一种蜘蛛的基因编辑方法技术

本申请提供了一种蜘蛛的基因编辑方法，通过优化显微注射技术和选择合适时期的受精卵，极大的提高了蜘蛛显微注射的成活率和基因编辑的效率，从而实现了利用CRISPR/Cas9基因组编辑技术在蜘蛛受精卵上进行内源基因的精准编辑。编辑。编辑。

【技术实现步骤摘要】
一种蜘蛛的基因编辑方法


[0001]本专利技术涉及动物遗传操作育种和基因功能研究的
，具体涉及一种蜘蛛基因编辑的方法。

技术介绍

[0002]蜘蛛隶属的螯肢亚门是节肢动物的基部类群，它代表了其他现存节肢动物多足，甲壳和昆虫的姐妹类群。蜘蛛是研究演化发育的理想类群。随着蜘蛛基因组信息的不断丰富和完善，功能基因组学在蜘蛛研究中的地位越发重要，但是在蜘蛛中开展的基因功能研究与遗传操作还很缺乏。
[0003]基于CRISPR/Cas9系统的基因组编辑技术为功能基因组的研究提供了有效的手段。Cas9基因编辑诱导的DSBs可以通过两种方式修复，一种是非同源末端直接修复(Non-homologous end-joining,NHEJ)，另一种是同源直接修复(Homologous-direct repair,HDR)，NHEJ引起插入或缺失突变，可以破坏目标基因的开放性阅读框(ORF)，从而我们可以实现目标基因的敲除，而我们可以通过HDR的修复方式敲除一段特定的序列或者插入一段我们感兴趣的基因片段，继而实现同源重组。迄今已在双翅目，鳞翅目，膜翅目本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蜘蛛的基因编辑方法，其包括：1)制备靶向目标基因的sgRNA,；2)将步骤1)制备的sgRNA以及Cas9核酸内切酶通过显微注射导入蜘蛛受精卵中；其中，所述受精卵处于合胞期。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述蜘蛛为温室拟肥腹蛛Parasteatoda tepidariorum、隆头蛛Stegodyphus mimosarum、棕色遁蛛Loxosceles reclusa、黑寡妇蜘蛛Latrodectus hesperus、络新妇蛛Trichonephila clavipes、草间钻头蛛Hylyphantes graminicola、家幽灵蛛Pholcus phalangioides、颚蚁蛛Toxeus maxillosus、拟环纹豹蛛Pardosa pseudoannulataar、白额巨蟹蛛Heteropoda venatoria、龙栖蚁微蛛Solenysa longqiensis、克氏阿瑟蛛Althepus christae、穴塔姆蛛Tamgrinia alveolifera、水蛛Argyroneta aquatica、唇须孔蛛Portia labiata、三突花蛛Misumenoides formosipes和玉翠蛛Siler semiglaucus。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中在显微注射时，将受精卵放置在0.1-1毫米孔径的圆孔网筛板上，例如0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0毫米或上述两点之间任意值，优选地，孔径为0.4毫米；进一步优选地，所述受精卵表面用油覆盖，所述油例如卤化烃油Halocarbon 700(sigma，H8898)、Halocarbon 27(sigma，H8773)、Voltalef 10S(vwr，P24627)、矿物油(sigma，M8410、M3516)、石蜡油NidOil(Nidacon，NO-100)或者凡士林(sigma，16415)，更优选为卤化烃油700。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述显微注射使用注射针将所述sgRNA和Cas9核酸内切酶导入蜘蛛受精卵中。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述注射针通过拉针仪拉制玻璃毛细管获得，优选地，所述拉针仪为P-97程控水平微电极拉制仪；还优选地，所述玻璃毛细管的型号为SutterBF100-50-10。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：张蔚，李枢强，李逢源，杨晗，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：