tsRNA分子及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种tsRNA分子及其用途。该新型分子与多发性骨髓瘤有关，命名为tRF

【技术实现步骤摘要】
tsRNA分子及其用途


[0001]本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一种多发性骨髓瘤相关的tsRNA分子及其用途。

技术介绍

[0002]多发性骨髓瘤(MM)是一种无法治愈的具有复发倾向的浆细胞肿瘤，是第二常见的血液系统恶性肿瘤，常表现为贫血、骨痛、感染、神经症状、淀粉样变等。尽管近年来如蛋白酶体抑制剂、CD38单克隆抗体等新药的出现显着改善了预后，但临床上我们仍经常面临多发性骨髓瘤的复发和耐药。因此，探索复发耐药的机制的是改善多发性骨髓瘤患者临床疗效和延长生存期的关键。
[0003]细胞遗传学异常、染色体易位、致癌基因的激活及骨髓微环境等多种因素与多发性骨髓瘤的复发难治相关。非编码RNA(ncRNA)是一类不编码蛋白质的RNA，过去的研究已经发现了非编码RNA在各种生物过程中的重要作用，它们在人类疾病中的基本作用已经得到了很好的证实。转移RNA(tRNAs)是在蛋白质生物合成过程中传递氨基酸到核糖体的管家ncRNA。tRNA片段(tRNA derived fragments)是一种通过酶切tRNAs产生的小非编码RNA，并已被证明在多种生物进程中发挥类似microRNAs的关键调控作用。
[0004]tRNAs在其生命周期中经历了广泛的加工和一系列的化学修饰，在tRNA成熟过程中，根据前体、成熟tRNAs的裂解位置，这种tRNA衍生片段(tRNA derived fragments)可以大致分为tRF(tRNA related Fragments)和tiRNA(tRNA halves)，又可以进一步细分为tRF
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5、tRF
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3、tRF
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1、tRF
‑
2和tiRNA。tRFs/tiRNAs广泛存在于各种组织细胞，表达水平具有高度组织、疾病和时序特异性，可参与基因沉默、蛋白质翻译、细胞应激和细胞分化等多种分子过程。虽然tRFs/tiRNAs的生物学功能及其复杂，有待进一步阐明，但目前对其功能的认识可归纳为:RNA沉默、翻译调控和表观遗传调控。

技术实现思路

[0005]本专利技术的首要目的是提供一种多发性骨髓瘤相关的tsRNA分子。tsRNA在多发性骨髓瘤病程中的相关研究少有报道。本专利技术利用高通量测序鉴定出一种在多发性骨髓瘤中异常表达的新型tsRNA分子，命名为tRF
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1:29
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Thr
‑
TGT
‑
2。
[0006]本专利技术的多发性骨髓瘤相关的tsRNA分子的cDNA序列为GGCTCCATAGCTCAGTGGTTAGAGCACTG。见SEQ ID NO.1所示。
[0007]本专利技术的第二个目的是提供检测上述的tsRNA分子的试剂的用途，用于制备复发难治多发性骨髓瘤诊断和/或预后制剂。主要是区分初诊多发性骨髓瘤患者和复发难治多发性骨髓瘤患者。
[0008]本专利技术后续再通过实时定量PCR(Real
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time quantitative polymerase chain reaction，qRT
‑
PCR)扩大样本验证，并通过生存分析探索了该分子的临床意义。
[0009]进一步地，所述的检测上述的tsRNA分子的试剂包括PCR试剂；引物序列优选如下：
[0010]F：5
’‑
TCCATAGCTCAGTGGTTAGAG
‑3’
,见SEQ ID NO.2所示。
[0011]R：5
’‑
GTCCAGTTTTTTTTTTTTTTTCAGTG
‑3’
，见SEQ ID NO.3所示。。
[0012]但本专利技术检测tsRNA分子的PCR试剂中的引物包括但不限于上述序列。
[0013]本专利技术的第三个目的是提供一种复发难治多发性骨髓瘤诊断和/或预后试剂盒，包括检测上述的tsRNA分子的试剂。
[0014]进一步地，所述的检测上述的tsRNA分子的试剂包括PCR试剂；
[0015]引物序列优选如下：
[0016]F：5
’‑
TCCATAGCTCAGTGGTTAGAG
‑3’
,
[0017]R：5
’‑
GTCCAGTTTTTTTTTTTTTTTCAGTG
‑3’
。
[0018]但本专利技术检测tsRNA分子的PCR试剂中的引物包括但不限于上述序列。
[0019]本专利技术通过过表达上述的tsRNA分子表达，多发性骨髓瘤细胞增殖速率、细胞侵袭性明显下降，对药物敏感性增加。
[0020]因此，本专利技术的第四个目的是提供过表达上述的tsRNA分子的试剂用于制备多发性骨髓瘤治疗、降低多发性骨髓瘤细胞增殖速率、降低多发性骨髓瘤细胞侵袭性或者增加对多发性骨髓瘤治疗药物敏感性制剂的用途。
[0021]进一步地，所述的过表达上述的tsRNA分子表达的试剂包括转染试剂。
[0022]转染试剂包括：RNA mimic；
[0023]RNA mimic序列优选：
[0024]sense 5
’‑
GGCUCCAUAGCUCAGUGGUUAGAGCACUG
‑3’
，见SEQ ID NO.4所示。
[0025]anti
‑
sense 5
’‑
GUGCUCUAACCACUGAGCUAUGGAGCCUU
‑3’
，见SEQ ID NO.5所示。
[0026]采用GP
‑
transfect
‑
Mate转染试剂(吉玛基因)转染。
[0027]本专利技术的第五个目的是提供一种治疗多发性骨髓瘤(尤其是复发难治多发性骨髓瘤)、降低多发性骨髓瘤细胞增殖速率、降低多发性骨髓瘤细胞侵袭性或者增加对多发性骨髓瘤治疗药物敏感性的制剂，也就包括过表达上述的tsRNA分子的试剂。
[0028]过表达上述的tsRNA分子的试剂包括过表达转染试剂。
[0029]尽管多发性骨髓瘤疗效近年来得到了显著改善，但其仍不可治愈，肿瘤的耐药/复发极大的威胁着公众健康并带来长期的经济负担。在本专利技术中，发现了一个全新的分子tRF
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1:29
‑
Thr
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TGT
‑
2，并明确了该分子用于临床的预后意义。
[0030]新的tRFs/tiRNAs命名采用来自加州大学圣克鲁兹分校Lowe实验室的标准化tDR命名系统(tDRnamer)，该命名规则分5个部分，依次表示前缀、位置、来源的tRNA、匹配的tRNA转录本和变异。二代测序及qPCR验证确定了tRF
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1:29
‑
Thr
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TGT
‑
2在复发难治多发性骨髓瘤中表达下调，该分子在以往对于多发性骨髓瘤、其他本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种tsRNA分子，其特征在于，其cDNA序列为GGCTCCATAGCTCAGTGGTTAGAGCACTG。2.检测权利要求1所述的tsRNA分子的试剂的用途，其特征在于，用于制备复发难治多发性骨髓瘤诊断和/或预后制剂。3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的检测权利要求1所述的tsRNA分子的试剂包括PCR试剂；引物序列优选如下：F：5
’‑
TCCATAGCTCAGTGGTTAGAG
‑3’
,R：5
’‑
GTCCAGTTTTTTTTTTTTTTTCAGTG
‑3’
。4.一种复发难治多发性骨髓瘤诊断和/或预后试剂盒，其特征在于，包括检测权利要求1所述的tsRNA分子的试剂。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的检测权利要求1所述的tsRNA分子的试剂包括PCR试剂；引物序列优选如下：F：5
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TCCATAGCTCAGTGGTTAGAG
‑3’
,R：5
’‑
GTCCAGTTTTTTTTTTTTTTTCAGTG
‑3...

【专利技术属性】
技术研发人员：傅云峰，许聪，高萌，赵国胜，唐浩，
申请(专利权)人：中南大学湘雅三医院，
类型：发明
国别省市：