本发明专利技术的粪肠球菌(Enterococcus faecalis)MG 2108，于2021年3月15号保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:M2021231MG 2108。此外本发明专利技术公开了粪肠球菌MG2108在制备抑菌和/或杀菌产品中的应用；本发明专利技术公开了一种饲料添加剂和一种微生态制剂，饲料添加剂和一种微生态制剂中含有粪肠球菌MG 2108；本发明专利技术的粪肠球菌MG 2108是通过调节肠道微生物菌群的结构，促进短链脂肪酸的释放，促进抑炎因子的表达，抑制促炎症因子的表达，可以作为替代抗生素的益生菌。可以作为替代抗生素的益生菌。
【技术实现步骤摘要】
2108。
[0011]优选地，所述饲料添加剂为益生菌畜禽用复合预混饲料添加剂。
[0012]一种微生态制剂，所述微生态制剂含有粪肠球菌(Enterococcus faecalis)MG 2108。
[0013]优选地，所述微生态制剂为单一菌种微生态制剂或者复合微生态制剂。
[0014]一种微生态制剂在饲料中应用。
[0015]有益效果：通过粪肠球菌MG 2108的干预后有助于缓解小鼠结肠组织炎症，可以明显提高肠道微生物菌群中Akkermansia的相对丰度，调节肠道微生物菌群的结构，促进短链脂肪酸的释放，促进抑炎因子的表达，抑制促炎症因子的表达，可以作为替代抗生素的益生菌。
附图说明
[0016]图1为粪肠球菌MG 2108的系统进化树分析。
[0017]图2抑菌实验技术路线。
[0018]图3主要研究内容及技术路线。
[0019]图4乳酸菌和抗生素对柠檬酸杆菌的抑菌实验。
[0020]图5本试验时间计划示意图。
[0021]图6小鼠体重、饮食量变化。
[0022]图7各组小鼠的结肠长度和HE染色切片结果。
[0023]图8各组小鼠血清中促炎症因子TNF
‑
α的含量变化。
[0024]图9各组小鼠的肝脏抗氧化指标。
[0025]图10各组小鼠结肠组织中相关促进炎症基因的表达。
[0026]图11各组小鼠结肠组织中连接蛋白和抑炎因子基因的mRNA的表达水平。
[0027]图12各组小鼠结肠组织中相关基因表达。
[0028]图13各组小鼠粪便中短链脂肪酸的含量及相关性。
[0029]图14小鼠肠道微生物的的β
‑
多样性分析结果图。
[0030]图15各组小鼠肠道微生物组成分析。
[0031]图16各组小鼠肠道微生物门水平上的菌群热图及相对丰度。
[0032]图17各组小鼠肠道微生物属水平上的菌群热图及相对丰度。
具体实施方式
[0033]为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0034]试验所用乳酸菌菌株由实验室前期分离鉴定所得(生工生物工程(上海)股份有限公司)，分别命名为粪肠球菌MG 2108(Enterococcus faecalis,X1)、发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentans,X2)、德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii,X3)、嗜酸小球菌(Pediococcus acidophilus,X4)；鼠类柠檬酸杆菌(Citrobacter rodentium,M1)。
[0035]其中粪肠球菌MG 2108保藏于中国典型培养物保藏中心，于2021年3月15号保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:M2021231MG2108；其16S rRNA核苷酸序列为SEQ ID NO:1所示；系统进化树如图1所示。
[0036]试验例1抑菌实验技术路线
[0037]图2本次试验的抑菌实验技术路线。将四株菌X1(Enterococcus faecalis)、X2(Lactobacillus fermentans)、X3(Lactobacillus delbrueckii)和X4(Pediococcus acidophilus)经过人工模拟胃液和人工模拟肠液后，记录四株菌的存活率。用X1、X2、X3和X4对鼠类柠檬酸杆菌(Citrobacter rodentium)进行抑菌实验；并且用相同剂量和不同剂量的土霉素(Oxytetracycline)、环丙沙星(Ciprofloxacin)、金霉素(Chlortetracycline)、四环素(Tetracycline)对鼠类柠檬酸杆菌的进行抑菌实验，通过测量抑菌圈大小来判断其敏感程度；最终通过抑菌实验来确定最后实验的用菌和抗生素；最后确定的实验用菌采用比克曼生物抗菌药物药敏纸片试剂盒做相应的敏感实验。图3所示为本次试验的主要研究内容及技术路线。鼠类柠檬酸杆菌灌胃小鼠建立结肠炎症模型，采用1
×
108CFU/mL剂量的X1和4mg/mL剂量的环丙沙星对炎症小鼠进行每日灌胃治疗，记录每笼小鼠每天的体重变化值；测定血清中肿瘤坏死因子
‑
α(TNF
‑
α)的含量变化；对结肠组织进行HE染色病理学分析；测定肝脏相关酶活指标的变化；测定结肠组织中的相关炎症因子的基因及蛋白的表达量；采用16S rRNA高通量测序技术对肠道菌群的结构及多样性进行分析，同时测定粪便中SCFAs的含量。
[0038]表1中英文缩写对照表
[0039][0040][0041][0042]试验例2实验材料与设备
[0043]培养基
[0044]1)乳酸菌培养基配方(MRS肉汤培养基)：葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母膏5g/L、吐温80mL/L、K2HPO
4 2g/L、无水乙酸钠5g/L、柠檬酸二铵2g/L、MgSO4·
7H2O 0.58g/L、MnSO4·
4H2O 0.25g/L、蒸馏水1000mL。固体培养基，需要添加20g/L琼脂。pH为6.2
‑
6.4，115℃灭菌30min。
[0045]2)细菌培养基配方(LB培养基)：胰蛋白胨10g/L、酵母提取粉5g/L、氯化钠10g/L、蒸馏水1000mL。固体培养基，需要添加20g/L琼脂。pH为6.8
‑
7.2，115℃灭菌30min。
[0046]上述培养基按照正常配置方法得到。
[0047]主要实验试剂
[0048]实验所用试剂如表2所示。
[0049]表2实验试剂与药品
[0050]Table 2 Experimental reagents and pharmaceuticals
[0051][0052][0053]主要仪器设备
[0054]实验中所用的主要仪器如表3所示。
[0055]表3主要仪器设备
[0056]Table 3 The major equipments
[0057][0058]试验例3实验方法
[0059](1)受试菌在胃肠液的体外中的耐受性试验(体外)
[0060]胃液的配制：事先配制好pH值为7.4的生理盐水，加入适量稀盐酸，调pH值到3.0，
定容至100mL，再称取1.0g胃蛋白酶加入其中，超声3小时，0.22μm滤膜抽滤，备用。
[0061]肠液的配制：调节生理盐水的pH值到8.0，定容至100mL，称取0.3g猪胆盐，1.0g胰本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一株粪肠球菌MG 2108，其特征在于，所述粪肠球菌MG 2108的保藏号为CCTCC NO:M2021231 MG2108。2.一种培养如权利要求1所述粪肠球菌MG 2108的液体培养基，其特征在于，所述液体培养基为：葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母膏5g/L、吐温80mL/L、K2HPO42g/L、无水乙酸钠5g/L、柠檬酸二铵2g/L、MgSO4·
7H2O 0.58g/L、MnSO4·
4H2O 0.25g/L、蒸馏水1000mL，pH为6.2
‑
6.4。3.如权...
【专利技术属性】
技术研发人员：王征，谢玫瑰，兰时乐，张旭，
申请(专利权)人：湖南农业大学，
类型：发明
国别省市：
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