制备高纯度淫羊藿精油和酶法制备淫羊藿苷元的方法技术

本发明专利技术公开了一种制备高纯度淫羊藿精油和酶法制备淫羊藿苷元的方法，该方法采用超声波技术与亚临界R134a流体技术、分子蒸馏技术、真空减压沸腾提取技术、酶固定化技术、酶一锅法催化技术、大孔树脂纯化技术、重结晶技术及超临界CO2流体干燥技术和全自动控制技术相结合，在多者的协同作用下进行淫羊藿精油、淫羊藿总黄酮提取、酶解与纯化，实现了在同一装置内连续分步提取淫羊藿油和淫羊藿总黄酮提取液，提取液通过真空浓缩，制得淫羊藿总黄酮浸膏，浸膏通过酶解将淫羊藿总黄酮粗品转化为淫羊藿苷元粗品；利用本发明专利技术技术生产淫羊藿精油和淫羊藿苷元，资源利用度高、产品收率高、产品纯度高、残溶低、能耗低、环境污染小，适宜工业化规模生产。化规模生产。

【技术实现步骤摘要】
制备高纯度淫羊藿精油和酶法制备淫羊藿苷元的方法


[0001]本专利技术属于植物提取、酶解和纯化
，具体涉及一种制备高纯度淫羊藿精油和酶法制备淫羊藿苷元的方法。

技术介绍

[0002]淫羊藿，别名：三枝九叶草、仙灵脾、牛角花、三叉风、羊角风、三角莲，为属，约有50种，喜阴湿地带，一般生于山坡草丛中、水沟边、林下、灌丛中及岩边石缝中，目前尚未由人工引种栽培。淫羊藿是中国常用中药，具有很高的药用价值，补肾壮阳，祛风除湿。治阳痿不举，偏风不遂，小便淋沥，筋骨挛急，咳嗽，病后青盲，虚火牙痛，半身不遂，腰膝无力，风湿痹痛，四肢不仁。
[0003]淫羊藿中含淫羊藿挥发油、淫羊藿苷、淫羊藿次苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、生物碱、多糖等；挥发油中含棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、银杏醇、沉香醇/芳樟醇、紫罗兰酮、榄香烯等对人体有益的有效成分。
[0004]淫羊藿自古以来就以它的药用价值广泛而著名。其功效主要是补肾壮阳，祛风除湿。治阳痿不举，偏风不遂，小便淋沥，筋骨挛急，咳嗽，病后青盲，虚火牙痛，半身不遂，腰膝无力，风湿痹痛，四肢不仁。
[0005]①
《本经》：主阴痿绝伤，茎中痛。利小便，益气力，强志。
[0006]②
《别录》：坚筋骨。消瘰疬、赤痈；下部有疮，洗，出虫。
[0007]③
《日华子本草》：治一切冷风劳气，补腰膝，强心力，丈夫绝阳不起，女子绝阴无子，筋骨挛急，四肢不任，老人昏耄，中年健忘。
[0008]④
《医学入门》：补肾虚，助阳。治偏风手足不遂，四肢皮肤不仁。
[0009]现代研究证明，淫羊藿含有的淫羊藿油、淫羊藿苷、朝藿定A、B、C等药理活性成分；淫羊藿苷能增加心脑血管血流量、促进造血功能、免疫功能及骨代谢，具有补肾壮阳、抗衰老、抗肿瘤等功效。
[0010]淫羊藿苷元又名淫羊藿素、脱水淫羊藿素、阿可拉定，分子式：C21H20O6、分子量：368.38、CAS:38226
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7。是北京盛诺基医药科技有限公司正在进行临床III期研究的中药1类新药原料，前期研究表明淫羊藿苷元作为从中药淫羊藿提取的小分子，具有抗炎症、直接抑制肿瘤细胞生长和抗肿瘤细胞生长的免疫调节作用。
[0011]欧洲免疫学杂志曾在2019年第12期封面刊登淫羊藿苷元调节PD
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L1的论文。NF
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KB是细胞凋亡、抗炎症、抗感染等生物免疫反应的最重要信号传导通路的关键因子，而NF
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KB的活化和迁移受到IKK等复杂分子精细化的调节。
[0012]有关医疗科研单位合作应用生物化学方法结合分子靶标高通量筛选技术，发现淫羊藿苷元可以直接作用于NF
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KB信号通路中的IKKα、IKKβ，干预IKK 激酶复合物的生成，抑制NF
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KB从细胞质向细胞核迁移，从而下调免疫检查点配体分子PD
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L1的表达。该研究发现为进一步研究淫羊藿苷元的抗炎和免疫调节信号通路、抗肿瘤作用的机制和联合用药提供了重要的分子生物学依据，有望为发挥中药小分子淫羊藿苷元独特的免疫调节和联合治疗
肿瘤患者的临床研究提供更多创新思路及选择方案。
[0013]淫羊藿苷元可用于阳痿早泄，风湿麻痹，麻木拘挛，更年期高血压。淫羊藿苷元能增加心脑血管血流量，促进造血功能、免疫功能及骨代谢，具有抗衰老、抗肿瘤等功效。
[0014]淫羊藿传统的提取方法是以水煎法提取为主，但上述方法都存在不同程度的缺陷：水煎法效率低，能耗大、提取组分单一；近年来使用以乙醇
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水溶液作为提取溶剂，在微波加热的条件下提取干燥淫羊藿茎叶萃取技术。
[0015]中国专利申请201310367142《一种从淫羊藿中提取淫羊藿苷的方法》，该方法采用以乙醇水溶液作为提取溶剂，在微波加热的条件下提取干燥淫羊藿茎叶得到提取液A；然后进行真空浓缩获得浓缩液B；之后经微孔滤膜除去微粒杂质获得滤液C；再通过模拟移动床色谱进行分离纯化，得到富含淫羊藿苷的组分D；最后将组分D浓缩经喷雾干燥的方法获得含90％以上淫羊藿苷的成品。
[0016]中国专利2017103329777《一种酶法转化淫羊藿总黄酮制备淫羊藿苷元的方法》，该技术利用大肠杆菌重组菌发酵生产耐热α
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鼠李糖苷酶和耐热β
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葡萄糖苷酶，将淫羊藿总黄酮酶解为淫羊藿苷元。该方法具有反应速率高、反应转化率高的优点，但该技术反应温度高、酶不能重复利用、难于工业化规模生产的缺点，导致生产成本高。

技术实现思路

[0017]本专利技术的目的在于针对现有技术的不足，提供一种制备高纯度淫羊藿精油和酶法制备淫羊藿苷元的方法，该制备高纯度淫羊藿精油和酶法制备淫羊藿苷元的方法可以很好地解决上述问题。
[0018]为达到上述要求，本专利技术采取的技术方案是：提供一种制备高纯度淫羊藿精油和酶法制备淫羊藿苷元的方法，该制备高纯度淫羊藿精油和酶法制备淫羊藿苷元的方法包括以下步骤：
[0019]淫羊藿油的提取及纯化的步骤：将干燥后的淫羊藿粉碎至10～40目，装入亚临界釜，抽真空排除空气，以亚临界流体R134a为提取剂，并在超声波作用下对所述淫羊藿粉进行多次提取，分别得到脂溶性提取液和淫羊藿渣；将脂溶性提取液过滤后，送入解析釜解析分离，得到R134a流体和淫羊藿油粗品混合液；将淫羊藿油粗品混合液脱溶，制得淫羊藿油粗品；再将淫羊藿油粗品送入精制装置内脱胶、脱蜡、脱酸、脱色、脱除过氧化值，再送入分子蒸馏装置内精制，制得淫羊藿精油；
[0020]淫羊藿总黄酮提取、酶解与纯化的步骤：以提取淫羊藿油后的渣为原料，抽真空排除空气，以乙醇为提取剂，调PH4～6，在真空减压沸腾和超声波作用下，对淫羊藿渣进行提取、过滤、调PH7、真空浓缩、离心脱溶、回收溶剂，制得淫羊藿总黄酮浸膏；将淫羊藿总黄酮浸膏，用有机溶剂溶解后加入固定化α
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鼠李糖苷酶和固定化β
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葡萄糖苷/β
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木糖苷双功能酶，采用一锅法催化反应3h，反应结束后，反应液经过滤、回收固定化α
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鼠李糖苷酶和固定化β
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葡萄糖苷/β
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木糖苷双功能酶，制得反应液；将反应液过滤、真空浓缩、离心脱溶、回收溶剂，制得淫羊藿苷元粗品浸膏A；将淫羊藿苷元粗品浸膏A用乙酸乙酯萃取3次，萃取液经过滤、真空浓缩、离心脱溶、回收溶剂，制得淫羊藿苷元粗品浸膏B；将制得淫羊藿苷元粗品浸膏B用乙醇制作上柱液、调PH4～6、大孔树脂吸附、分别用去离子水、乙醇梯度洗脱、收集洗脱液、调PH7、真空浓缩、离心脱溶、回收溶剂，制得淫羊藿苷元浸膏；将淫羊藿苷浸
膏，用溶剂重结晶、过滤结晶体、真空浓缩、离心脱溶、回收溶剂，制得淫羊藿苷湿态晶体和母液浸膏；将淫羊藿苷湿态晶体和母液浸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种制备高纯度淫羊藿精油和酶法制备淫羊藿苷元的方法，其特征在于，包括以下步骤：淫羊藿油的提取及纯化的步骤：将干燥后的淫羊藿粉碎至10～40目，装入亚临界釜，抽真空排除空气，以亚临界流体R134a为提取剂，并在超声波作用下对所述淫羊藿粉进行多次提取，分别得到脂溶性提取液和淫羊藿渣；将脂溶性提取液过滤后，送入解析釜解析分离，得到R134a流体和淫羊藿油粗品混合液；将淫羊藿油粗品混合液脱溶，制得淫羊藿油粗品；再将淫羊藿油粗品送入精制装置内脱胶、脱蜡、脱酸、脱色、脱除过氧化值，再送入分子蒸馏装置内精制，制得淫羊藿精油；淫羊藿总黄酮提取、酶解与纯化的步骤：以提取淫羊藿油后的渣为原料，抽真空排除空气，以乙醇为提取剂，调PH4～6，在真空减压沸腾和超声波作用下，对淫羊藿渣进行提取、过滤、调PH7、真空浓缩、离心脱溶、回收溶剂，制得淫羊藿总黄酮浸膏；将淫羊藿总黄酮浸膏，用有机溶剂溶解后加入固定化α
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鼠李糖苷酶和固定化β
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木糖苷双功能酶，采用一锅法催化反应3h，反应结束后，反应液经过滤、回收固定化α
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木糖苷双功能酶，制得反应液；将反应液过滤、真空浓缩、离心脱溶、回收溶剂，制得淫羊藿苷元粗品浸膏A；将淫羊藿苷元粗品浸膏A用乙酸乙酯萃取3次，萃取液经过滤、真空浓缩、离心脱溶、回收溶剂，制得淫羊藿苷元粗品浸膏B；将制得淫羊藿苷元粗品浸膏B用乙醇制作上柱液、调PH4～6、大孔树脂吸附、分别用去离子水、乙醇梯度洗脱、收集洗脱液、调PH7、真空浓缩、离心脱溶、回收溶剂，制得淫羊藿苷元浸膏；将淫羊藿苷浸膏，用溶剂重结晶、过滤结晶体、真空浓缩、离心脱溶、回收溶剂，制得淫羊藿苷湿态晶体和母液浸膏；将淫羊藿苷湿态晶体和母液浸膏，分别送入超临界CO2流体干燥装置内进行干燥、脱残溶和灭菌，制得纯度≥98％的淫羊藿苷元晶体和纯度≥50％的淫羊藿苷元非晶粉末产品。2.根据权利要求1所述的制备高纯度淫羊藿精油和酶法制备淫羊藿苷元的方法，其特征在于：淫羊藿油的提取步骤具体如下：a、将干燥后的淫羊藿粉碎至10～40目，送入萃取釜内，抽真空排除空气，加入淫羊藿重量3～6倍的亚临界流体R134a为提取剂，并在超声波作用下对所述淫羊藿循环萃取3～5次，得到萃取液和淫羊藿渣；每次萃取完成后，抽真空脱溶，回收R134a蒸汽；b、将第1、2次的萃取液经三级过滤后，送入1号R134a萃取液暂存罐合并，将合并后的萃取液搅拌2～20min，再分别送入一、二级解析釜进行两级解析分离，得到R134a流体和淫羊藿油粗品混合液；将第3～5次的萃取液经过滤后，送入2号R134a萃取液暂存罐合并，合并后的萃取液送入到下一级萃取釜中参与下一次萃取；c、将步骤b制得的淫羊藿油粗品混合液输送至薄膜蒸发器脱溶，制得淫羊藿油粗品；d、将淫羊藿油粗品送入精制装置内脱胶、脱蜡、脱酸、脱色、脱除过氧化值，再送入分子蒸馏装置内精制，得到淫羊藿精油。3.根据权利要求2所述的制备高纯度淫羊藿精油和酶法制备淫羊藿苷元的方法，其特征在于：每次超声波处理的时间为10～40min；每次提取的温度为30～50℃、压力为0.8～1.2Mpa，提取时间为30～70min。一级分离釜解析分离R134a压力为5
×
105pa～1
×
104pa，分离温度为30～45℃；二级分离釜解析分离
R134a及乙醇压力为1
×
104pa～5
×
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‑5pa，分离温度为30～50℃；步骤b中，所述合并后的提取液的搅拌时间为5～10min。4.根据权利要求1所述的制备高纯度淫羊藿精油和酶法制备淫羊藿苷元的方法，其特征在于：淫羊藿总黄酮提取、酶解与纯化步骤具体如下：
ⅰ
、以淫羊藿油提取步骤中得到的淫羊藿渣为原料，抽真空排除空气，加入淫羊藿渣重量3～6倍乙醇为提取剂，调PH4～6，在真空减压、超声波作用下，对所述淫羊藿渣循环提取3～5次，将第1、2次的提取液经一级过滤后，送入1号乙醇提取液暂存釜罐合并；第3～5次的提取液经一级过滤后，送入2号乙醇提取液暂存釜罐合并，合并后的提取液送入到下一级提取釜中参与下一次提取；
ⅱ
、将1号乙醇萃取液暂存釜罐合并后的提取液送入过滤机组过滤，滤液调PH7、真空浓缩、离心脱溶、回收乙醇，得到淫羊藿总黄酮浸膏；
ⅲ
、将步骤
ⅱ
制得的淫羊藿总黄酮浸膏，用有机溶剂溶解后加入固定化α
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鼠李糖苷酶和固定化β
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葡萄糖苷/β
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木糖苷双功能酶，采用一锅法催化反应，反应结束后，反应液经过滤、回收固定化α
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L
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鼠李糖苷酶和固定化β
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葡萄糖苷/β
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木糖苷双功能酶，制得反应液；iv、将回收后的固定化α
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【专利技术属性】
技术研发人员：陈开云，冯成勇，
申请(专利权)人：陈开云，
类型：发明
国别省市：