用于诊断、评估预后及治疗僵直性脊椎炎的生物标记及目标制造技术

本发明专利技术涉及一种用于诊断、评估预后及治疗僵直性脊椎炎(ankylosing spondylitis,AS)的生物标记及目标。本发明专利技术还涉及一种用于生产僵直性脊椎炎(AS)动物模式的方法，由其生产的动物模式，以及使用这种动物模式筛选在僵直性脊椎炎(AS)治疗具有药学活性的药剂的方法。椎炎(AS)治疗具有药学活性的药剂的方法。椎炎(AS)治疗具有药学活性的药剂的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于诊断、评估预后及治疗僵直性脊椎炎的生物标记及目标
[0001]相关申请
[0002]本申请主张根据美国专利法第119条(35U.S.C.
§
119)于2018年7月10日提出申请的美国临时申请第62/696,020的权益，其全部内容通过引用并入本文。


[0003]本专利技术涉及一种用于诊断、评估预后及治疗僵直性脊椎炎(AS)的生物标记及目标。本专利技术还涉及一种用于生产僵直性脊椎炎(AS)动物模式的方法，由其生产的动物模式，以及使用这种动物模式筛选在僵直性脊椎炎(AS)治疗中一具有药学活性的药剂的方法。

技术介绍

[0004]僵直性脊椎炎(AS)为一种慢性关节炎，其特征为发炎性脊椎炎，周边关节炎以及接骨点炎。通常，它发生在年轻成年男性中并且与人类白血球抗原(humanleukocyte antigen,HLA)
‑
B27强烈相关1。除慢性脊椎炎外，在2年内三分之一的患者中经常观察到新骨的形成，导致相邻椎体的骨化及黏连(骨赘“syndesmophytes”)，可能导致永久性残疾2。尽管有如非类固醇消炎止痛药(non
‑
steroidalanti
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inflammatory drugs,NSAIDs)、抗肿瘤坏死因子(anti
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tumor necrosis factor, TNF)
‑
α改善发炎，或介白素
‑
17阻断剂等治疗，但它们不能完全阻止骨赘形成3‑9。 MRI影像还提供证据显示大多数新的骨赘在脊椎单位发展而没有发炎
10
。因此，骨赘形成可以与发炎分开
10
‑
12
。进一步了解原位基质活化的病理机制为预防脊椎关节僵硬最优先要做的事。虽然已有报导僵直性脊椎炎(AS)患者来源的间质干细胞 (mesenchymal stem cells,MSCs)的成骨作用发生改变
13,14
，但间质干细胞(MSCs)在骨赘病灶与潜在遗传途径中的作用大多是未知的。
[0005]有需要开发用于诊断、评估预后及治疗僵直性脊椎炎(AS)的方法以及筛选用于治疗僵直性脊椎炎(AS)的有效药剂的平台。

技术实现思路

[0006]于本专利技术中，我们建立了僵直性脊椎炎间质干细胞(AS MSCs)，并发现僵直性脊椎炎间质干细胞(AS MSCs)中增强的TNAP(一种ALPL基因产物)为僵直性脊椎炎间质干细胞(AS MSCs)所诱导的骨结合的病理机制所必需的，而且TNAP的阻断会抑制僵直性脊椎炎间质干细胞(AS MSCs)的异常矿化。我们还使用僵直性脊椎炎间质干细胞(AS MSCs)建立了僵直性脊椎炎(AS)动物模式，其可用于筛选有效治疗僵直性脊椎炎(AS)的药剂。此外，我们在人类受试者中证明ALPL基因产物(血清 TNAP/或骨ALP含量)与僵直性脊椎炎(AS)高度相关，尤其是僵直性脊椎炎(AS)的放射照相严重程度，因此可以作为诊断僵直性脊椎炎(AS)的生物标记，也可用于监测僵直性脊椎炎(AS)患者的进展。
[0007]在一方面，本专利技术提供一种用于检测僵直性脊椎炎(AS)及/或预测僵直性脊椎炎(AS)的放射照相严重程度的发展风险的方法，包括：(i)提供受试者的生物样品；以及(ii)在该样品中检测ALPL基因产物作为僵直性脊椎炎(AS)的标记。
[0008]在部分具体实施例中，该基因产物包括蛋白质或RNA转录物。
[0009]在部分具体实施例中，该ALPL基因产物为非特异性碱性磷酸酶(non
‑
specificalkaline phosphatase,TNAP)。
[0010]在部分具体实施例中，该ALPL基因产物为骨特异性碱性磷酸酶(bone
‑
specificTNAP,BAP)。
[0011]在部分具体实施例中，以特异性结合至该ALPL基因产物的试剂检测该标记，例如，抗体或引子/探针。
[0012]在部分具体实施例中，通过免疫分析、质谱仪分析、核酸杂交检测分析及/或反转移酶
‑
聚合酶连锁反应(reverse transferase
‑
polymerase chain reaction,RT
‑
PCR)进行检测。
[0013]在部分具体实施例中，该生物样品为体液样品，例如，血液或血清，或组织样品，例如，骨髓切片。
[0014]在部分具体实施例中，该方法还包括将检测结果与参考程度进行比较，且若比较显示该ALPL基因产物的含量升高，则将受试者鉴定为具有僵直性脊椎炎(AS) 及/或具有僵直性脊椎炎(AS)的放射照相严重程度的发展风险。
[0015]在部分具体实施例中，该方法还包括对该受试者施用额外的僵直性脊椎炎 (AS)诊断测定，以确认僵直性脊椎炎(AS)发生或僵直性脊椎炎(AS)的放射照相严重程度的发展风险。
[0016]在部分具体实施例中，该放射照相严重程度包括僵直性脊椎炎(AS)的一个或多个放射照相特征，该放射照相特征选自由下列所组成的群组：侵蚀、硬化、方形、骨赘形成、骨桥、脊椎僵直，及其任何组合。
[0017]在部分具体实施例中，该方法进一步包括以抗僵直性脊椎炎(AS)的治疗方法 (例如，手术及/或物理治疗)及/或药物(例如，皮质类固醇、非类固醇消炎止痛药 (NSAISs)、免疫抑制剂、肿瘤坏死因子
‑
α(TNF
‑
α)阻断抑制剂、抗介白素
‑
6抑制剂、介白素17A抑制剂，及/或TNAP抑制剂(包括BAP抑制剂))治疗该受试者。
[0018]特别地，本专利技术的方法可用于监测僵直性脊椎炎(AS)患者中僵直性脊椎炎(AS) 的进展，包括
[0019](a)在第一时间点提供来自该患者的第一生物样品；
[0020](b)在第二时间点提供来自该患者的第二生物样品，其中该第二时间点晚于该第一时间点；
[0021](c)测量该第一及第二生物样品中ALPL基因产物的含量，以作为僵直性脊椎炎(AS)标记；以及
[0022](d)基于该第一及第二生物样品中该ALPL基因产物的含量，以确定该患者的僵直性脊椎炎(AS)进展，其中相较于该第一生物样品中ALPL基因产物的含量，该第二生物样品中该ALPL基因产物的含量升高表示僵直性脊椎炎(AS)进展中。
[0023]在另一方面，本专利技术提供一种用于治疗僵直性脊椎炎(AS)的TNAP抑制剂。还提供了一种治疗僵直性脊椎炎(AS)的方法，包括对有需要的受试者施用治疗有效量的TNAP抑制剂。本文还描述一种TNAP抑制剂在制备用于治疗僵直性脊椎炎 (AS)的药物的用途。
[0024]在部分具体实施例中，该方法有效减轻或缓解僵直性脊椎炎(AS)的一种或多种病
density,O.D.)测量的ARS染色的代表性定量结果，显示在指定天数三个僵直性脊椎炎间质干细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于检测僵直性脊椎炎(ankylosing spondylitis,AS)及/或预测僵直性脊椎炎(AS)的放射照相严重程度的发展风险的方法，包括：(i)提供来自受试者的生物样品；以及(ii)在该样品中检测ALPL基因产物作为僵直性脊椎炎(AS)的标记。2.如权利要求1的方法，其中该基因产物包括蛋白质或RNA转录物。3.如权利要求1的方法，其中该ALPL基因产物为非特异性碱性磷酸酶(non
‑
specific alkaline phosphatase,TNAP)。4.如权利要求1的方法，其中该ALPL基因产物为骨特异性碱性磷酸酶(bone
‑
specific TNAP,BAP)。5.如权利要求1的方法，其中该标记以特异性结合该ALPL基因产物的试剂检测。6.如权利要求1的方法，其中该检测通过免疫分析、质谱仪分析、核酸杂交检测分析，及/或反转移酶
‑
聚合酶连锁反应(reverse transferase
‑
polymerase chain reaction,RT
‑
PCR)进行。7.如权利要求1的方法，其中该生物样品为体液样品或组织样品。8.如权利要求1的方法，包括将该检测结果与参考程度进行比较，且若该比较显示该ALPL基因产物的含量升高，则将该受试者鉴定为具有僵直性脊椎炎(AS)及/或具有僵直性脊椎炎(AS)的放射照相严重程度的发展风险。9.如权利要求8的方法，进一步包括对该受试者施用进一步的僵直性脊椎炎(AS)诊断测定，以确认该僵直性脊椎炎(AS)发生或该僵直性脊椎炎(AS)的放射照相严重程度的发展风险。10.如权利要求8的方法，其中该放射照相严重程度包括僵直性脊椎炎(AS)的一个或多个放射照相特征，该放射照相特征选自由下列所组成的群组：侵蚀、硬化、方形、骨赘形成、骨桥、脊椎僵直，及其任何组合。11.如权利要求8的方法，进一步包括以抗僵直性脊椎炎(AS)的治疗方法及/或药物，治疗该受试者。12.如权利要求11的方法，其中该抗僵直性脊椎炎(AS)的治疗方法包括手术及/或物理治疗，以及该药物包括皮质类固醇、非类固醇消炎止痛药(non
‑
steroidal anti
‑
inflammatory drugs,NSAISs)、免疫抑制剂、肿瘤坏死因子
‑
α(TNF
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α)阻断抑制剂、抗介白素
‑
6抑制剂、介白素17A抑制剂，及/或TNAP抑制剂。13.一种用于监测僵直性脊椎炎(AS)患者中僵直性脊椎炎(AS)的进展的方法，包括：(a)在第一时间点提供来自该患者的第一生物样品；(b)在第二时间点提供来自该患者的第二生物样品，其中该第二时间点晚于该第一时间点；(c)测量该第一生物样品及该第二生物样品中ALPL基因产物的含量以作为僵直性脊椎炎(AS)标记；以及(d)基于该第一生物样品及该第二生物样品中该ALPL基因产物的含量，以确定该患者的僵直性脊椎炎(AS)进展，其中相较于该第一生物样品中该ALPL基因产物的含量，该第二生物样品中该ALPL基因产物的含量升高，表示该僵直性脊椎炎(AS)进展中。14.如权利要求13的方法，其中该僵直性脊椎炎(AS)进展包括僵直性脊椎炎(AS)的...

【专利技术属性】
技术研发人员：林国仪，洪士杰，刘津秀，
申请(专利权)人：台湾佛教慈济医疗基金会台湾中国医药大学，
类型：发明
国别省市：