用于在靶向核酸序列处产生多样性的组合物和方法技术

本公开提供了可用于使用催化失活的指导核酸酶与诱变剂的组合在靶核酸中产生靶向修饰的方法和试剂盒。饰的方法和试剂盒。饰的方法和试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于在靶向核酸序列处产生多样性的组合物和方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年5月2日提交的美国临时申请第62/842,184号的权益，所述临时申请以引用的方式整体并入本文。


[0003]本公开涉及与使用催化失活的指导核酸酶与诱变剂组合以在靶向核酸处产生修饰有关的组合物和方法。
[0004]序列表的并入
[0005]名称为P34716WO00_SEQ.txt的文件中所含的序列表为104,213字节(在中测量)并且创建于2020年5月1日，并且包含43个序列，以电子方式一起提交且以引用的方式整体并入。

技术介绍

[0006]化学诱变剂，如甲磺酸乙酯(EMS)和电离辐射长期以来一直被用作植物育种中诱导遗传变异的工具。已经通过诱变开发了具有理想性状(如较大的种子大小、抗病性和更好的纤维质量)的植物品种。由诱变剂引入的遗传变化在基因组内随机发生，使育种者无法精确控制突变的数量、它们在基因组中的位置或诱变剂所靶向的细胞(例如，体细胞对生殖细胞)。育种者可调整诱变剂的剂量以限制或最大化所引入的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种在靶核酸分子中诱导靶向修饰的方法，所述方法包括使所述靶核酸分子与以下各项接触：(a)催化失活的指导核酸酶；和(b)至少一种诱变剂，其中在所述靶核酸分子中诱导至少一种修饰。2.一种在靶核酸分子中诱导靶向修饰的方法，所述方法包括使所述靶核酸分子与以下各项接触：(a)催化失活的指导核酸酶；(b)至少一种指导核酸，其中所述至少一种指导核酸与所述催化失活的指导核酸酶形成复合物，并且其中所述至少一种指导核酸与所述靶核酸分子杂交；和(c)至少一种诱变剂，其中所述靶核酸分子包含前间区序列邻近基序(PAM)位点，并且其中在所述靶核酸分子中在所述PAM位点的100个核苷酸内诱导至少一种修饰。3.一种增加核酸分子的靶向区域中的突变率的方法，所述方法包括使所述靶核酸分子与以下各项接触：(a)催化失活的指导核酸酶；(b)至少一种指导核酸，其中所述至少一种指导核酸与所述催化失活的指导核酸酶形成复合物，并且其中所述至少一种指导核酸与所述靶核酸分子杂交；和(c)至少一种诱变剂，其中所述靶核酸分子包含前间区序列邻近基序(PAM)位点，并且其中与非靶向核酸分子相比，所述核酸分子的所述靶向区域中的突变率增加。4.一种增加植物基因组内的核酸分子的靶区域中的等位基因多样性的方法，所述方法包括向所述植物提供：(a)催化失活的指导核酸酶或编码所述催化失活的指导核酸酶的核酸；(b)至少一种指导核酸或编码所述至少一种指导核酸的核酸，其中所述至少一种指导核酸与所述催化失活的指导核酸酶形成复合物，并且其中所述至少一种指导核酸与所述核酸分子杂交；和(c)至少一种诱变剂，其中所述核酸包含邻近于所述靶向区域的前间区序列邻近基序(PAM)位点，并且其中所述核酸分子的所述靶区域的等位基因多样性增加。5.一种提供具有改进的农艺特征的植物的方法，所述方法包括：(a)向第一植物提供：(i)催化失活的指导核酸酶或编码所述催化失活的指导核酸酶的核酸；(ii)至少一种指导核酸或编码所述指导核酸的核酸，其中所述至少一种指导核酸与所述催化失活的指导核酸酶形成复合物，其中所述至少一种指导核酸与所述植物基因组中的靶核酸分子杂交，并且其中所述靶核酸分子包含前间区序列邻近基序(PAM)位点；和(iii)至少一种诱变剂；其中在所述靶核酸分子中诱导至少一种修饰；(b)从所述第一植物产生至少一种子代植物；以及
(c)选择包含所述至少一种修饰和所述改进的农艺特征的至少一种子代植物。6.一种用于在靶核酸中诱导靶向修饰的试剂盒，所述试剂盒包含：(a)催化失活的指导核酸酶或编码所述催化失活的指导核酸酶的核酸；和(b)至少一种化学诱变剂。7.如权利要求1所述的方法或如权利要求6所述的试剂盒，其中所述方法或试剂盒还包含(c)至少一种指导核酸或编码所述至少一种指导核酸的核酸，其中所述至少一种指导核酸与所述催化失活的指导核酸酶形成复合物，并且其中所述至少一种指导核酸与所述靶核酸分子杂交。8.如权利要求1
‑
5中任一项所述的方法或如权利要求6所述的试剂盒，其中所述催化失活的指导核酸酶包含DNA结合结构域。9.如权利要求1
‑
3中任一项所述的方法，其中所述靶核酸分子位于细胞中。10.如权利要求9所述的方法，其中所述细胞是大肠杆菌细胞。11.如权利要求9所述的方法，其中所述细胞是植物细胞或动物细胞。12.如权利要求11所述的方法，其中所述植物细胞选自由以下组成的组：玉米细胞、棉花细胞、油菜细胞、大豆细胞、水稻细胞、番茄细胞、小麦细胞、苜蓿细胞、高粱细胞、拟南芥细胞、黄瓜细胞、马铃薯细胞和藻类细胞。13.如权利要求9所述的方法，其中通过选自由以下组成的组的方法向细胞提供(i)所述催化失活的指导核酸酶或编码所述催化失活的指导核酸酶的核酸；或(ii)所述至少一种指导核酸或编码所述至少一种指导核酸的核酸；或(iii)(i)和(ii)两者：土壤杆菌介导的转化、聚乙二醇介导的转化、生物射弹转化、脂质体介导的转染、病毒转导、使用一种或多种递送颗粒、显微注射和电穿孔。14.如权利要求2...

【专利技术属性】
技术研发人员：G，
申请(专利权)人：孟山都技术公司，
类型：发明
国别省市：