一种耐盐节杆菌及其固氮应用制造技术

本发明专利技术涉及一种耐盐节杆菌及其应用，属于微生物学和环境保护技术领域，其分类命名为耐盐节杆菌株(Arthrobacter pascens)，保藏编号为CGMCC No.20974；保藏日为2020年10月29日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)。本发明专利技术的耐盐节杆菌的固氮能力强且持久，可使Ashby无氮培养基中凯氏氮含量上升，可使土壤速效氮含量上升15.6％；用于缺氮土壤中，将空气中游离的氮元素、土壤中其他形式的氮元素转化为速效氮，提高土壤肥力；可施用于过量施加化肥的土壤中，将其他形式的氮转化为易被利用的速效氮，对土壤进行生物修复，降低化肥施用量；可制备成生物菌肥，作为对提土壤肥力的深度强化处理手段，方法简单，运行及维护成本较低，在绿色农业的发展中具有良好的应用前景。的发展中具有良好的应用前景。的发展中具有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种耐盐节杆菌及其固氮应用


[0001]本专利技术涉及一种耐盐节杆菌及其固氮应用，属于微生物学和环境保护


技术介绍

[0002]氮元素是植物生长最重要的营养元素之一。目前，我国农业想要提高氮含量，主要通过施用化肥。但由于农业技术滞后，及不当的化肥施用方法，导致化肥利用率低，在多雨或灌溉较为频繁地区，速效氮会随雨水或灌溉用水流失。不仅流失率极高，含大量含氮污水流入水体也是富营养化的一大成因。
[0003]由于化肥的过度施用，会导致土壤污染、有毒物质积累，导致土壤生物群落改变，对土壤有益的动物种类、数量减少，致使土壤板结，团粒结构遭到破坏，营养物质分解不充分，破坏了土壤生态结构，致使微生物驱系恶化、酶活性下降、病原菌增多。导致土壤肥力下降，进而化肥使用量被迫增多，形成恶性循环。不仅加重了农业生产成本，也造成了资源的极大浪费，更加剧了一系列环境问题。
[0004]因此，从自然界中筛选出有较强固氮能力的菌株，从而将其制成生物菌制剂，应用于提高土壤氮含量，将有实际的应用价值，成为该
需要解决的技术难题。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种耐盐节杆菌，其分类命名为耐盐节杆菌株(Arthrobacter pascens)，保藏编号为CGMCC No.20974；保藏日为2020年10月29日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路，中国科学院微生物研究所。2.一种耐盐节杆菌的培养方法，其步骤如下：(1)、培养基的制备Ashby无氮培养基：甘露醇10g，KH2PO
4 0.2g，MgSO4·
7H2O 0.2g，NaCl 0.2g，CaSO4·
2H2O 0.1g，CaCO
3 5.0g，蒸馏水1.0L；Ashby无氮培养基，在121℃下，恒温灭菌20分钟；固体Ashby无氮培养基：甘露醇10g，KH2PO
4 0.2g，MgSO4·
7H2O 0.2g，NaCl 0.2g，CaSO4·
2H2O 0.1g，CaCO
3 5.0g，琼脂15g，蒸馏水1.0L；在121℃下，恒温灭菌20分钟；(2)、第一代培养称取土壤样品，放入装有适量玻璃珠和无菌水的锥形瓶中，静置，在振荡培养箱中振荡，制成菌悬液母液；(3)富集培养：取菌悬液母液，加入Ashby无氮培养基中，培养1
‑
2天，然后稀释104、105、106倍，得到10
‑4、10
‑5、10
‑6三个稀释浓度的样品溶液；(4)倒平板：将Ashby无氮培养基放置在立式压力蒸汽灭菌器中，经过121℃、20min灭菌后，冷却至60℃时，倒平板；(5)平板涂布：10
‑4、10
‑5、10
‑6三个稀释浓度的样品溶液，用灭菌后的三角玻璃棒分别均匀涂布到各个培养基表面；(6)培养：将涂有菌液的平板放在30℃恒温生化培养箱中，倒置培养3天；(7)初步筛选：从各个平板中挑取长势明显的大型菌落，在固体Ashby无氮培养基上进行平板划线，倒置放在30℃恒温培养箱中培养2天，然后，挑取长势明显的大型菌落，在耐盐固体Ashby无氮培养基上进行平板划线，倒置放在30℃恒温培养箱中培养2天，反复进行3次，同时用显微镜观察菌落纯度，直至获得纯培养的耐盐节杆菌菌株。3.根据权利要求2所述耐盐节杆菌的培养方法，其特征在于：步骤(2)中，土壤样品的采集如下：采用三点取样法，用小铁铲去除表层土，取地面以下15～20cm深处的小麦根际土壤，三点土样混合为一份，装入无菌袋中，放置于冰箱内4℃保存。4.根据权利要求2所述耐盐节杆菌的培养方法，其特征在于：步骤(3)中，富集培养的条件：160rpm、35℃的条件，培养2天。5.根据权利要求2所述耐盐节杆菌的培养方法，其特征在于：采样地位于北京市通州区潞城镇八各庄村，土壤类型主要为粘潮黄土，主栽作物为小麦；土样样品的釆集采用三点取样法；用小铁铲去除表层土，取地面以下15～20cm深处的小麦根际土壤，三点土样混合为一份，每份重量3kg，分别装入无菌袋中，放置于冰箱内4℃保存。6.权利要求1所述耐盐节杆菌在固氮方面的应用，将所述耐盐节杆菌接种于Ashby无氮培养基中，振荡培养，使耐盐节杆菌在培养基中固氮。7.根据权利要求6所述耐盐节杆菌在固氮方面的应用，其特征在于：所述Ashby无氮培养基制备如下：甘露醇10g，KH2PO
4 0.2g，MgSO4·
7H2O 0.2g，NaCl 0.2g，CaSO4·
2H2O 0.1g，CaCO
3 5.0g，蒸馏水1.0L，培养基在121℃下恒温灭菌20分钟；所述固体Ashby无氮培养基制备如下：甘露醇10g，KH2PO
4 0.2g，MgSO4·
7H2O 0.2g，NaCl 0.2g，CaSO4·
...

【专利技术属性】
技术研发人员：王永京，满涛，任连海，王攀，张明露，王松涛，闫新宇，
申请(专利权)人：北京工商大学，
类型：发明
国别省市：