一种用于扩增SARS-CoV-2的CAMP引物组及试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，尤其涉及一种用于扩增SARS

【技术实现步骤摘要】
一种用于扩增SARS
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CoV
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2的CAMP引物组及试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种用于扩增2019新型冠状病毒(SARS
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CoV
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2)的CAMP引物组及试剂盒。

技术介绍

[0002]SARS
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CoV
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2为经分离确认的一种新型冠状病毒，该病毒病原传播性强、传播迅速。在一项对41例疫情早期病例的临床研究发现，SARS
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CoV
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2患者进入ICU的重症患者占比率的31.7％，疾病总死亡率达到14.6％，对公共卫生安全造成极大的威胁。我国现已将其归为乙类法定传染病，并归为甲类传染病管理。由SARS
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CoV
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2引起的新型冠状病毒肺炎(Coronavirus disease 19,COVID
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19)已经成为威胁全人类生命健康的恶行传染性疾病。根据世卫组织实时统计数据，截至北京时间2021年9月19日，全球累计确诊新型冠状病毒肺炎患者超2.28亿例，累计死亡人数超过460万例。新型冠状病毒正严重威胁着人类的生存健康，且可能会长久与人类共存。早期快速诊断新冠病毒感染者，对于限制病毒传播及病人的救治起着至关重要的作用。
[0003]截止2020年11月5日，国家药品监督管理局共批准新冠病毒核酸检测试剂24个，抗体检测试剂25个，抗原检测试剂2个。核酸检测试剂中，只有3个应用恒温检测的试剂，其中绝大部分都是应用荧光PCR法作为检测方法。荧光PCR核酸检测法，具备可靠性高等优点，但同时也存在着对试验设备要求高、操作流程复杂、检测时间长，依赖仪器判读结果等限制因素，使得这类检测试剂在经济欠发达地区以及机场、车站等特殊环境的推广使用有一定的困难。核酸恒温扩增技术相较于荧光PCR检测，除了同样具备高特异性和高灵敏度的优点，其操作简易，不依赖高端仪器，检测用时短，可通过肉眼直接判读检测结果的特性，是非常适合仪器设施较欠缺的现场快速检测应用的方法。目前市场上推广的核酸恒温检测类方法有RPA、LAMP等，均为国外专利，在限制了在我国市场的应用推广。
[0004]基于竞争性互补配对的核酸恒温扩增技术(Competitive annealing mediated amplification of nucleic acids，CAMP)是中国科学院过程工程研究所开发的替代日本LAMP核酸扩增的方法(见EP3476938)。该方法在等温条件进行扩增，利用一组数量从2种到6种不同的特异性引物来与靶序列特异识别，30分钟左右完成反应，在反应体系中可以加入可视化染料，在反应结束后，通过肉眼观察试剂颜色判定结果。与其他基因检测方法(如荧光PCR、PCR等)相比，CAMP反应在恒温水浴锅内都可以完成，不需要价格高昂的仪器设备；肉眼可以判定反应结果，不需要通过操作步骤繁多且费时的凝胶电泳法来判定结果；操作简单，没有专业技能的人员也可以顺利完成试验，适合基层医疗机构及地方检验检疫部门的应用。并且，CAMP还可以大大缩短操作时间，减少样品污染机会，适合应用于COVID
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19的快速诊断。

技术实现思路

[0005]本专利技术为了解决上述问题，提供了一种用于扩增SARS
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CoV
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2 CAMP引物组及试剂
盒与应用，本专利技术提供的引物灵敏度和特异性皆很高，将其制备成为试剂盒可实现对SARS
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CoV
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2快速准确的检测。
[0006]本专利技术的用于扩增SARS
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CoV
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2的CAMP引物组，包括针对SARS
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CoV
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2的S区片段扩增的引物组和/或针对SARS
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CoV
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2的N区片段扩增的引物组。
[0007]优选地，所述引物组针对的片段包括针对如SEQ ID NO.13所示的SARS
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CoV
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2的S区片段和如SEQ ID NO.14所示的SARS
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CoV
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2的N区片段。其中，所述针对SARS
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CoV
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2的S区片段扩增的引物组包括三对引物，分别为：S
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F2：其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，S
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R2：其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；以及，S
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NF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，S
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NR：其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；S
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LF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，S
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LR：其核苷酸序列如SEQ ID NO.6。
[0008]所述针对SARS
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CoV
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2的N区片段扩增的引物组包括三对引物，分别为：N
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F2：其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，N
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R2：其核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；以及，N
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NF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，N
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NR：其核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；N
‑
LF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示；N
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LR：其核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示。
[0009]本专利技术提供的CAMP引物组针对SARS
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CoV
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2的特异保守区域(靶基因)，由上述的各自所针对的6条引物组成，包括序列内引物(NF/NR)一组、外引物(F2/R2)一组，环引物(LF/LR)。其中，NF/NR分别为上下游内部引物，由F2区和F1c区域组成，F2区与靶基因3
’
端的F2c区域互补，F1c区与靶基因5
’
端的F1c区域序列相同。F2/R2分别为上下游外部引物，由F2区组成，并与靶基因的F2c区域互补。具体核苷酸序列如下表1所示：
[0010]表1核苷酸序列
[0011][0012][0013][0014][0015]本专利技术的用于检测SARS
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CoV
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2的试剂盒，包括上述的CAMP引物组。优选可以将CAMP引物组放入超纯水中制成工作液。所述引物组的工作液可以为含1～20μM的F2、R2引物及5～80μM的NF、NR引物的混合液。
[0016]根据本专利技术所述的试剂盒，其中，还包括CAMP反应液和CAMP显色液。进一步地，所述CAMP反应液包括：Bst聚合酶、AMV反转录酶、CAMP反应缓冲液和超纯水。其中，CAMP反应缓冲液包括Tris
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HCl、KCl、(NH4)2SO4、MgS本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于扩增SARS
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CoV
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2的CAMP引物组，其特征在于，所述CAMP引物组包括针对SARS
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CoV
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2的S区片段扩增的引物组和/或针对SARS
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CoV
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2的N区片段扩增的引物组。2.根据权利要求1所述的CAMP引物组，其特征在于，所述针对SARS
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CoV
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2的S区片段扩增的引物组包括三对引物，分别为：S
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F2：其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，S
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R2：其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；以及，S
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NF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，S
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NR：其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；S
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LF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；S
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LR：其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述针对SARS
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CoV
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2的N区片段扩增的引物组包括三对引物，分别为：N
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F2：其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，N
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R2：其核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；以及，N
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NF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，N
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NR：其核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；N
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LF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示；N
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LR：其核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示。3.一种用于检测SARS
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CoV
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2的试剂盒，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜昱光，赵雪，葛少林，王倬，王瀚博，陈燕旌，冯翠，张毓宸，
申请(专利权)人：中国科学院过程工程研究所，
类型：发明
国别省市：