一种协同增效的刺参用复合免疫增强剂的制备方法技术

本发明专利技术公开一种协同增效的刺参用复合免疫增强剂的制备方法，其组分及在单位重量饲料中的添加浓度为：复合中草药40～60mg/g，地衣芽孢杆菌106～108cfu/g，葡萄糖酸亚铁0.5～1.5mg/g，葡萄糖酸铜0.2～0.8mg/g。称取各味中草药并进行粗粉碎，之后将中草药按照重量百分比混合均匀，用超微粉碎机进行粉碎。活化、重悬地衣芽孢杆菌，调整菌液浓度。将处理后的复合中草药、地衣芽孢杆菌与矿物质元素葡萄糖酸亚铁、葡萄糖酸铜按比例添加到刺参饲料中，加少量海水搅拌均匀后对刺参进行投喂。本复合免疫增强剂的各组分共同作用、协同增效，提高抗病能力来综合提升刺参的非特异性免疫机能。能力来综合提升刺参的非特异性免疫机能。

【技术实现步骤摘要】
一种协同增效的刺参用复合免疫增强剂的制备方法


[0001]本专利技术涉及一种协同增效的刺参用复合免疫增强剂，具体涉及一种中草药、地衣芽孢杆菌与矿物质元素葡萄糖酸亚铁、葡萄糖酸铜配伍的免疫增强剂及其制备方法与使用技术，属于棘皮动物免疫学


技术介绍

[0002]刺参(Apostichopus japonicus)属于棘皮动物门、海参纲，富含蛋白质、矿物质、维生素等多种天然活性物质，具有极高的营养和药用价值。随着刺参养殖规模的不断扩大以及集约化养殖方式下的不规范运作，刺参养殖过程中相继出现了种质退化、病害频发及成本增加等问题，严重阻碍了刺参养殖业的健康发展。刺参属于无脊椎棘皮动物，缺乏特异性免疫系统，主要依赖天然免疫机制对进入机体的异物进行识别、排除。刺参饲料的质量直接影响养殖刺参的健康和养殖环境质量，合理配伍的饲料添加剂可通过改善肠道健康、提高生长指数、增强抗病能力来大幅度提高刺参的非特异性免疫机能，从而提高刺参的养殖效益。抗生素类药物由于细菌抗药性、食品和环境安全等问题在刺参养殖上存在很大的局限性。目前市面上刺参用免疫增强剂产品质量良莠不齐，缺乏行业规范与管理。因此，寻找绿色无公害、营养丰富的刺参用免疫增强剂势在必行。
[0003]CN200910017176.7提供一种刺参腐皮综合征的抗菌免疫双效复方中草药，药物成分为穿心莲、大青叶、金银花和川芎；药物按重量配比为2∶1∶3∶2；药物呈粉末状，粒度200目。以口服方式防治刺参腐皮综合征，本专利技术是刺参腐皮综合征的专用药物，幼参期和成参期均可使用，在腐皮综合征高发期其预防效果良好；对患病刺参2～3周内的治愈率达到80～90％，存活率达85％以上。该复方中草药具有免疫、抗病双效作用，无毒副作用，使用方法简便，可减少或替代抗生素使用，适用于幼参培育和养殖生产疾病控制。
[0004]CN200810012641.3公开一种治疗刺参细菌性化皮病的复方中草药制剂，其药物成分及重量百分比为：乌梅80～90％，五倍子10～20％。水煎煮后用于化皮刺参的药浴或全池泼洒，在刺参体内无残留；添加量小，使用方便；组成简单，所用原料来源稳定，价格低廉，生产工艺简单。
[0005]CN201210206056.3公开一种刺参中草药复合免疫增强剂，其特征在于：包括如下组分：党参、茯苓、五味子、穿心莲、双花；刺参中草药复合免疫增强剂所有组份均为中药，杀菌、驱虫和抗病毒作用强，无毒、无副作用、无污染，成本低，制备容易，刺参为棘皮动物，属于无脊椎动物，免疫反应主要以非特异性免疫为主。
[0006]目前，市售的刺参用免疫增强剂大多是在饲料中单一添加益生菌制剂、中草药或者矿物质元素，制备及应用方式比较单一。首先，现有技术使用中草药的有效成分如淀粉、果胶、蛋白酶等成分含有葡萄糖苷类化合物，在刺参肠内难以吸收，生物利用度低。而且，中草药中的大分子物质的活性物质溶出率低，不利于机体吸收。而部分中草药的毒性成分也直接影响刺参的养殖效果。其次，地衣芽孢杆菌的生长需要专一性底物以提高其存活率，而刺参肠道内环境不适合地衣芽孢杆菌的有效增殖，生物利用率较低。再次，刺参养殖中免疫
增强剂的使用必须保证无污染、无残留、无抗药性、无毒副作用，而矿物质元素的铜、铁无机盐具有生物学毒性，对刺参的生长指标及免疫能力均有一定的负面影响。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于弥补现有技术的不足，提供一种中草药、地衣芽孢杆菌与矿物质元素联合应用的刺参用复合免疫增强剂。该复合免疫增强剂各组分共同作用、协同增效，可以通过提高生长指数、增强相关酶活性、降低发病率、改善肠道健康等方面来综合提升刺参的非特异性免疫机能。
[0008]本专利技术的技术解决方案是：
[0009]一种协同增效的刺参用复合免疫增强剂，其中复合中草药、地衣芽孢杆菌、葡萄糖酸亚铁、葡萄糖酸铜在单位重量饲料中的添加浓度如下：复合中草药40～60mg/g；地衣芽孢杆菌106～108cfu/g；葡萄糖酸亚铁0.5～1.5mg/g；葡萄糖酸铜0.2～0.8mg/g。
[0010]进一步，各组分在单位重量饲料中的优选添加浓度为：复合中草药50mg/g；地衣芽孢杆菌107cfu/g；葡萄糖酸亚铁0.8mg/g；葡萄糖酸铜0.4mg/g。
[0011]进一步，按质量份，本复合免疫增强剂中各味中草药的质量百分比组成如下：黄芩15～25份；黄柏10～20份；当归15～25份；大黄10～25份；大青叶5～10份；甘草5～15份；红景天15～25份；明日草10～20份。
[0012]进一步，所述复合免疫增强剂疫包括中草药黄芩、黄柏、当归、大黄、大青叶、甘草、红景天、明日草中的五种及以上。
[0013]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了上述复合免疫增强剂的制备方法。其中，所述制备方法为：
[0014](1)按照重量百分比称取各味中草药，采用中药粉碎机分别对各组分进行粗粉碎；
[0015](2)将粗粉碎后的各种中草药原料依次投入混合机内，混合均匀，放入超微粉碎机粉碎，备用；
[0016](3)将超低温冰箱冻存的地衣芽孢杆菌活化并重悬；
[0017](4)将活化后的地衣芽孢杆菌菌悬液以5～8％的接种比例加入到MSB液体培养基中，28～35℃、140～180rpm振荡培养；
[0018](5)将地衣芽孢杆菌培养至对数生长期后，离心弃上清，用无菌海水重悬菌液，采用比浊法调整菌液浓度，备用；
[0019](6)将处理后的中草药、地衣芽孢杆菌与矿物质元素葡萄糖酸亚铁、葡萄糖酸铜按比例添加到刺参饲料中，混合均匀。
[0020]所述步骤(1)中，粉碎粒度为50～100目。所述步骤(2)中，粉碎粒度为200～400目。
[0021]为了实现上述专利技术目的，本专利技术又提供了上述复合免疫增强剂的应用方法。其中，所述应用方法为：
[0022](1)刺参单体质量3～10g，饲料日投量为刺参体质量的4～8％。将复合中草药、地衣芽孢杆菌与葡萄糖酸亚铁、葡萄糖酸铜按比例添加到饲料中，加少量海水搅拌均匀后对刺参进行投喂。
[0023](2)每日投喂1次，投喂时间为下午16:00～18:00，期间保持充气，定期换水，海水温度15～20℃，pH7.8～8.1，盐度29～32。溶解氧不低于5mg/L，氨氮不高于0.5mg/L。
[0024]技术方案机理为：
[0025]本专利技术中，地衣芽孢杆菌产生的有机酸，如柠檬酸参与三羧酸循环和ATP的生成与转化。反应机理见下式：
[0026][0027]有机酸在改善消化道环境的同时可以分别与葡萄糖酸亚铁中的Fe
2+
和葡萄糖酸铜中的Cu
2+
结合形成易于吸收的生物效价较高的络合产物。
[0028]本专利技术中，黄芩、黄柏、大黄、大青叶含有黄酮、大黄酸和生物碱类物质，可以有效抑制条件致病菌生长，同时提高机体抵抗病毒和内毒素侵染的能力，增强机体的屏障防御能力。当归、甘草、明日草、红景天富含多种维生本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种协同增效的刺参用复合免疫增强剂的制备方法，其特征在于，所述免疫增强剂中复合中草药、地衣芽孢杆菌、葡萄糖酸亚铁、葡萄糖酸铜在单位重量饲料中的添加浓度如下：复合中草药40～60mg/g；地衣芽孢杆菌106～108cfu/g；葡萄糖酸亚铁0.5～1.5mg/g；葡萄糖酸铜0.2～0.8mg/g。2.根据权利要求1所述的一种协同增效的刺参用复合免疫增强剂的制备方法，其特征在于，复合中草药、地衣芽孢杆菌、葡萄糖酸亚铁、葡萄糖酸铜在单位重量饲料中的添加浓度为：复合中草药50mg/g；地衣芽孢杆菌107cfu/g；葡萄糖酸亚铁0.8mg/g；葡萄糖酸铜0.4mg/g。3.根据权利要求1所述的一种协同增效的刺参用复合免疫增强剂的制备方法，其特征在于，按质量分，所述免疫增强剂中复合中草药的组成如下：黄芩10～25份；黄柏10～20份；当归15～25份；大黄10～25份；大青叶5～10份；甘草5～15份；红景天15～25份；明日草10～20份。4.根据权利要求3所述的一种协同增效的刺参用复合免疫增强剂的制备方法，其特征在于，所述免疫增强剂疫包括中草药黄芩、黄柏、当归、大黄、大青叶、甘草、红景天、明日草中的五种及以上。5.根据权利要求1所述的一种协同增效的刺参用复合免疫增强剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)按照重量百分比称取各味中草药，采用中药粉碎机分别对各组分进行粗粉碎；(2)将粗粉碎后的各种中草药原料依次投入混合机内，混合均匀，放入超微粉碎机粉碎，备用；(3)将超低温冰箱冻存的地衣芽孢杆菌活化并重悬；(4)将活化后的地衣芽孢杆菌菌悬液以5～8％的接种比例加入到MSB液体培养基中，28～35℃、140～180rpm振荡培养；(5)将地衣芽孢杆菌培养至对数生长期后，离心弃上清，用无菌海水重悬菌液，采用比浊法调整菌液浓度，备用；(6)将处理后的中草药、地衣芽孢杆菌与...

【专利技术属性】
技术研发人员：王旭达，董颖，李石磊，周遵春，关晓燕，蒋经伟，王笑月，范琦，叶博，赵振军，陈仲，高学文，
申请(专利权)人：辽宁省海洋水产科学研究院，
类型：发明
国别省市：