新型生长激素释放激素类似肽改构和二聚体化制备及其应用制造技术

本发明专利技术提供了人生长激素释放激素(hGHRH)类似肽的分子变构体和其二聚体在治疗GH缺乏症、不孕不育症、老年痴呆症、糖尿病和增强免疫力中的应用。本发明专利技术二聚体是两个相同含有单个半胱氨酸分子变构的hGHRH类似肽单体通过半胱氨酸形成的二硫键连接而成，并形成H型结构(分子内部单Ser

【技术实现步骤摘要】
新型生长激素释放激素类似肽改构和二聚体化制备及其应用


[0001]本专利技术属于医药生物领域，具体涉及多种人新型生长激素释放激素类似肽单体和二聚体制备及其治疗中的应用。

技术介绍

[0002]中枢性生长激素释放激素
‑
生长激素
‑
胰岛素样生长因子(GHRH
‑
GH
‑
IGFs)内分泌轴，调节机体细胞生长和性细胞生殖。人GHRH完整序列为hGHRH(1
‑
44)NH2，hGHRH(1
‑
29)为核心肽，具有51％生物活性。通过体外垂体保温或体内皮下注射，测定生长激素(GH)释放值来确定新型hGHRH类似肽及其二聚体的体外或体内活性。
[0003]新的研究发现，hGHRH分子对外周组织的作用与对中枢的作用机制有所不同，比如在中枢，下丘脑GHRH
‑
垂体GHRH受体
‑
垂体GH有轴特异效应，在成熟动物的卵巢或睾丸，虽然它们也含有GHRH、GHRH受体和GH分子信号，但是它们不一定产生这种轴特异效应。一些新型GHRH类似肽或其二聚体分子的体内注射会产生生殖细胞GHRH受体上调增加受孕率，而不会促进体内GH增加，显示受试成熟动物的生殖与GH没有直接的关系。在体外，这类肽(在体内不产生GH)的体外垂体保温会诱导垂体GH的分泌。因此，通过测定受试动物体内GH、体外垂体GH分泌和其代表性GHRH受试动物的怀孕率，体现GH与成熟动物生殖关系，显示这类肽在治疗上有新的可能性。
[0004]GHRH肽具有广泛药理活性，如治疗不孕不育症、调节免疫、老年痴呆症、促进伤口愈合、心肌细胞重构、提高睡眠质量、减肥或治疗糖尿病等。
[0005]虽然hGHRH类似物在生物医学和农学领域有着巨大的应用潜在，但是它们的短半衰期或低活性限制了它们的应用。结构
‑
活性关系表明，N
‑
末端1Y是GHRH体内垂体GH释放所必需的。1P
‑
GHRH显示体外高垂体GH释放，但体内没有GH释放。1F
‑
GHRH体内外显示极低GH释放。随着序列向C端延伸，其活性和半衰期都逐渐增加。当GHRH分子N末端两个氨基酸残基被血中氨基二肽酶(DPP
‑
4)切除，分子失去活性。hGHRH(1
‑
29)NH2的半衰期为13分钟，天然hGHRH(1
‑
44)NH2半衰期17分钟。到目前为止，hGHRH(1
‑
44)NH2是这些类似物中活性最强的。
[0006]许多蛋白质前体在内质网内需要与长脂肪链结合，增加成熟加工能力，或分布在细胞膜、内质网膜或高尔基体膜等部位的一些蛋白质分子会通过长脂肪酸链锚定到这些膜相系统上，以增加定位能力。这些脂肪酰化GHRH分子明显增加半衰期，同时成倍增加其分子活性。本专利技术利用这些技术，产生一系列新型长效GHRH分子，应用于不孕不育症、调节免疫、老年痴呆症、促进伤口愈合、心肌细胞重构、提高睡眠质量、减肥或糖尿病的治疗。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供生长激素释放激素(GHRH)类似肽单体。本专利技术的GHRH类似肽对主肽链的分子变构，一方面，在单体肽内部单个C
→
S或同型半胱氨酸(Hcy)
→
T代换，且对半胱氨酸在肽链中的位置进行了研究。另一方面，肽链中赖氨酸(K)的侧链ε
‑
氨基被谷氨酰基脂肪酸或谷氨酰基脂肪二酸或[2
×
AEEAC
‑
γ
‑
Glu(N
‑
α
‑
脂肪二酸)]取代基修饰。
[0008]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：一种生长激素释放激素(GHRH)类似肽单体，所述肽链上的丝氨酸S被半胱氨酸C取代，或苏氨酸T被同型半胱氨酸(Hcy)取代，且主肽链上的其中一个赖氨酸为侧链ε
‑
氨基上被谷氨酰基脂肪酸[γ
‑
Glu(N
‑
α
‑
脂肪酸)]或谷氨酰脂肪二酸[γ
‑
Glu(N
‑
α
‑
fatty diacid)]或[2
×
AEEAC
‑
γ
‑
Glu(N
‑
α
‑
脂肪二酸)]取代基修饰的赖氨酸。
[0009]优选地，所述类似肽单体的具体序列为以下任意一种：
[0010](1)(NH2)X1‑
X2‑
DAIFTNCY
‑
X
11
‑
X
12
‑
VLGQLSA
‑
X
20
‑
X
21
‑
LLQDIMSR
‑
NH2或；
[0011](2)(NH2)X1‑
X2‑
DAIFTNSY
‑
X
11
‑
X
12
‑
VLGQLCA
‑
X
20
‑
X
21
‑
LLQDIMSR
‑
NH2或；
[0012](3)(NH2)X1‑
X2‑
DAIFTNSY
‑
X
11
‑
X
12
‑
VLGQLSA
‑
X
20
‑
X
21
‑
LLQDIMCR
‑
NH2或；
[0013](4)(NH2)X1‑
X2‑
DAIF
‑
Hcy
‑
NSY
‑
X
11
‑
X
12
‑
VLGQLSA
‑
X
20
‑
X
21
‑
LLQDIMS
‑
X
29
‑
NH2或；
[0014](5)(NH2)X1‑
X2‑
DAIFTNCY
‑
X
11
‑
X
12
‑
VLGQLSA
‑
X
20
‑
X
21
‑
LLQDIMS
‑
X
29
‑
QQGESNQE
‑
X
38
‑
GA
‑
X
41
‑
A
‑
X
43
‑
本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种生长激素释放激素(GHRH)类似肽单体，其特征在于，所述类似肽单体的具体序列为以下任意一种：1)(NH2)X1‑
X2‑
DAIFTNCY
‑
X
11
‑
X
12
‑
VLGQLSA
‑
X
20
‑
X
21
‑
LLQDIMSR
‑
NH2或；2)(NH2)X1‑
X2‑
DAIFTNSY
‑
X
11
‑
X
12
‑
VLGQLCA
‑
X
20
‑
X
21
‑
LLQDIMSR
‑
NH2或；3)(NH2)X1‑
X2‑
DAIFTNSY
‑
X
11
‑
X
12
‑
VLGQLSA
‑
X
20
‑
X
21
‑
LLQDIMCR
‑
NH2或；4)(NH2)X1‑
X2‑
DAIF
‑
Hcy
‑
NSY
‑
X
11
‑
X
12
‑
VLGQLSA
‑
X
20
‑
X
21
‑
LLQDIMS
‑
X
29
‑
NH2或；5)(NH2)X1‑
X2‑
DAIFTNSY
‑
X
11
‑
X
12
‑
VLGQLCA
‑
X
20
‑
X
21
‑
LLQDIMS
‑
X
29
‑
QQGESNQE
‑
X
38
‑
GA
‑
X
41
‑
A
‑
X
43
‑
L
‑
NH2或；6)(NH2)X1‑
X2‑
DAIFTNSY
‑
X
11
‑
X
12
‑
VLGQLSA
‑
X
20
‑
X
21
‑
LLQDIMC
‑
X
29
‑
QQGESNQE
‑
X
38
‑
GA
‑
X
41
‑
A
‑
X
43
‑
L
‑
NH2或；7)(NH2)X1‑
X2‑
DAIFTNSY
‑
X
11
‑
X
12
‑
VLGQLSA
‑
X
20
‑
X
21
‑
LLQDIMS
‑
X
29
‑
QQGECNQE
‑
X
38
‑
GA
‑
X
41
‑
A
‑
X
43
‑
L
‑
NH2或；8)(NH2)X1‑
X2‑
DAIF
‑
Hcy
‑
NSY
‑
X
11
‑
X
12
‑
VLGQLSA
‑
X
20
‑
X
21
‑
LLQDIMS
‑
X
29
‑
QQGESNQE
‑
X
38
‑
GA
‑
X
41
‑
A
‑
X
43
‑
L
‑
NH2其中，X1为P；X2为A或α
‑
氨基异丁酸(αAib)；X
11
或X
12
或X
20
或X
21
或X
29
或X
38
或X
41
或X
43
为K，或为R，或为侧链ε
‑
氨基上谷氨酰脂肪酸[γ
‑
Glu(N
‑
α
‑
fatty acid)]或谷氨酰脂肪二酸[γ
‑
Glu(N
‑
α
‑
fatty diacid)]修饰的赖氨酸，或为侧链ε
‑
氨基上[2
×
AEEAC
‑
γ
‑
Glu(N
‑
α
‑
脂肪二酸)]修饰的赖氨酸；其中，当所述单体的具体序列为结构式1)时，具体为以下结构中的任一种：(1)(NH2)PADAIFTNCYRKVLGQLSA
‑
K[N
‑
ε
‑
(γGlu
‑
N
‑
α
‑
18CFA)]
‑
KLLQDIMSR
‑
NH2(2)(NH2)PADAIFTNCYRKVLGQLSAR
‑
K[N
‑
ε
‑
(γGlu
‑
N
‑
α
‑
20CFA)]
‑
LLQDIMSR
‑
NH2(3)(NH2)PADAIFTNCYRKVLGQLSA
‑
K[N
‑
ε
‑
(AEEA)2
‑
γGlu
‑
20CFDA]
‑
KLLQDIMSR
‑
NH2(4)(NH2)PADAIFTNCYRKVLGQLSAR
‑
K[N
‑
ε
‑
(AEEA)2
‑
γGlu
‑
20CFDA]
‑
LLQDIMSR
‑
NH2(5)(NH2)P
‑
Aib
‑
DAIFTNCYRKVLGQLSA
‑
K[N
‑
ε
‑
(γGlu
‑
N
‑
α
‑
20CFA)]
‑
KLLQDIMSR
‑
NH2(6)(NH2)P
‑
Aib
‑
DAIFTNCYRKVLGQLSAR
‑
K[N
‑
ε
‑
(γGlu
‑
N
‑
α
‑
20CFA)]
‑
LLQDIMSR
‑
NH2(7)(NH2)P
‑
Aib
‑
DAIFTNCYRKVLGQLSA
‑
K[N
‑
ε
‑
(AEEA)2
‑
γGlu
‑
20CFDA]
‑
RLLQDIMSR
‑
NH2(8)(NH2)P
‑
Aib
‑
DAIFTNCYRKVLGQLSA
‑
K[N
‑
ε
‑
(γGlu
‑
N
‑
α
‑
18CFA)]
‑
KLLQDIMSR
‑
NH2当所述单体的具体序列为结构式2)时，具体为以下结构中的任一种：(9)(NH2)PADAIFTNSYRKVLGQLCA
‑
K[N
‑
ε
‑
(γGlu
‑
N
‑
α
‑
18CFA)]
‑
KLLQDIMSR
‑
NH2(10)(NH2)PADAIFTNSYRKVLGQLCAR
‑
K[N
‑
ε
‑
(γGlu
‑
N
‑
α
‑
18CFA)]
‑
LLQDIMSR
‑
NH2(11)(NH2)PADAIFTNSYRKVLGQLCA
‑
K[N
‑
ε
‑
(γGlu
‑
N
‑
α
‑
20CFA)]
‑
KLLQDIMSR
‑
NH2(12)(NH2)PADAIFTNSYRKVLGQLCAR
‑
K[N
‑
ε
‑
(γGlu
‑
N
‑
α
‑
20CFA)]LLQDIMSR
‑
NH2(13)(NH2)PADAIFTNSYRKVLGQLCA
‑
K[N
‑
ε
‑
(AEEA)2
‑
γGlu
‑
20CFDA]
‑
KLLQDIMSR
‑
NH2(14)(NH2)PADAIFTNSYRKVLGQLCAR
‑
K[N
‑
ε
‑
(AEEA)2
‑
γGlu
‑
20CFDA]LLQDIMSR
‑
NH2(15)(NH2)P
‑
Aib
‑
DAIFTNSYRKVLGQLCAR
‑
K[N
‑
ε
‑
(γGlu
‑
N
‑
α
‑
18CFA)]
‑
LLQDIMSR
‑
NH2(16)(NH2)P
‑
Aib
‑
DAIFTNSYRKVLGQLCA
‑
K[N
‑
ε
‑
(γGlu
‑
N
‑
α
‑
18CFA)]
‑
KLLQDIMSR
‑
NH2(17)(NH2)P
‑
Aib
‑
DAIFTNSYRKVLGQLCA
‑
K[N
‑
ε
‑
(γGlu
‑
N
‑
α
‑
20CFA)]
‑
RLLQDIMSR
‑
NH2(18)(NH2)P
‑
Aib
‑
DAIFTNSYRKVLGQLCAR
‑
K[N
‑
ε
‑
(AEEA)2
‑
γGlu
‑
20CFDA]
‑
LLQDIMSR
‑
NH2
(19)(NH2)P
‑
Aib
‑
DAIFTNSYRKVLGQLCA
‑
K[N
‑
ε
‑
(AEEA)2
‑
γGlu
‑
20CFDA]
‑
KLLQDIMSR
‑
NH2当所述单体的具体序列为结构式3)时，具体为以下结构中的任一种：(20)(NH2)PADAIFTNSYRKVLGQLSAR
‑
K[N
‑
ε
‑
(γGlu
‑
N
‑
α
‑
20CFA)]
‑
LLQDIMCR
‑
NH2(21)(NH2)P
‑
Aib
‑
DAIFTNSYRKVLGQLSAR
‑
K[N
‑
ε
‑
(AEEA)2
‑
γGlu
‑
20CFDA]
‑
LLQDIMCR
‑
NH2(22)(NH2)P
‑
Aib
‑
DAIFTNSYRKVLGQLSAR
‑
K[N
‑
ε
‑
(γGlu
‑
N
‑
α
‑
20CFA)]
‑
LLQDIMCR
‑
NH2当所述单体的具体序列为结构式4)时，具体为以下结构中的任一种：(23)(NH2)PADAIF
‑
Hcy
‑
NSYRKVLGQLSAK[N
‑
ε
‑
(γGlu
‑
N
‑
α
‑
18CFA)]
‑
KLLQDIMSR
‑
NH2(24)(NH2)PADAIF
‑
Hcy
‑
NSYRKVLGQLSAR
‑
K[N
‑
ε
‑
(γGlu
‑
N
‑
α
‑
18CFA)]
‑
LLQDIMSR
‑
NH2(25)(NH2)PADAIF
‑
Hcy
‑
NSYRKVLGQLSAR
‑
K[N
‑
ε
‑
(γGlu
‑
N
‑
α
‑
20CFA)]
‑
LLQDIMSR
‑
NH2(26)(NH2)PADAIF
‑
Hcy
‑
NSYRKVLGQLSAR
‑
K[N
‑
ε
‑
(AEEA)2
‑
γGlu
‑
20CFDA]
‑
LLQDIMSR
‑
NH2(27)(NH2)P
‑
Aib
‑
DAIF
‑
Hcy
‑
NSYRKVLGQLSAK[N
‑
ε
‑
(γGlu
‑
N
‑
α
‑
18CFA)]
‑
KLLQDIMSR
‑
NH2(28)(NH2)P
‑
Aib
‑
DAIF
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐松山，罗群，杨莉，谭宏梅，张旭东，唐婧晅，
申请(专利权)人：浙江湖州纳福生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：