一种原位脑胶质瘤的PDXC模型构建方法技术

一种原位脑胶质瘤的PDXC模型构建方法，包括如下步骤，步骤A：获取病人脑肿瘤标本，并培养脑肿瘤单个细胞：步骤B：向小鼠脑部内注射若干脑肿瘤单细胞；步骤C：收获小鼠颅内扩增后PDX肿瘤；步骤D：将小鼠PDX肿瘤加入培养液，收集所有颗粒以及培养液；步骤E：将步骤D所得肿瘤细胞颗粒离心、去上清、培养；步骤F：将步骤E培养后肿瘤细胞加入培养液，再次离心，去上清，吹打再加入培养液，并转移到另一离心管；步骤G：细胞计数，完成PDXC模型构建。本发明专利技术基于PDX技术，能扩增构建干细胞库，可保留患者肿瘤特性，能提高患者来源模型的成功率，能快速且大量用于高通量药物的筛选、放疗敏感性或者其它治疗的筛选，为有效治疗脑肿瘤起到了有技术支撑。撑。撑。

【技术实现步骤摘要】
一种原位脑胶质瘤的PDXC模型构建方法

技术介绍

[0001]恶性脑肿瘤，如胶质母细胞瘤、脑转移癌等存在复发率高、致残致死率高的问题，因此临床医疗及研究中，弄清楚其肿瘤的生物学行为和治疗抵抗(比如应用于治疗该疾病大量药物的筛选确定)的机制是治疗这类疾病的重要技术手段。目前，现有的技术中，主要是依靠构建模型方式用于研究该肿瘤生物学行为，其中，主要包括细胞系(脑肿瘤传统的细胞系)以及细胞系注射的老鼠模型两种方式来构建，这些模型最大的缺点是不能完全覆盖患者肿瘤的生物学信息。随着精准医学时代的到来及个体化治疗的发展，临床前研究迫切需要能够模拟患者肿瘤信息的体内外模型。
[0002]目前，脑肿瘤传统的细胞系有U87、U251、LN
‑
229、A
‑
172等，它们经过数十代甚至数百代的培养，在生物学行为上已经有了变化，不能有效模拟患者的信息。因此，基于患者来源的细胞PDC(Patient
‑
derived cell,PDC)以及PDX模型是国际上公认的最能代表肿瘤患者信息的模型。PDC模型因为培养周期较快、细胞扩增后数量本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种原位脑胶质瘤的PDXC模型构建方法，其特征在于包括如下步骤，步骤A：获取病人脑肿瘤标本，并培养获得脑肿瘤的单个细胞：步骤B：向选取的小鼠脑部内注射若干脑肿瘤单细胞；步骤C：间隔一定时间，肿瘤细胞在老鼠的脑内增殖后，收获小鼠颅内的扩增后PDX肿瘤；步骤D：将小鼠PDX肿瘤加入无血清培养液，并带入无菌操作台，使用无菌刀片将PDX肿瘤切割成小颗粒，收集所有颗粒以及培养液；步骤E：将步骤D所得肿瘤细胞颗粒离心、去上清，加入细胞分离溶液，放入培养箱培养一段时间；步骤F：将步骤E培养后肿瘤细胞加入培养液，再次离心，去上清，然后加入培养液，吹打离心后的细胞团多次，再加入培养液，使用过滤器过滤上述混悬液至另一新离心管；步骤G：细胞计数，将步骤F所得细胞均匀接种于多个培养瓶中，每个培养瓶能获得二百万个肿瘤细胞培养液，完成PDXC模型构建。2.根据权利要求1所述的一种原位脑胶质瘤的PDXC模型构建方法，其特征在于，步骤A中，获取病人脑肿瘤标本后需要切成小片，通过细胞消化液培养后，然后吹打3
‑
5次，离心后获得单个脑肿瘤细胞。3.根据权利要求1所述的一种原位脑胶质瘤的PDXC模型构建方法，其特征在于，步骤B中，选用的小鼠为雄性免疫缺陷小鼠、8～12周龄，体质量12～14g，通过立体定向仪固定小鼠后，注射脑肿瘤单细胞，注射的量为10万个，具体定位方法为：小鼠前囟后2mm，中线外侧2mm，进针深度为2....

【专利技术属性】
技术研发人员：曾瑜，付思祺，刘志雄，刘方琨，张李洋，李春涛，
申请(专利权)人：中南大学湘雅医院，
类型：发明
国别省市：