以肽核酸为基础的佐剂制造技术

本发明专利技术提供一种对有效性高且安全性高的疫苗的制备有用的佐剂和包含该佐剂的疫苗组合物。本发明专利技术的佐剂由结合有细胞膜穿透性肽的肽核酸构成。肽核酸构成。肽核酸构成。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】以肽核酸为基础的佐剂


[0001]本专利技术涉及一种具有免疫活化能力的对细胞膜穿透性肽进行修饰而得的肽核酸。

技术介绍

[0002]后天免疫系统具有针对经历过一次的异物形成在第2次以后的曝露中能够迅速应对的免疫记忆的能力。利用该免疫记忆的是疫苗，通过接种疫苗，能够在病原体曝露之前得到能够中和该病原体的免疫。
[0003]已获批准的疫苗有减毒活疫苗、灭活疫苗和纯化重组蛋白质等亚单位疫苗，特别是减毒活疫苗是有效性高的疫苗，但由于具有感染性，因此难以确保安全性，有产生未预期的副反应的顾虑。另一方面，灭活疫苗、亚单位疫苗是与减毒活疫苗相比在安全性方面优异的疫苗，但由于丧失感染性，因此缺乏引起自然免疫的能力，因此仅抗原的情况下无法赋予充分的后天免疫。因此，已批准的灭活疫苗和亚单位疫苗多为向抗原加入具有免疫活化能力的佐剂而成的制剂。因此，在安全性高的疫苗的开发中，应当使用安全性高的灭活疫苗、亚单位疫苗抗原，但为了获得充分的有效性，需要添加具有免疫活化能力的佐剂。
[0004]另外，为了提高病原体的感染防御效果，成为病原体的入侵门户的粘膜中的免疫诱导也较为重要。粘膜中的免疫诱导通过给药粘膜疫苗而实现，已批准的粘膜疫苗为减毒活疫苗、来自具有粘膜亲和性的毒素的疫苗，不具有粘膜亲和性的灭活疫苗和亚单位疫苗难以引起对感染防御而言充分的免疫。因此，这样的抗原的粘膜给药中也需要增强粘膜免疫的佐剂。
[0005]已批准的疫苗中使用的佐剂可举出铝盐或基于角鲨烯的乳液，但被批准的佐剂较少，已知铝盐会促进IgE诱导(非专利文献1)。另外，上述佐剂为注射剂用佐剂，难以与粘膜疫苗组合。
[0006]另一方面，作为将核酸的糖磷酸骨架转化为N
‑
(2
‑
氨基乙基)甘氨酸骨架的修饰核酸的肽核酸(PNA)具有较高的双链形成能力，不会被生物体内核酸酶分解，因此可期待应用为反义分子等。
[0007]另外，在以药物递送为代表的领域中，作为将蛋白质、肽或低分子化合物导入至细胞内使其发挥功能的技术，在这些分子上结合穿膜肽(Cell Penetrating Peptide，CPP)。
[0008]但是，将PNA、结合有CPP的PNA用作佐剂尚属未知。
[0009]现有技术文献
[0010]非专利文献
[0011][非专利文献1]Marichal T,Ohata K,Bedoret D,Mesnil C,Sabatel C,Kobiyama K,Lekeux P,Coban C,Akira S,Ishii KJ,Bureau F,Desmet CJ.DNAreleased from dying host cells mediates aluminum adjuvant activity.Nat Med.2011Jul 17；17(8):996
‑
1002.

技术实现思路

[0012]本专利技术涉及一种对有效性高且安全性高的疫苗的制备有用的佐剂和包含该佐剂的疫苗组合物。
[0013]本申请专利技术人等进行了深入研究，结果发现在肽核酸修饰HIV(Human Immunodeficiency Virus，人类免疫缺陷病毒)的TAT(Trans
‑
Activator of Transcription Protein，转录反式激活蛋白)的细胞膜穿透性肽(CPP)，该结合有CPP的肽核酸在注射和经粘膜给药中均具有佐剂活性。
[0014]即，本专利技术涉及以下的1)～6)。
[0015]1)一种佐剂，由结合有细胞膜穿透性肽的肽核酸构成。
[0016]2)一种佐剂组合物，含有结合有细胞膜穿透性肽的肽核酸和药学上允许的载体。
[0017]3)一种疫苗组合物，其含有如1)的佐剂和抗原。
[0018]4)一种结合有细胞膜穿透性肽的肽核酸的用途，用于制造佐剂。
[0019]5)一种结合有细胞膜穿透性肽的肽核酸的作为佐剂的用途。
[0020]6)一种方法，使用结合有细胞膜穿透性肽的肽核酸作为佐剂。
[0021]根据本专利技术，能够提高安全性高的灭活疫苗的有效性，能够创造出品质高的预防药而对医药品产业做出较大贡献。
附图说明
[0022]图1A是皮下给药中的对A/Singapore/GP1908/2015株的IgG抗体效价。
[0023]图1B是皮下给药中的对B/Maryland/15/2015株的IgG抗体效价。
[0024]图2是皮下给药中的第35天时的对A/Singapore/GP1908/2015株的中和抗体效价。
[0025]图3A是经鼻给药中的对A/Singapore/GP1908/2015株的IgG抗体效价。
[0026]图3B是经鼻给药中的对B/Maryland/15/2015株的IgG抗体效价。
[0027]图4A是经鼻给药中的鼻腔清洗液中的对A/Singapore/GP1908/2015株的IgA抗体效价。
[0028]图4B是经鼻给药中的鼻腔清洗液中的对B/Maryland/15/2015株的IgA抗体效价。
[0029]图5是MIP03的NFκB的活化作用。
[0030]图6是MIP03的细胞因子(IL
‑
1α)诱导作用。
[0031]图7是MIP03的细胞因子(IL
‑
1β)诱导作用。
[0032]图8是MIP03的细胞因子(IL
‑
13)诱导作用。
[0033]图9是MIP03的细胞因子(IFN
‑
γ)诱导作用。
具体实施方式
[0034]以下详细地说明本专利技术的优选的实施方式。但是，本专利技术并不限定于以下的实施方式。
[0035]在本专利技术中，“结合有细胞膜穿透性肽的肽核酸”是指在细胞膜穿透性肽的N或C末端结合有肽核酸的分子，在本说明书中，也称为Mitsumata免疫刺激肽核酸(Mitsumata
‑
Immunostimulatory Peptide nucleic acid，MIP)。
[0036]“细胞膜穿透性肽(CPP)”是指在与细胞共存的情况下通过细胞膜而转移至细胞内
的肽。例如可举出表1所示的来自HIV的TAT的肽、来自果蝇的触角足的黑腹果蝇触足肽(Penetratin)、聚精氨酸、由神经肽甘丙肽衍生的转运肽(Transportan)、来自SV40的核定位信号(Nuclear Localization Signal，NLS)的Pep
‑
1、抗菌肽LL37，但并不限定于它们。
[0037]优选可举出来自TAT的肽(由序列号1所示的氨基酸序列构成的肽)。
[0038][表1][0039][0040]“肽核酸(PNA)”是指具有将核酸的糖
‑
磷酸骨架置换成N
‑
(2
‑
氨基乙基)甘氨本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种佐剂，由结合有细胞膜穿透性肽的肽核酸构成。2.根据权利要求1所述的佐剂，其中，细胞膜穿透性肽选自由序列号1～7所示的氨基酸序列构成的肽。3.根据权利要求1所述的佐剂，其中，细胞膜穿透性肽为由序列号1所示的氨基酸序列构成的肽。4.根据权利要求1～3中任一项所述的佐剂，其中，肽核酸由下述式(1)表示，式中，碱基可以相同或不同，表示腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶或尿嘧啶，R表示
‑
COOH或
‑
CONH2，n表示1～10的整数。5.根据权利要求4所述的佐剂，其中，式(...

【专利技术属性】
技术研发人员：三股亮大郎，神田明日美，
申请(专利权)人：电化株式会社，
类型：发明
国别省市：