一种基于检测试纸的靶标物半定量检测方法及检测试纸技术

本发明专利技术公开了一种基于检测试纸的靶标物半定量检测方法及检测试纸，包括通过共价修饰试剂，同时将探针一和pH酶的混合液共价修饰到二氧化硅纳米颗粒上，得到免疫硅纳米颗粒；将配对探针二与磁珠孵育，得到免疫磁珠；将免疫硅纳米颗粒、免疫磁珠与靶标物结合，形成免疫磁珠

【技术实现步骤摘要】
一种基于检测试纸的靶标物半定量检测方法及检测试纸


[0001]本专利技术涉及生物检测
，尤其涉及一种基于检测试纸的靶标物半定量检测方法及检测试纸。

技术介绍

[0002]现场即时检测(POCT，Point
‑
of
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care testing)是在采样现场即刻进行检测与分析的一种方法，具有检测快速、使用方法简单、携带方便、检测结果准确可靠、无需专业人员操作等优点，能够很好的满足在实验室外检测的需求；但是，一种POCT检测仪可进行检测的项目种类单一，无法对多种检测对象进行检测。
[0003]因此，需要一种基于检测试纸的靶标物半定量检测方法及检测试纸，能够适用于多种靶标物种类，通用性强且特异性好，灵敏度与准确度高，有助于生物医学领域对靶标物的快速检测。

技术实现思路

[0004]针对上述现有技术中存在的问题，本专利技术提供了一种基于检测试纸的靶标物半定量检测方法及检测试纸，适用于多种靶标物的快速检测，灵敏度高，通用性强且特异性好，大大提升检测效率。所述技术方案如下：
[0005]一方面，本专利技术提供了一种基于检测试纸的靶标物半定量检测方法，包括：
[0006]制备免疫硅纳米颗粒：通过共价修饰试剂，同时将探针一和pH酶的混合液共价修饰到二氧化硅纳米颗粒上，得到所述免疫硅纳米颗粒；所述探针一包括能够识别靶标物的抗体或核酸适配体；
[0007]制备免疫磁珠：将配对探针二与磁珠孵育，得到所述免疫磁珠；
[0008]制备免疫磁珠/>‑
靶标物
‑
免疫硅纳米颗粒：将所述免疫硅纳米颗粒、所述免疫磁珠与靶标物结合，形成免疫磁珠
‑
靶标物
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免疫硅纳米颗粒的三层结构；
[0009]pH催化：所述免疫磁珠
‑
靶标物
‑
免疫硅纳米颗粒与所述pH酶的底物发生催化反应，以改变待测溶液的pH；
[0010]半定量检测：将所述待测溶液的上清液滴加在所述检测试纸上，根据颜色变化以及浓度与pH的标准曲线，得到所述靶标物浓度的半定量检测结果。
[0011]进一步地，所述制备免疫硅纳米颗粒包括：
[0012]采用缓冲液清洗经过化学基团修饰的所述二氧化硅纳米颗粒；
[0013]离心，将所述二氧化硅纳米颗粒重悬于所述缓冲液中；
[0014]加入K2CO3溶液，调节所述缓冲液pH值为5～9；
[0015]加入蛋白质交联剂摇晃孵育；
[0016]加入所述pH酶的溶液与所述探针一摇晃偶联；
[0017]加入乙醇胺与BSA分别进行封闭，得到所述免疫硅纳米颗粒。
[0018]优选地，所述二氧化硅纳米颗粒为氨基二氧化硅纳米颗粒或羧基二氧化硅纳米颗
粒。
[0019]优选地，所述共价修饰试剂为具有至少两个针对特殊基团的反应性末端的小分子化合物；所述共价修饰试剂至少为戊二醛、NHS和马来酰亚胺中的一种。
[0020]优选地，所述pH酶的溶液为与所述pH酶的底物产生pH变化的化合物。
[0021]优选地，所述pH酶的溶液为脲酶、酯酶、青霉素酶或有机磷水解酶；
[0022]与所述pH酶的溶液对应的所述pH酶的底物为尿素溶液、低级脂肪酸酯溶液、青霉素溶液或有机磷水解酶。
[0023]进一步地，所述制备免疫磁珠包括：
[0024]在经过化学基团修饰的所述磁珠中加入所述配对探针二进行孵育；
[0025]修饰完成后依次进行清洗与磁性分离，获得所述免疫磁珠。
[0026]优选地，所述磁珠至少包括氨基磁珠、羧基磁珠、链酶亲和素磁珠和羟基磁珠中的一种。
[0027]进一步地，所述半定量检测包括：
[0028]将所述待测溶液的上清液滴加在所述检测试纸上，静置一段时间，直至所述检测试纸上的颜色不再发生改变；
[0029]将所述检测试纸与所述检测试纸上的标准比色卡对比，得到所述靶标物的相对浓度的半定量检测结果。
[0030]另一方面，本专利技术还提供了一种检测试纸，用于以上所述的基于检测试纸的靶标物半定量检测方法，所述检测试纸包括衬底、吸水层、试纸层和试纸壳，所述吸水层粘接于所述衬底上表面，所述试纸层粘接于所述吸水层上表面，所述试纸壳覆盖于所述试纸层上方；所述试纸壳上具有标准比色卡与多个样品孔，所述样品孔用于供所述待测溶液滴加在所述试纸层上，所述标准比色卡用于与静置一段时间之后的所述试纸层对比，以得到所述靶标物的相对浓度的半定量检测结果。
[0031]实施本专利技术，具有如下有益效果：
[0032]1、本专利技术将靶标物浓度转化为检测试纸上的颜色变化，经过与标准比色卡进行对比，能够初步评估靶标物浓度，实现对靶标物浓度的半定量检测；并且，本专利技术结合了纳米免疫磁珠分离技术和免疫硅纳米离子偶联吸附技术，能够使得检测结果在检测试纸上快速显示，准确率高、灵敏度高，检测快速，有利于生物医学领域对靶标物的快速检测。
[0033]2、采用能够识别靶标物的探针，特异性强，灵敏度高，检测快速稳定；同时，不同的探针一能够特异性识别不同靶标物，则更换不同的探针即可实现多种靶标物的浓度检测，通用性高，应用范围广泛。
[0034]3、检测试纸体积小，携带方便，无需专业人员与设备，能够广泛应用于多种室外与实验室环境，实现快速检测，检测成本低，初步半定量检测结果准确。
附图说明
[0035]为了更清楚地说明本专利技术的技术方案，下面将对实施例中所使用的附图作简单的介绍，其中相同的零部件用相同的附图标记表示。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它附图。
[0036]图1为本专利技术提供的一种基于检测试纸的靶标物半定量检测方法的原理示意图；
[0037]图2为本专利技术提供的一种基于检测试纸的靶标物半定量检测方法的逻辑结构图；
[0038]图3为本专利技术提供的一种检测试纸的结构示意图；
[0039]图4为本专利技术的一个可能的实施例中检测试纸的半定量示意图。
[0040]其中，图中附图标记对应为：1
‑
衬底，2
‑
吸水层，3
‑
试纸层，4
‑
试纸壳，41
‑
标准比色卡，410
‑
空白对照区，411
‑
低浓度定量区，412
‑
高浓度定量区，42
‑
样品孔。
具体实施方式
[0041]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例，因此不能理解为对本专利技术的限制。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于检测试纸的靶标物半定量检测方法，其特征在于，由以下步骤组成：制备免疫硅纳米颗粒：通过共价修饰试剂，同时将探针一和pH酶的混合液共价修饰到二氧化硅纳米颗粒上，得到所述免疫硅纳米颗粒；所述探针一包括能够识别靶标物的抗体或核酸适配体；制备免疫磁珠：将配对探针二与磁珠孵育，得到所述免疫磁珠；制备免疫磁珠
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靶标物
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免疫硅纳米颗粒：将所述免疫硅纳米颗粒、所述免疫磁珠与靶标物结合，形成免疫磁珠
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靶标物
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免疫硅纳米颗粒的三层结构；pH催化：所述免疫磁珠
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靶标物
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免疫硅纳米颗粒与所述pH酶的底物发生催化反应，以改变待测溶液的pH；半定量检测：将所述待测溶液的上清液滴加在所述检测试纸上，根据颜色变化以及浓度与pH的标准曲线，得到所述靶标物浓度的半定量检测结果。2.根据权利要求1所述的一种基于检测试纸的靶标物半定量检测方法，其特征在于，所述制备免疫硅纳米颗粒包括：采用缓冲液清洗经过化学基团修饰的所述二氧化硅纳米颗粒；离心，将所述二氧化硅纳米颗粒重悬于所述缓冲液中；加入K2CO3溶液，调节所述缓冲液pH值为5～9；加入蛋白质交联剂摇晃孵育；加入所述pH酶的溶液与所述探针一摇晃偶联；加入乙醇胺与BSA分别进行封闭，得到所述免疫硅纳米颗粒。3.根据权利要求1所述的一种基于检测试纸的靶标物半定量检测方法，其特征在于，所述二氧化硅纳米颗粒为氨基二氧化硅纳米颗粒或羧基二氧化硅纳米颗粒。4.根据权利要求1所述的一种基于检测试纸的靶标物半定量检测方法，其特征在于，所述共价修饰试剂为具有至少两个针对特殊基团的反应性末端的小分子化合物；所述共价修饰试剂至少为戊二醛、NHS和马来酰亚胺中的一种。5.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈世兴，李铁，魏擅红，王跃林，
申请(专利权)人：中国科学院上海微系统与信息技术研究所，
类型：发明
国别省市：