大豆PCL同源基因编辑位点及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，发明专利技术公开了一种大豆PCL同源基因编辑位点及其应用。本发明专利技术的大豆PCL同源基因编辑位点为两段各23个脱氧核糖核苷酸序列：5

【技术实现步骤摘要】
大豆PCL同源基因编辑位点及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种大豆PCL同源基因编辑位点及其应用。

技术介绍

[0002]为了保护自身免受外源遗传物质(如噬菌体、质粒)的侵袭，细菌和古细菌进化出了一种RNA分子介导的获得性免疫系统，称为CRISPR(Mojica,et al.)。2013年，研究者利用化脓性链球菌的Cas9蛋白首次在哺乳动物细胞中实现了RNA引导下的精确靶向和基因组序列修饰，为CRISPR/Cas9作为一种广泛应用的基因组编辑工具奠定了基础。CRISPR/Cas9基因编辑技术已被大范围应用于植物基因功能研究和农作物性状改良等领域。刘耀光教授及其团队研发了高效简便的CRISPR/Cas9植物多基因编辑载体系统(Ma et al.,2016)，在该系统中，可以通过设计不同目标序列的多个导向RNA(sgRNA)，将Cas9蛋白靶向到多个基因组位点上，同时进行多基因编辑，也可以在目的基因的启动子或UTR区域设计靶点，对目的基因的启动子或UTR进行编辑，调节目的基因的表达量。CRISPR/Cas9基因编辑技术已被本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种大豆PCL同源基因编辑位点，其特征在于，所述编辑位点为两段23个脱氧核糖核苷酸序列：5
’‑
AGGTGCGTAAGAAGGGCCAAGGG
‑3’
和5
’‑
GGGGAATGATGTTGATGGGGAGG
‑3’
。2.含有权利要求1所述大豆PCL同源基因编辑位点的重组表达载体、重组基因细胞系或重组菌。3.根据权利要求2所述重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体采用的表达载体为pYLCRISPR/Cas9；所述重组菌采用的菌为发根农杆菌。4.根据权利要求3所述重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体是sgRNA载体与权利要求1所述大豆PCL同源基因编辑位点采用BsaⅠ酶切后连接，所得sgRNA表达盒与pYLCRISPR/Cas9载体经过BsaI酶切后连接得到；所述sgRNA载体为pYLgRNA
‑
AtU3d、pYLgRNA
‑
AtU3b、pYLgRNA
‑
AtU6
‑
1、pYLgRNA
‑
AtU6
‑
29中的两种。5.权利要求1所述大豆PCL同源基因编辑位点、权利要求2
‑
4任一项所述重组表达载体、重组基因细胞系或重组菌在调节大豆生长发育状态和产量中的应用。6.一种构建PCL同源基因突变体遗传材料的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：(1)按照如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示大豆PCL同源基因编辑位点的序列合成sgRNA；(2)在sgRNA的5
’
端添加碱基GTCA，获得如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.5所示核苷酸序列，将其反向互补得...

【专利技术属性】
技术研发人员：孔令平，孔凡江，苏彤，张婷，方然，
申请(专利权)人：广州大学，
类型：发明
国别省市：