培养方法技术

提供能够在各自独立的状态下培养多个样品的新型培养方法。微生物(13)的培养方法使用在表面(3A)具有相互独立的多个孔(1)的板状的微室(3)。微生物(13)的培养方法具备如下工序：将含有凝胶温度为5℃以上且20℃以下的琼脂糖的液体培养基(11)和微生物(13)混合而得到混合物的工序；在表面(3A)朝上的状态下将混合物(15)内包于孔(1)中的工序；及，将在孔(1)中内包有混合物(15)的微室(3)在规定温度范围内保温的工序。温的工序。温的工序。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】培养方法


[0001]本公开涉及培养方法。

技术介绍

[0002]作为微生物的培养方法，例如已知以下的方法(参照非专利文献1～3)。
[0003]非专利文献1中公开了在深孔板中培养作为微生物的放线菌的培养方法。
[0004]非专利文献2中公开了将作为微生物的曲霉与培养基一起内包于氟系油内进行培养的培养方法。在该培养方法中，使用了油包水微滴(油包液滴)。
[0005]非专利文献3中公开了如下方法：设为用半透膜夹持形成有小孔的板状的装置的状态，摄取周围环境中的营养素而进行培养。
[0006]现有技术文献
[0007]非专利文献
[0008]非专利文献1：S.Siebenberg et al.Journal of Bioscience and Bioengineering2010.109(3).230
‑
234
[0009]非专利文献2：T.Beneyton et al.Scientific Reports 2016.7.27223
[0010]非专利文献3：D.Nichols et al.Applied and Environmental Microbiology2010.76(8).2445
‑
2450

技术实现思路

[0011]专利技术要解决的问题
[0012]然而，现有的培养方法中，在培养多个样品(微生物)时，作为在多个样品各自独立的状态下进行培养的方法，实际上并不能说是充分的，迫切希望新型的培养方法。
[0013]本专利技术是鉴于上述情况而完成的，目的在于提供能够在各自独立的状态下培养多个样品的新型培养方法。
[0014]用于解决问题的方案
[0015]本专利技术人等进行了深入研究，结果开发出了新型的微生物的培养方法。
[0016]此外发现，利用该方法能够解决现有方法中的问题，能够在各自独立的状态下培养多个样品。基于该成果，提供如下专利技术。
[0017]〔1〕一种培养方法，其为使用了在表面具有相互独立的多个孔的板状的微室的微生物的培养方法，所述培养方法具备如下工序：
[0018]将含有凝胶温度为5℃以上且20℃以下的琼脂糖的液体培养基和前述微生物混合而得到混合物的工序；
[0019]在前述表面朝上的状态下将温度高于前述琼脂糖的前述凝胶温度的前述混合物内包于前述孔中的工序；及
[0020]将在前述孔中内包有前述混合物的前述微室在规定温度范围内保温的工序。
[0021]专利技术的效果
[0022]本公开的微生物的培养方法中，使用具有相互独立的多个孔的板状的微室。在将微生物与琼脂糖一起内包于孔内的状态下进行培养。由于多个孔相互独立，因此可以在被内包于每个孔中的微生物彼此不混合、独立的状态下进行培养。
[0023]另外，液体培养基中含有凝胶温度为5℃以上且20℃以下的琼脂糖。因此，能够将混合物加热至微生物不死亡的温度而形成溶胶，且能够使该溶胶进入孔中，因此容易使混合物进入孔中。
附图说明
[0024]图1是示出微室的一例的立体图。
[0025]图2是示出孔的一例的截面图。
[0026]图3是说明混合工序的示意图。
[0027]图4是说明内包工序的示意图。
[0028]图5是说明保温工序的示意图。
[0029]图6是生长状态的确认方法的一例的示意图。
[0030]图7是培养时间为0小时的孔的观察图像。
[0031]图8是培养时间为0小时的孔的观察图像。
[0032]图9是培养时间为20小时的孔的观察图像。
[0033]图10是培养时间为20小时的孔的观察图像。
[0034]图11是培养时间为7天的孔的观察图像。
具体实施方式
[0035]此处，示出本公开优选的例子。
[0036]〔2〕根据〔1〕所述的培养方法，其中，在使前述混合物内包于前述孔中时，通过板构件将前述混合物的溶胶推入前述孔中。
[0037]通过利用板构件将混合物的溶胶推入孔中，由此能够使混合物充分地内包于孔中。
[0038]〔3〕根据〔1〕或〔2〕所述的培养方法，其中，前述孔的底面是平坦的，
[0039]在确认前述微生物的培养状态时，通过从前述微室的背面侧观察存在于前述底面的前述微生物来进行确认，
[0040]在从表面侧观察微生物时，在包含微生物的混合物的表面存在凹凸，因此有时难以进行观察。该构成中，由于从微室的背面侧观察存在于平坦的底面的微生物，因此容易进行观察。
[0041]以下对本公开进行详细说明。需要说明的是，表示“x～y”这一范围的标记只要没有特别声明，则x和y落入该范围内。即，对于数值范围使用“～”的记载时，只要没有特别声明，则包括下限值和上限值。例如，“10～20”这一记载中，既包括作为下限值的“10”、也包括作为上限值的“20”。即，“10～20”与“10以上且20以下”含义相同。
[0042]1.微生物13的培养方法的各术语的说明
[0043]本公开的微生物13的培养方法使用在表面3A具有相互独立的多个孔1的板状的微室3。微生物13的培养方法具备如下工序：将含有凝胶温度为5℃以上且20℃以下的琼脂糖
的液体培养基11和微生物13混合而得到混合物15的工序；在表面3A朝上的状态下将混合物15内包于孔1中的工序；及，将在孔1中内包有混合物15的微室3在规定温度范围内保温的工序。
[0044](1)微生物13
[0045]微生物13的种类没有特别限定。作为微生物13，例如可列举出放线菌、大肠杆菌(Escherichia coli)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)等细菌、霉菌和酵母等真菌、蓝藻(Cyanobacteria)等微藻类、盘蜷纲类(Labyrinthulea)等。
[0046](2)微室3
[0047]微室3是在表面3A具有多个作为凹陷的孔1的板状构件。
[0048]微室3的材质没有特别限定。作为材质，例如可适宜地使用有机硅树脂。作为有机硅树脂，没有特别限制，优选聚二甲基硅氧烷(PDMS)、聚甲基苯基硅氧烷、聚甲基氢硅氧烷、聚甲基甲氧基硅氧烷、聚甲基乙烯基硅氧烷等。这些有机硅树脂可以单独使用1种，也可以组合使用2种以上。聚二甲基硅氧烷(PDMS)是透明的，能够从微室3的背面3B侧容易地确认孔1内的微生物13的培养状态，故而特别优选。
[0049]微室3的平面形状和大小没有特别限定。
[0050]微室3的平面形状可以采用例如长方形、圆形等。
[0051]对于微室3的大小，其平面形状为长方形时，从处理性和生产率的观点出发，优选5mm
×
10mm以上，更优选7mm
×
12mm以上，进一步优选10mm
×
15mm以上。另一方面，从处理性和生产率的观点出发，微室3的大小优选3本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种培养方法，其为使用了在表面具有相互独立的多个孔的板状的微室的微生物的培养方法，所述培养方法具备如下工序：将含有凝胶温度为5℃以上且20℃以下的琼脂糖的液体培养基和所述微生物混合而得到混合物的工序；在所述表面朝上的状态下将温度高于所述琼脂糖的所述凝胶温度的所述混合物内包于所述孔中的工序；及，将在所述孔中内包有所述混合物...

【专利技术属性】
技术研发人员：竹内昌治，酒井香苗，
申请(专利权)人：丰田纺织株式会社，
类型：发明
国别省市：