一种动态范围可调的伏马菌素B1电化学传感器的制备方法及其应用技术

本发明专利技术属于生物传感器技术领域，涉及一种动态范围可调的伏马菌素B1电化学传感器制备方法及其应用。具体通过单链DNA自组装制备DNA四面体纳米结构，通过控制碱基数目调整四面体尺寸，实现探针在电极表面可控组装，提高检测灵敏度；同时利用FB1适配体作为消耗剂，通过调控适配体浓度进而实现对目标物的定制化检测。本发明专利技术中，引入FB1的适配体，实现目标物

【技术实现步骤摘要】
一种动态范围可调的伏马菌素B1电化学传感器的制备方法及其应用


[0001]本专利技术属于生物传感器
，具体涉及一种动态范围可调的伏马菌素B1电化学传感器制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]伏马菌素(Fumonisin，FB)是由串珠镰刀菌产生、由不同的多氢醇和丙三羧酸组成的结构类似的双酯化合物。目前发现的伏马菌素有FA1、FA2、FB1、FB2等11种，其中FB1是其主要组分，同时也是导致伏马菌素毒性作用的主要组分。伏马菌素具有一定的植物毒性，可干扰植物的正常生理代谢功能，引起植物细胞程序性死亡。其次伏马菌素会引起家畜急性中毒，对肝、肾、肺和神经系统均有毒害，具有潜在的致癌性，是目前国际上最受关注的真菌毒素之一。因此，对FB1的高灵敏、高选择性分析具有重要意义。
[0003]目前FB1的检测方法中，高效液相色谱串联质谱法具有精准度高、灵敏度高的特点，然而预处理繁琐且依赖专业精密仪器设备；免疫层析法具有检测速度快、操作简单等优点，但假阳性概率较高；酶联免疫法将抗原与抗体反应的特异性与酶对底物的高效催化作用结合起来，具备灵敏度高本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种动态范围可调的伏马菌素B1电化学传感器的制备方法，其特征在于，步骤如下：(1)DNA四面体纳米结构溶液的制备：取四种单链DNA，记为S1、S2、S3、S4，分别用TE缓冲液中稀释，得到四种TE稀释溶液；随后，将四种TE稀释溶液在TM缓冲液中稀释，得到四种TM稀释液，在TM稀释液中加入三(2
‑
羧乙基)膦；最后将四种单链DNA溶液按照等比例混合后的混合液，进行加热反应，加热反应后再进行降温反应，反应后得到DNA四面体纳米结构溶液，记为DTN溶液；(2)金电极的预处理：首先将金电极用氧化铝在麂皮上抛光，然后分别在乙醇和超纯水中超声处理；在H2SO4溶液中通入一段时间氮气，再将超声处理后的电极在通入氮气后的H2SO4溶液中进行循环伏安扫描，对电极进行电化学清洗，直至得到稳定的曲线；(3)将步骤(1)制备的DTN溶液滴加到步骤(2)处理的金电极表面，进行第一次孵育；之后用PBS缓冲液进行清洗；清洗后将巯基己醇再滴加在金电极表面，进行第二次孵育，以封闭金电极表面的非特异性活性位点；(4)然后将电极浸泡到亚甲基蓝溶液中一段时间；随后将FB1适配体溶液滴加在电极表面，进行孵育，孵育后得到电化学传感器。2.根据权利要求1所述的动态范围可调的伏马菌素B1电化学传感器的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述S1、S2、S3、S4的5'到3'端的序列依次为：S1、SH
‑
TATCACCAGGCAGTTGACAGTGTAGCAAGCTGTAATAGATGCGAGGGTCCAATAC；S2、SH
‑
TCAACTGCCTGGTGATAAAACGACACTACGTGGGAATCTACTATGGCGGCTCTTC；S3、SH
‑
TTCAGACTTAGGAATGTGCTTCCCACGTAGTGTCGTTTGTATTGGACCCTCGCAT；S4、ACATTCCTAAGTCTGAAACATTACAGCTTGCTACACGAGAAGAGCCGCCATAGTATTTTTAGATTGCACGGACTATCTAATTGAATAAGC；所述四种TE稀释溶液的浓度均为50μM；所述四种TM稀释液的浓度1～3μM；所述TCEP在四种TM稀释液中的终浓度均为3mM；所述加热反应的温度为95℃持续2min；所述降温反应是降至4℃，持续30s以上。3.根据权利要求1所述的动态范围可调的伏马菌素B1电化学传感器的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述超声的处理时间为30s；所述H2SO4溶液浓度为1M；所述通入氮气时间为20min；所述循环伏安扫描电位范围为
‑
0.2～1.6V，扫描速率为100mV s
‑1。4.根据权利要求1所述的动态范围可调的伏马菌素B1电化学传感器的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述DTN溶液滴加到金电极表面的用量为8μL；所述DTN溶液浓度为1～3μM；所述第一次孵育的温度为4℃，时间为2
‑
12h；所述MCH的浓度为1mM，滴加到金电极表面的用量为8μL；所述第二次孵育的温度为室温，时间为40min。5.根据权利要求4所述的动态范围可调的伏马菌素B1电化学传感器的制备方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘东，董娜，由天艳，孟淑云，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：