一种近红外响应的仿生纳米制剂及其制备方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种近红外响应的仿生纳米制剂。该仿生纳米制剂包括HBV肝细胞模型的细胞膜和包裹在细胞膜内的纳米载体，所述纳米载体包括近红外响应的上转换纳米粒子和CRISPR/Cas9，所述上转换纳米粒子表面修饰有亲和素蛋白，所述亲和素蛋白和CRISPR/Cas9之间连接有生物素修饰的光解分子。其解决了现有技术中存在的CRISPR/Cas9递送系统免疫原性高、靶向性低、运载负荷小且无法实现远程时空操作的问题。建立了一种低免疫原性、靶向性高、运载负荷大、生产合成简便的高效CRISPR/Cas9递送系统，以及对CRISPR/Cas9实施精准的远程时空操作。以及对CRISPR/Cas9实施精准的远程时空操作。

【技术实现步骤摘要】
一种近红外响应的仿生纳米制剂及其制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及DNA重组
，尤其涉及一种近红外响应的仿生纳米制剂及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是全球面临的主要公共卫生问题之一。据WHO报道，目前全球有约3亿HBV感染者，其中近1亿在中国；每年因HBV感染所致死的近100万，其中半数在中国。目前临床上治疗乙型肝炎患者的药物主要有干扰素和核苷(酸)类似物两大类，旨在减少患者血清和肝组织中的HBV DNA。但在漫长的治疗过程中患者会存在耐药突变以及向肝纤维化、肝硬化和肝癌转化的风险，并且上述药物虽可显著抑制HBV复制，但均不能直接作用于肝细胞核中的HBV复制模板
‑‑
共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)，因此不能完全清除体内的共价闭合环状DNA，导致乙型肝炎难以完全治愈。HBV cccDNA是HBV慢性感染及复发的根源，其表达水平是临床监测抗病毒治疗疗效以及指导治疗方案的重要指标。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种近红外响应的仿生纳米制剂，其特征在于：包括肝细胞模型的细胞膜和包裹在细胞膜内的纳米载体，所述纳米载体包括近红外响应的上转换纳米粒子和CRISPR/Cas9，所述上转换纳米粒子表面修饰有亲和素蛋白，所述亲和素蛋白和CRISPR/Cas9之间连接有生物素修饰的光解分子。2.如权利要求1所述的一种近红外响应的仿生纳米制剂，其特征在于：所述肝细胞模型为HBV复制肝细胞模型、HBV感染肝细胞模型、原代肝细胞模型中的一种。3.如权利要求1所述的一种近红外响应的仿生纳米制剂，其特征在于：所述近红外响应的上转换纳米粒子为核壳结构，Ca
2+
掺杂的NaYF4:Yb
3+
/Tm
3+
为核，NaYF4:Yb/Nd为壳。4.如权利要求1所述的一种近红外响应的仿生纳米制剂，其特征在于：所述生物素修饰的光解分子为PC生物素
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nhs酯。5.如权利要求1所述的一种近红外响应的仿生纳米制剂，其特征在于：所述CRISPR/Cas9包括Cas9蛋白和sgRNA，所述sgRNA对应的DNA序列如SEQ ID NO.1
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3所示。6.一种近红外响应的仿生纳米制剂的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：1)构建CRISPR/Cas9：设计合成sgRNA，并将sgRNA与Cas9蛋白共孵育，制备CRISPR/Cas9；2)制备纳米载体UCNPs
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Cas9：合成上转换纳米粒子，并对上转换纳米粒子进行亲水性改性和亲和素表面修饰，得到UNCPs
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Avidin，之后与生物素修饰的光解分子进行连接反应形成纳米颗粒UNC...

【专利技术属性】
技术研发人员：王丹，陈柳先，袁睿，李承碧，罗艳秋，汤青霞，文飞，李滔，
申请(专利权)人：重庆市荣昌区人民医院，
类型：发明
国别省市：