一种登革病毒分型的测序引物、检测方法及试剂盒技术

本发明专利技术属于生物医药领域，涉及一种登革病毒分型的测序引物、检测方法及试剂盒。本发明专利技术建立一种全面覆盖登革病毒4个血清型及其变异株的多重PCR

【技术实现步骤摘要】
一种登革病毒分型的测序引物、检测方法及试剂盒


[0001]本专利技术属于生物医药领域，涉及一种登革病毒分型的测序引物、检测方法及试剂盒。

技术介绍

[0002]登革病毒(Dengue virus，DV)属黄病毒科(Flaviviridae)黄病毒属。登革病毒颗粒呈球形，直径45～55nm，为有包膜的单股正链RNA病毒，基因组长约 11kb，整个基因的编码顺序为：5
’
I型帽子结构、非编码区、AUC蛋白(核衣壳蛋白)基因、M蛋白(膜蛋白)基因、E蛋白(包膜蛋白)基因、NS1
‑
2a
‑
2b
‑3‑
4a
‑
4b
‑
5 基因、非编码区3
’
。登革病毒共有4个血清型(DENV
‑
1、DENV
‑
2DENV
‑
3和DENV
‑
4)， 4种血清型均可感染人，可引起隐性感染、登革热(dengue fever，DF)和登革出血热(denguehemorrhagicfever，DHF)，严重的还可导致登革休克综合征 (dengueshocksyndrome，DSS)，其中2型重症率及病死率均高于其它型。患者和隐性感染者为主要传染源，感染后对同型病毒有免疫力，并可维持多年，对异型病毒也有1年以上免疫力。
[0003]登革热是由登革病毒引起的急性传染病，主要通过埃及伊蚊或白纹伊蚊叮咬传播。主要在热带和亚热带地区流行，我国广东、香港、澳门、云南等地是登革热流行区。随着全球气候变暖和城市化进程的加快，登革热病例正在迅速增加，已威胁到全球三分之一人口的健康安全。为了有效控制登革热的传播和流行，需要建立适应不同情况的检测技术。
[0004]登革病毒易发生变异。病毒核苷酸序列分析结果表明相同血清型病毒中不同分离株间的核苷酸变异为10％，而不同血清型病毒间的核苷酸变异为30％。并且根据病毒寡核苷酸指纹图谱的同源程度，可以将同型病毒的不同毒株分为不同的拓扑型。
[0005]检测埃及伊蚊或白纹伊蚊体内是否携带登革病毒，及早监测到伊蚊种群中病毒携带比例，对于登革疫情防控有重要作用。因为蚊体积小，病毒载量很低，通常以50只或100只蚊虫为一个反应池，提取总RNA，再通过反转录PCR的方式扩增登革病毒，阳性株进一步做测序，通过序列辨别登革病毒的型别。即便以反应池的方法进行登革病毒的监测，假阴性也仍然存在，且无法确定病毒型别。为了准确监测蚊种群中是否存在登革病毒感染，需要选择超高灵敏度和超宽动态范围的检测方法。多重PCR
‑
MS质谱联用是开创无创产前诊断和液体活检的顶级先进技术。将该技术用于登革病毒检测，将极大提高病毒的检出率。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于建立一种全面覆盖登革病毒4个血清型及其变异株的多重PCR
‑
MS质谱检测方法，用于登革病毒的实验室诊断和精准基因分型及样本朔源。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0008]本专利技术提供一种用于登革病毒分型检测的引物。
[0009]本专利技术包括11个引物组，分别为：
[0010]第1引物组DeV1
‑
1为：
[0011]正向序列：10mertag
‑
ATAGAGGGTCCAGGCTGAAG，
[0012]反向序列：10mertag
‑
CTGGCATATGTGGTGATAGG，
[0013]探针序列：CCCATCTCATTGGCTG，
[0014]第2引物组DeV1
‑
2为：
[0015]正向序列：10mertag
‑
TGAACACAAGTCAACATGGC，
[0016]反向序列：10mertag
‑
ATTGACCATGGATGAGGCTG，
[0017]探针序列：GCCTATCATGGATCATATGAG，
[0018]第3引物组DeV2
‑
1为：
[0019]正向序列：10mertag
‑
GGCAGCAGAGCCATATGGTA，
[0020]反向序列：10mertag
‑
CTTCTCCTTCCACTCCACTC，
[0021]探针序列：AAGATCCATATGGTACATGTGGC，
[0022]第4引物组DeV2
‑
2为：
[0023]正向序列：10mertag
‑
CCTAATATCGTATGGAGGAG，
[0024]反向序列：10mertag
‑
ACCTGGACTTCTTCTCCTTC，
[0025]探针序列：TACTTCCTTCCATTCTCCTT，
[0026]第5引物组DeV3
‑
1为：
[0027]正向序列：10mertag
‑
ATAACAACACTCTGGGAAGG，
[0028]反向序列：10mertag
‑
ATGTTCGCCATGGAAACAGC，
[0029]探针序列：TGGGAAGGATCACCTG，
[0030]第6引物组DeV3
‑
2为：
[0031]正向序列：10mertag
‑
CAATCCAACAGGTGAGAAGC，
[0032]反向序列：10mertag
‑
CCTCCTTCCTGAATCTCTTC，
[0033]探针序列：CGAAGGCATGTAGTCCAG，
[0034]第7引物组DeV4
‑
1为：
[0035]正向序列：10mertag
‑
TGGGTTATTGGATAGAGAGC，
[0036]反向序列：10mertag
‑
GGCCACAGACATGTTTTCAC，
[0037]探针序列：AGCTCAAAAAACCAGACCTG，
[0038]第8引物组DeV4
‑
2为：
[0039]正向序列：10mertag
‑
GGACTCCGGTGATGGAAATC
[0040]反向序列：10mertag
‑
TCGTGTATGACATTCCCTTG，
[0041]探针序列：GTATGTGTATATTGCAAGAC，
[0042]第9引物组DeV
‑
1为：
[0043]正向序列：10mertag
‑
ATACGCCTTTCAATATGCTG，
[0044]反向序列：10mertag
‑
CAGCATTCCAAGTGAGAATC，
[本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于登革病毒分型检测的引物，其特征在于，包括：11个引物组，第1引物组为：正向序列：10mertag
‑
ATAGAGGGTCCAGGCTGAAG，反向序列：10mertag
‑
CTGGCATATGTGGTGATAGG，探针序列：CCCATCTCATTGGCTG，第2引物组为：正向序列：10mertag
‑
TGAACACAAGTCAACATGGC，反向序列：10mertag
‑
ATTGACCATGGATGAGGCTG，探针序列：GCCTATCATGGATCATATGAG，第3引物组为：正向序列：10mertag
‑
GGCAGCAGAGCCATATGGTA，反向序列：10mertag
‑
CTTCTCCTTCCACTCCACTC，探针序列：AAGATCCATATGGTACATGTGGC，第4引物组为：正向序列：10mertag
‑
CCTAATATCGTATGGAGGAG，反向序列：10mertag
‑
ACCTGGACTTCTTCTCCTTC，探针序列：TACTTCCTTCCATTCTCCTT，第5引物组为：正向序列：10mertag
‑
ATAACAACACTCTGGGAAGG，反向序列：10mertag
‑
ATGTTCGCCATGGAAACAGC，探针序列：TGGGAAGGATCACCTG，第6引物组为：正向序列：10mertag
‑
CAATCCAACAGGTGAGAAGC，反向序列：10mertag
‑
CCTCCTTCCTGAATCTCTTC，探针序列：CGAAGGCATGTAGTCCAG，第7引物组为：正向序列：10mertag
‑
TGGGTTATTGGATAGAGAGC，反向序列：10mertag
‑
GGCCACAGACATGTTTTCAC，探针序列：AGCTCAAAAAACCAGACCTG，第8引物组为：正向序列：10mertag
‑
GGACTCCGGTGATGGAAATC反向序列：10mertag
‑
TCGTGTATGACATTCCCTTG，探针序列：GTATGTGTATATTGCAAGAC，第9引物组为：正向序列：10mertag
‑
ATACGCCTTTCAATATGCTG，反向序列：10mertag
‑<...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹晓梅，林健，李颖，常宇桐，张丽萍，刘莹莹，牛羽，李慧鹏，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，
类型：发明
国别省市：