌细胞的存活率，如图1。
[0008]图1结果表明，化合物ZB
‑
1对胰腺癌细胞CAPAN
‑
2、CFPAC
‑
1、PANC
‑
1、SW1990具有增殖抑制作用，化合物ZB
‑
1的浓度分别为0.05
ꢀµ
M、0.5
ꢀµ
M、5
ꢀµ
M、50
ꢀµ
M。作用CAPAN
‑
2细胞72 h后，细胞存活率（%）分别为95.33
±
1.41、76.06
±
3.48、 63.46
±
1.55、38.24
±
1.81；作用CFPAC
‑
1细胞72 h后，细胞存活率分别为76.86
±
2.49、55.09
±
3.03、37.60
±
1.90、14.18
±
0.80；作用PANC
‑
1细胞72 h后，细胞存活率分别为83.84
±
1.28、70.5
±
4.14、55.74
±
2.66、35.72
±
4.65；作用SW1990细胞72 h后，细胞存活率分别为88.44
±
0.35、78.99
±
4.29、47.26
±
2.31、26.40
±
2.66。以上结果表明ZB
‑
1能够明显抑制胰腺癌细胞的增殖，其中，对CFPAC
‑
1细胞效果最显著。具有开发胰腺癌治疗药物的潜能。
[0009]、花椒中香柑内酯类化合物ZB
‑
1抑制CFPAC
‑
1细胞迁移 在六孔板背面用marker笔和无菌直尺划线，线与线之间相隔1cm，每孔均匀划5条直线。选用对数生长期的细胞，消化离心后，用完全培养基重悬细胞，细胞计数板计数细胞密度，使接种细胞数目为4
×
105/孔，将6孔板置于 5%CO2、37℃的饱和湿度无菌恒温孵育箱中培养过夜。用100μL枪头在6孔板孔细胞表面均匀划线，保证线条间距相等，划线过程中注意枪头与板面垂直。用PBS缓冲液小心清洗3次，去除划落的细胞及碎片。根据实验设计，加入不同浓度的化合物ZB
‑
1（5μM、10μM）处理细胞，将细胞置于培养箱中继续培养。按 0 h、48 h 在倒置显微镜下观察细胞迁移情况并拍照，如图2。
[0010]结果如图2所示，根据上述实验方法处理细胞后，加入完全培养基（阴性对照组）以及ZB
‑
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.香柑内酯作为活性成分在制备抗胰腺癌药物中的应用，其特征在于：所述香柑内酯的结构式如下：。2.如权利要求1所述香柑内酯作为活性成分在制备抗胰腺癌药物中的应用，其特征在于：以香柑内酯为...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨军丽，桑春艳，
申请(专利权)人：中国科学院兰州化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：
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