AGT抑制剂及其用途制造技术

本申请涉及一种RNAi剂或其药学上可接受的盐，所述RNAi剂的结构中含有载体结构和干扰核酸。本申请还涉及使用所述RNAi剂以抑制AGT基因表达的方法及预防与治疗AGT相关疾病的方法。法。

【技术实现步骤摘要】
AGT抑制剂及其用途


[0001]本申请涉及生物医药领域，具体的涉及一种抑制AGT基因表达的RNAi剂及其应用。

技术介绍

[0002]RNAi
[0003]RNAi(RNA干扰)于1998年，由安德鲁
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法厄(Andrew Z.Fire)等在秀丽隐杆线虫中进行反 义RNA抑制实验时发现，并将这一过程称为RNAi。这一发现被《Science》杂志评为2001 年的十大科学进展之一，并名列2002年十大科学进展之首。自此以后，以RNAi为作用机理 的siRNA作为潜在的基因治疗药物得到人们广泛的关注，2006年，安德鲁
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法厄与克雷格
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梅 洛(Craig C.Mello)由于在RNAi机制研究中的贡献获得诺贝尔生理或医学奖。RNAi是在许多 生物中，包括动物、植物和真菌，都可由双链RNA(dsRNA)触发的，在RNAi过程中，一种 称为“Dicer”的核酸内切酶将长链dsRNA切割或“切丁”成21～25个核苷酸长的小片段。这些小 片段，被称为小干扰RNA(siRNA)，其中的反义链(Guide strand)被加载到Argonaute蛋白(AGO2) 上。AGO2加载发生在RISC
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loading复合物中，这是一个三元复合物，由Argonaute蛋白、 Dicer和dsRNA结合蛋白(简称为TRBP)组成。在装载过程中，正义链(Passenger strand)链被 AGO2裂解并排出。然后，AGO2使用反义链与包含完全互补序列的mRNA结合，然后催化 这些mRNA的切割，致使mRNA分裂丧失翻译模板的作用，进而阻止相关蛋白质的合成。 切割后，被切割的mRNA被释放，加载着反义链的RISC
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loading复合物被循环用于另一轮的 切割。
[0004]据统计，在人体内的疾病相关蛋白中，大约超过80％的蛋白质不能被目前常规的小分子 药物以及生物大分子制剂所靶向，属于不可成药蛋白。旨在通过基因的表达、沉默等功能治 疗疾病的基因治疗被业界认为是继化学小分子药物、生物大分子药物之后的第三代治疗药物， 这种疗法在基因水平上实现对疾病的治疗，不受不可成药蛋白的制约。作为基因治疗中RNAi 技术最主流的类型，RNAi技术是从mRNA的水平对疾病进行治疗，相比化学小分子药物及 生物大分子药物在蛋白质水平的治疗具有更高的效率。利用RNAi技术，可以根据特定基因 序列，设计出特异性高、抑制效果好的siRNA的正义链和反义链序列，通过固相合成这些单 链序列，然后正义链与反义链在特定的退火缓冲液中按照碱基配对原则配对成siRNA，最后 通过载体系统输送到体内相应靶点，降解目标mRNA，破坏目标mRNA作为翻译模板的功能， 从而阻止相关蛋白的合成。
[0005]siRNA的递送系统
[0006]siRNA在血液和组织中不稳定，容易被核酸酶降解，为了提高siRNA的稳定性，可以通过 对siRNA的正义链和/或反义链修饰，但这些化学修饰只提供有限的免受核酸酶降解的保护作 用并且可能最终影响siRNA的活性。因此，还需要相应的传递系统来保障siRNA安全高效的穿 过细胞膜。由于siRNA分子质量较大，且带有大量负电荷，而且具有高水溶解性，所以自身 无法顺利穿越细胞膜到达细胞内。
[0007]脂质体基本结构是由亲水核和磷脂双分子层构成，具备类似生物膜的磷脂双分子
层，拥 有很高的生物相容性，所以脂质体一度成为最受欢迎、应用最广泛的siRNA载体。脂质体介 导的siRNA递送主要将siRNA包裹到脂质体内，保护siRNA不被核酸酶降解，提高siRNA 的通过细胞膜障碍的效率，从而促进细胞的吸收。例如阴离子脂质体、pH敏感性脂质体、免 疫脂质体、膜融合脂质体(fusogenic liposome)和阳离子脂质等等，尽管取得了一定的进展，但 脂质体本身容易引发炎症反应，给药前必须使用多种抗组胺和激素类如西利替嗪和地塞米松 类等药物，以减少可能发生的急性炎症反应，因此在实际临床应用中并不适合所有治疗领域， 尤其像慢性乙肝这一类治疗周期长的疾病，长期使用可能产生的积蓄毒性是潜在的安全隐患， 因此需要一种更安全有效的载体系统来递送siRNA。
[0008]肝脏中去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)，是肝细胞特异性表达的受体，是一种高效的内吞 型受体。由于体内生理情况下各种糖蛋白在酶或酸水解唾液酸后，暴露出的次末端是半乳糖 残基，所以ASGPR特异性结合的糖为半乳糖基，故又称半乳糖特异性受体。半乳糖、半乳 糖胺、N
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乙酰半乳糖胺等单糖和多糖分子都对ASGPR有高亲和性。ASGPR主要生理功能是 介导血液中去唾液酸糖蛋白、脂蛋白等物质的清除，且与病毒性肝炎、肝硬化、肝癌等肝脏 疾病的发生发展有着密切联系。ASGPR这一特性的发现，对肝源性疾病的诊断及治疗起着重 要作用(Ashwell G、Harford J，Carbohydrate specific Receptors of the Liver，Ann Rev Biochem1982 51:531
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554)。结构中含有半乳糖或半乳糖胺及其衍生物的肝源性疾病治疗药物可以特异 性地与ASGPR亲和，从而具有主动肝靶向性，不需要其它的载体系统来输送。
[0009]血管紧张素原(AGT)与高血压
[0010]血压是指循环系统中血液对血管壁的压力。血压主要是由于动物心脏的跳动。在每次心 跳期间，血压在最大(收缩期)血压(SBP)和最小(舒张期)血压(DBP)之间变化。平均动脉压(MAP) 是心跳周期期间的平均动脉压。血压可以通过血压计(即血压测量计)测量。静息时的正常血 压在100
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140mmHg收缩期和60
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90mmHg舒张期的范围内，并且通常表示为收缩压(最高读数)/ 舒张压(最低读数)mmHg。
[0011]在未使用降压药物的情况下,收缩压(SBP)≥140mmHg和(或)舒张压(DBP)≥90mmHg，定 义为高血压。根据血压升高水平，将高血压分为1级、2级和3级。根据血压水平、心血管危险 因素、靶器官损害、临床并发症和糖尿病进行心血管风险分层,分为低危、中危、高危和很高 危4个层次。血压分类和定义如下：
[0012][0013]根据病症起因，高血压还可分为原发性高血压以及继发性高血压。原发性高血压是多种 因素导致的高血压，或者是由不明原因导致的高血压，有遗传、地域或者是钠水潴
留、交感 兴奋、RAS激活等各种各样的原因，所以原发性高血压只能够控制，不能够根治。继发性高 血压是指由某种疾病所导致血压增高，高血压是原发疾病的临床症状之一，占95％。一般继 发性高血压常见于肾性高血压、肾动脉狭窄，原发性醛固酮增多症、嗜铬细胞瘤、多发性大 动脉炎等等。
[0014]血压水平与心脑血管病发病和死亡风险之间存在密切的因果关系。有研究发现，基线血 压从115/75mmHg到185/115m本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种RNAi剂或其药学上可接受的盐，所述RNAi剂的结构中含有载体结构和干扰核酸，其结构如式IIIa、IIIb或IIIc所示：其中，所述干扰核酸靶向AGT基因，其包括反义链和正义链；所述载体结构包括5
’
MVIP(5
’
MultiValent Import Platform)和/或3
’
MVIP(3
’
MultiValent Import Platform)；所述5
’
MVIP由转接点R1、连接链D、接头B、支链L和肝靶向特异性配体X组成，所述3
’
MVIP由转接点R2、连接链D、接头B、支链L和肝靶向特异性配体X组成，所述5
’
MVIP通过转接点R1与正义链5
’
端或反义链5
’
端连接，所述3
’
MVIP通过转接点R2与正义链3
’
端或反义链3
’
端连接，n和m各自独立地为0
‑
4的任意整数。2.根据权利要求1所述的RNAi剂或其药学上可接受的盐，其中所述n+m＝2
‑
6的整数，优选n+m＝2、3或4，更优选为4。
3.根据权利要求1
‑
2中任一项所述的RNAi剂或其药学上可接受的盐，所述5
’
MVIP选自表10中5
’
MVIP01至5
’
MVIP22中的任一个，和/或所述3
’
MVIP选自表11中3
’
MVIP01至3
’
MVIP27的任一个。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的RNAi剂或其药学上可接受的盐，其中所述正义链与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18中任意一个或与其相差不超过3个核苷酸的序列具有基本上同源性。5.根据权利要求1
‑
4中任一项所述的RNAi剂或其药学上可接受的盐，所述反义链包含以下的核苷酸序列：SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36中任意一个或与其相差不超过...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔坤元，王圣军，陈清燕，
申请(专利权)人：厦门甘宝利生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：