一种基于肿瘤微环境的Lewis肺癌小鼠模型及其构建方法技术

本发明专利技术公开了一种基于肿瘤微环境的Lewis肺癌小鼠模型及其构建方法，属于肿瘤模型技术领域，所述Lewis肺癌小鼠模型中含有Lewis肺癌细胞、外周血单个核细胞和成纤维细胞，其中Lewis肺癌细胞与外周血单个核细胞的比例为（1

【技术实现步骤摘要】
一种基于肿瘤微环境的Lewis肺癌小鼠模型及其构建方法


[0001]本专利技术涉及肿瘤模型
，尤其涉及一种基于肿瘤微环境的Lewis肺癌小鼠模型及其构建方法。

技术介绍

[0002]目前肺癌在中国和全球的恶性肿瘤发病率和死亡率中均居前位，是威胁人类健康的第一大类恶性肿瘤。目前肺癌的治疗包括手段：手术、放疗、化疗、靶向、免疫疗法等等。近年来，肿瘤微环境机制研究(肿瘤免疫微环境)成为研究热点方向。
[0003]动物模型成为了研究肿瘤免疫机制以及临床治疗疗效的重要临床前实验模型。常见的动物模型包括:异位移植动物模型、原位移植动物模型、诱发性动物模型、转基因动物模型。
[0004]目前常见的动物模型的情况见表1
[0005]表1常见肿瘤小鼠模型
[0006][0007][0008]目前所知的，肿瘤微环境(TME)由肿瘤细胞、细胞外基质(ECM)、肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)、内皮细胞、免疫细胞等多种细胞成分以及血管组成，TME在肿瘤增殖、侵袭、转移、血管生成、代谢、免疫抑制及药物抵抗等方面发挥重要作用。
[0009]肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)是TME内的一个异质性淋巴细胞群体，主要包括T细胞、B细胞、树突状细胞(DCs)、自然杀伤细胞(NK)、巨噬细胞等。其中，T淋巴细胞主要有三种亚型：CD8+、CD4+、调节性T细胞(Treg cells)。而人体免疫系统又由树突状细胞(DC)、自然杀伤细胞(NK)、CD8+T细胞、调节性T细胞(Treg)、肿瘤相关巨噬细胞(TAM)、髓源性抑制细胞(MDSC)等构成。
[0010]目前较为常用动物模型：异位移植动物模型，其明显不足之处是：肿瘤组织中浸润的淋巴细胞少，肿瘤组织中血管不丰富，如图1所示。
[0011]从图1的对比可以看出，目前的肺癌小鼠模型无法真正模拟肺癌患者肿瘤微环境，对于肿瘤免疫机制的研究结果也就欠缺说服力。
[0012]因此，亟需构建一个最接近于肿瘤患者肿瘤免疫微环境的小鼠模型。

技术实现思路

[0013]本专利技术的目的之一，就在于提供一种基于肿瘤微环境的Lewis肺癌小鼠模型，以解决上述问题。
[0014]为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是这样的：一种基于肿瘤微环境的Lewis肺癌小鼠模型，其所述Lewis肺癌小鼠模型中含有Lewis肺癌细胞、外周血单个核细胞和成纤维细胞，其中Lewis肺癌细胞数与外周血单个核细胞数的比例为(1
‑
15):1。
[0015]作为优选的技术方案：Lewis肺癌细胞数与外周血单个核细胞数的比例为5:1。
[0016]本申请中，除非特别说明，上述比例是指LLC与PBMC细胞数的比例，目前针对现有移植瘤模型中只注射了肿瘤细胞，而为了更好模拟原位肿瘤微环境，提高肿瘤成瘤率，本申请构建了上述模型，将三者混合进行接种是本申请的专利技术点，而具体比例只是本项目验证结果之一。其中在LLC、PBMC和L929几种细胞混合，发现LLC、PBMC和L929的比例为5:1效果最佳，L929在后文有描述均为1x105个。
[0017]本专利技术的目的之二，在于提供一种上述的基于肿瘤微环境的Lewis肺癌小鼠模型的构建方法，采用的技术方案为：为小鼠接种所述比例的Lewis肺癌细胞、外周血单个核细胞和成纤维细胞，即得。
[0018]作为优选的技术方案：所述小鼠为C57BL/6雄性小鼠，6
‑
8周龄，体重20
‑
22g。
[0019]外周血单个核细胞(PBMC)，Lewis肺癌细胞(LLC)，成纤维细胞(L929)
[0020]与现有技术相比，本专利技术的优点在于：本专利技术构建的Lewis肺癌小鼠模型，能够在小鼠体内构建更接近于肿瘤患者免疫微环境，从而为肿瘤治疗的机制研究提供更合适更准确有效的模型。
附图说明
[0021]图1为现有技术中Lewis小鼠模型与肺癌患者组织扫描对比图；
[0022]图2为本专利技术的模型构建技术路线图；
[0023]图3为各组小鼠在不同时间成瘤率变化曲线；
[0024]图4为Lewis肺癌移植瘤体积大小变化曲线；
[0025]图5为实验终点时小鼠移植瘤体积(均值
±
SD)；
[0026]图6为Lewis肺癌移植瘤体积大小变化柱状图(均值
±
SD)；
[0027]图7
‑
9为不同组荷瘤小鼠外周血效应T细胞表达结果；
[0028]图10
‑
11为不同组荷瘤小鼠外周血效应Treg细胞表达结果
[0029]图12为不同组荷瘤小鼠HE染色结果；
[0030]图13为不同组荷瘤小鼠免疫组化FAPα扫描电镜图(
×
200)；
[0031]图14为不同组荷瘤小鼠免疫组化FAPα百分比对比图；
[0032]图15
‑
17为不同组荷瘤小鼠多重免疫荧光图；
[0033]图18为不同组荷瘤小鼠免疫荧光CD8+结果图；
[0034]图19为不同组荷瘤小鼠免疫荧光CD39+结果图；
[0035]图20为不同组荷瘤小鼠免疫荧光PD
‑
1结果图；
[0036]图21
‑
23为不同组荷瘤小鼠放疗肿瘤体积变化图；
[0037]图24为不同组荷瘤小鼠放疗CD4细胞/CD3细胞百分比；
[0038]图25为不同组荷瘤小鼠放疗CD8细胞/CD3细胞百分比；
[0039]图26为不同肿瘤组织中CD8、CD39和PD1表达情况。
具体实施方式
[0040]下面将结合附图对本专利技术作进一步说明。
[0041]实施例1
[0042]一种基于肿瘤微环境的Lewis肺癌小鼠模型的构建方法，参见图2，其中，所述Lewis肺癌小鼠模型中含有Lewis肺癌细胞(简称“LLC”)、外周血单个核细胞(简称“PBMC”)和成纤维细胞(本实施例的成纤维细胞选用L929)，
[0043]细胞株：Lewis肺癌细胞(LLC)、成纤维细胞(L929)
[0044]实验动物：母系同源的近交系C57BL/6雄性小鼠，6
‑
8周龄，体重20
‑
22g。
[0045]按是否同源分组，每组6只，如下，
[0046]A组：LLC+PBMC(灭活lymphocyte)
[0047]B组：LLC+PBMC(灭活lymphocyte)+L929
[0048]C组：LLC+PBMC(LLC:PBMC＝1:1)
[0049]D组：LLC+PBMC+L929(LLC:PBMC＝1:1)
[0050]E组：LLC+PBMC(LLC:PBMC＝5:1)
[0051]F组：LLC+PBMC+L929(LLC:PBMC＝5:1)
[0052]G组：LLC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于肿瘤微环境的Lewis肺癌小鼠模型，其特征在于：所述Lewis肺癌小鼠模型中含有Lewis肺癌细胞、外周血单个核细胞和成纤维细胞，其中Lewis肺癌细胞数与外周血单个核细胞数的比例为（1
‑
15）:1。2.根据权利要求1所述的基于肿瘤微环境的Lewis肺癌小鼠模型，其特征在于：Lewis肺癌细胞数与外周血单个核细...

【专利技术属性】
技术研发人员：李涛，李科，黄建鸣，吕家华，
申请(专利权)人：四川省肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：