一种松嫩盐单胞菌及其在盐渍化农田生产中的应用制造技术

本发明专利技术属于微生物应用技术与农业领域，具体涉及一种松嫩盐单胞菌菌株(Halomonassongnenensis)，以及在盐渍化农田生产中的应用。本发明专利技术公开的一种松嫩盐单胞菌菌株(Halomonas songnenensis)，该菌株于2020年7月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏号为CGMCC NO.20303，该菌株能够在高盐环境中促进小麦发芽，在盐渍化土壤中促进小麦生长。该菌株是在盐胁迫条件下，由盐渍化土壤中分离得到。该菌株菌落呈圆形，边缘不规则，不透明，黄色，菌体呈杆状，革兰氏染色阴性。本发明专利技术还公开了其核苷酸序列。该菌株能够在高盐环境中促进小麦发芽，在盐渍化农田小麦生产中增产达12.3％，应用效果显著。用效果显著。用效果显著。

【技术实现步骤摘要】
一种松嫩盐单胞菌及其在盐渍化农田生产中的应用


[0001]本专利技术属于微生物应用技术与盐渍化农业生产领域，具体涉及一种松嫩盐单胞菌 (Halomonas songnenensis)ZSC1菌株以及在盐渍化农田生产中的应用。

技术介绍

[0002]我国盐渍(碱)化土地资源丰富，其中具有农业利用潜力的约1333万公顷，占全国耕地面积的10％。近年来，国家对盐渍(碱)化土地资源科学、高效利用非常重视，中央 1号文件连续强调要加强盐渍(碱)化土地资源利用的科技创新，其改良利用对于提高我国农业生产能力、保障粮食安全、18亿亩耕地红线坚守具都有十分重要的作用。但，盐渍化土壤因其含盐量高、物理结构差、有机质含量低、微生物活性弱等特点，严重制约了土壤养分的有效性与农业生产能力、效益的提升。微生物是关键土壤过程的主要驱动者，进行盐渍化土壤改良，提高其生产能力的一条重要简捷途径就是提升微生物活性。
[0003]盐渍化地区生态环境脆弱，表层土壤可溶性盐含量0.5～3.0％，以氯化物为主，氯化物最高可占可溶性总盐量的80.0％左右，植被覆盖率低，外源有机质输入量少，是限制土壤微生物活性的关键因素。土壤微生物改良产品较多，而土壤盐度从0.5％升高到2.0％时，会严重扰乱非耐盐微生物的代谢活动，因此，在内陆地区广泛应用的相关菌剂，在盐渍化农区农业生产中则无法利用。通过微生物技术改良土壤，提升盐渍化农田生产能力，关键是要获得具有耐盐能力、能够适应盐渍化生境条件的功能菌株。目前，与盐渍化农业相关的高效、耐盐功能菌株还较少，通过微生物技术提升盐渍化农业生产能力及效益的研发工作迫在眉睫。

技术实现思路

[0004]为了解决上述的技术问题，本专利技术基于传统的功能微生物筛选方法，获得了一株耐盐促生菌，并进行了菌种鉴定，认定为(Halomonas songnenensis)ZSC1，该菌株在盐浓度为 0～15.0％的环境中能够降解纤维素，提高盐渍化土壤微生物活性、磷钾等养分的有效性，促进作物发芽及生长。
[0005]本专利技术的松嫩盐单胞菌(Halomonas songnenensis)ZSC1菌株，于2020年7月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏号为CGMCC NO.20303，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。该菌株在S
‑
G平板上培养3d的菌落直径2～3 mm，菌落呈圆形，边缘略不规则，不透明，黄色。
[0006]其细胞形态特征：菌体呈杆状，革兰氏染色阴性。
[0007]其生理生化特征：生长最适pH为7.2～7.7，NaCl耐受性在0～15.0％之间。
[0008]柠檬酸盐利用、V
‑
P实验阳性，吲哚实验、淀粉水解为阴性，能够利用麦芽糖产酸，不能利用葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖。
[0009]上述的松嫩盐单胞菌(Halomonas songnenensis)ZSC1菌株，在盐浓度为0.2～0.6％的环境中能够促进小麦发芽，在含盐量为0.2～0.4％的盐渍化土壤中能够促进小麦
生长，在 0.31％盐渍化农田土壤施用后，小麦生物量提高10.0％，产量提高12.3％。
[0010]松嫩盐单胞菌(Halomonas songnenensis)ZSC1菌株能够促进盐渍化土壤中小麦生长的一个重要机制是能够降解纤维素，提高了土壤微生物活性、磷钾养分的有效性。
[0011]本专利技术的有益效果在于，本专利技术提供的保藏编号为CGMCC NO.20303的松嫩盐单胞菌(Halomonas songnenensis)ZSC1，在盐浓度为0.2～0.6％的盐度环境中能够显著促进小麦发芽；在含盐量为0.2～0.4％土壤中能够促进小麦生长，在0.31％盐渍化农田土壤施用后，小麦生物量提高10.0％，产量提高12.3％。
附图说明
[0012]图1为实施例3，本专利技术的松嫩盐单胞菌(Halomonas songnenensis)ZSC1菌株在不同盐度液体培养基中的生长变化；
[0013]图2为实施例4接种ZSC1菌株对不同盐度条件下小麦发芽率的影响；
[0014]图3为实施例4不同盐渍化程度土壤接种ZSC1菌株对小麦生物量的影响；
[0015]图4为实施例7施用ZSC1菌株对小麦生物量与产量的影响。
具体实施方式
[0016]下面结合附图和具体实施方式来对本专利技术作更进一步的说明，以便本领域的技术人员更了解本专利技术，但并不以此限制本专利技术。
[0017]实施例1松嫩盐单胞菌(Halomonas songnenensis)ZSC1菌株的分离筛选
[0018]取10g滨海盐渍化土壤，该土壤中可溶性盐含量为1.2％，将该土壤加入装有100mL 无菌水的三角瓶中，高速振荡20min后，将土壤混合液按梯度进行稀释，选择浓度梯度为10
–2、 10
–3、10
–4、10
–5、10
–6的土壤混合液进行涂布，吸取100μL菌悬液涂布于10％氯化钠的LB 固体培养基中用于分离耐盐微生物。将平板倒置放入30℃恒温培养箱中培养48～96h，观察生长出的菌落。根据菌落形态、颜色以及大小的区别，挑取单个微生物菌落，之后进行多次纯化直至获得单克隆菌株，纯化获得的菌株用40％的甘油储存于
‑
80℃冰箱。
[0019]将筛选的单菌落接种到LB培养基中，培养至OD
600nm
为0.8左右，作为种子液，分别接种至装有吸水纸的培养皿和种植小麦盐渍化土壤中，分别测定小麦的发芽率、植株鲜重和干重，进行耐盐功能微生物的筛选，最终得到具有促生作用的耐盐菌株Halomonassongnenensis ZSC1。
[0020]实施例2松嫩盐单胞菌(Halomonas songnenensis)ZSC1菌株的16S rDNA基因序列测定
[0021]收集对数生长期的菌液1mL，提取基因组DNA，以基因组总DNA为模板，16S rRNA 基因通用引物，进行PCR扩增，扩增产物送上海生工生物科技有限公司进行测序。测序获得序列提交至NCBI进行Blast比对(https：//blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)，并使用MEGA 5进行系统发育树的构建。结果显示该菌株16S rRNA基因序列长度为1465bp，该序列与NCBI 数据库中所给出的Halomonas属中不同种的16S rRNA基因序列具有大于97％的相似性，其 16S rRNA基因序列如序列表中(SE Q ID NO:1)所示。系统发育分析表明，该菌株与 Halomonas songnenensis属于同一分支。因此，鉴定为Halomonas songnenensis。
[0022]实施例3松嫩盐单胞菌(Halomonas songnenensis)ZSC1菌株的耐盐性
[0023]利用无机盐培养基，添加0.1％酵母粉，设四个不同浓度梯度的NaCl处理：0、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种松嫩盐单胞菌，其特征在于：所述松嫩盐单胞菌(Halomonas songnenensis)ZSC1，该菌株于2020年7月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏号为CGMCC NO.20303。2.根据权利要求1所述松嫩盐单胞菌在盐渍化农田生产中的应用：所述的松嫩盐单胞菌(Halomonas songnenensis)ZSC1菌株，其特征在于，该菌株在盐浓度为0.2～0.6％的环境中能够促进小麦发芽，随着盐度增加，提高幅度显著增加，在0.6％盐度条件下，接种处理发芽率为未接种处理的2.7...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢文军，刘龙祥，许骥坤，尚帅，李佳楠，姚海燕，刘国利，
申请(专利权)人：青岛理工大学，
类型：发明
国别省市：