一种银纳米簇及其用于巯基药物检测的方法技术

本发明专利技术涉及一种银纳米簇及其用于巯基药物检测的方法，其以单链DNA为模板制备银纳米簇，具体方法如下：将单链DNA放入离心机中以4000rpm的速度离心30秒，加入59μLpH为7.4的PBS缓冲溶液，震荡混匀，得到100mM浓度的单链DNA；取配备完成的单链DNA溶液6μL于干净的离心管中，加入294μL的PBS溶液稀释，混合均匀；再取75μL的稀释液于另一干净离心管中，同时加入Ag

【技术实现步骤摘要】
一种银纳米簇及其用于巯基药物检测的方法


[0001]本专利技术涉及荧光检测
，特别指一种银纳米簇及其用于巯基药物检测的方法。

技术介绍

[0002]常用的巯基药物包括谷胱甘肽、D
‑
青霉胺，其中：
[0003]谷胱甘肽(GSH)是一种较为重要的化合物，其主要的生理作用是清除人体内的自由基，是一种不可缺少的抗氧化剂，可以保护身体内许多不同种类的蛋白质和酶分子中的巯基，保障了人体的基础生化功能。人体红细胞上的GSH主要用于保护其膜上蛋白质的巯基，从而防止人体出现溶血现象。同时，GSH在人体肝脏部位发挥着抑制乙醇侵害的作用，有效防止脂肪肝的出现。GSH还能促进进入人体内不慎进入的有毒化合物、重金属离子或致癌物质等排出体外，起到中和解毒的作用。尽管已经有大量的分析方法用于GSH的检测，也有了较为常用且标准的检测方法，但是基于检测控制人体内GSH含量的重要程度，亟需开发出更为简便、快速的GSH检测分析方法，以确保满足谷胱甘肽的检测效果。
[0004]D
‑
青霉胺是一种螯合铜的药物，具有免疫调节性质，常用于治疗类风湿性关节炎、威尔逊氏病和肾结石(胱尿症)，但D
‑
青霉胺治疗的相关不良事件频繁且往往严重。因此，迫切需要开发出更为简便、快速的D
‑
青霉胺检测分析方法，对D
‑
青霉胺的安全性剖面进行全面的评估。
[0005]目前已知的检测巯基药物的方法有比色法、高效毛细管电泳法以及高效液相色谱法等。这些方法虽然都有着各自的优势，但都需要相对复杂的操作和过高的成本，并且达不到较为明显的专一性。
[0006]比色法是以生成有色化合物的显色反应为基础的，一般包括两个步骤：首先是选择适当的显色试剂与待测组分反应，形成有色化合物，然后再比较或测量有色化合物的颜色深度，在此过程中，溶液的酸度、显色剂的用量、温度、溶剂等对显色反应都有影响，测量的灵敏度和准确度较差。
[0007]高效毛细管电泳法是以高压电场为驱动力,毛细管为分离通道,根据样品组分淌度和分配的差异来实现分离的一种方法。该方法操作简便,可靠性高,但灵敏度不高,要求巯基药物的含量最小为50μmol
·
L
‑1,并且处理样品比较繁琐,不适于大样品的测定。
[0008]高效液相色谱法是用高压泵将不同极性的溶剂泵入色谱柱中，注入待测样品，通过样品各组分不同的溶解度，在溶剂以及色谱柱固定相之间发生吸附和解吸过程而分离，然后进入检测器检测。高效液相色谱法线性范围宽，但该法步骤复杂、耗时、灵敏度不高,且样品巯基药物的含量要高于50μmol
·
L
‑1。

技术实现思路

[0009]本专利技术的目的是针对
技术介绍
中存在的缺点和问题加以改进和创新，提供一种银纳米簇，可高效、高灵敏、高选择性检测巯基药物。
[0010]本专利技术的另一目的是提供一种利用上述银纳米簇对巯基药物检测的方法，可快速检测出巯基药物浓度。
[0011]本专利技术银纳米簇以单链DNA为模板制备而成，具体方法如下：
[0012]将单链DNA放入离心机中以4000rpm的速度离心30秒，加入59μL pH为7.4的PBS缓冲溶液，震荡混匀，得到100mM浓度的单链DNA；取配备完成的单链DNA溶液6μL于干净的离心管中，加入294μL的PBS溶液稀释，混合均匀；再取75μL的稀释液于另一干净离心管中，同时加入Ag
+
溶液9μL，暗反应15min后加入4.5μL的7.6*10
‑6g/mL的NaBH4溶液；最后加入1.5μL PBS缓冲液反应60min得银纳米簇DNA
‑
Ag，用酶标仪检测其荧光强度。
[0013]优选的，所述的单链DNA碱基序列为AATTCC CCC CCC CCC CAATT。
[0014]优选的，酶标仪的具体工作条件是关闭育温器，激发波长480nm，发射光谱波长扫描范围520～680nm，增益为140，步幅为1，进行荧光检测；在pH为7.4的条件下，制备时间为1.5h时，DNA
‑
Ag纳米簇荧光值达到最大。
[0015]本专利技术用银纳米簇进行巯基药物检测的方法，其巯基药物为谷胱甘肽与D
‑
青霉胺，具体方法如下：
[0016]1、谷胱甘肽溶液的制备：称取0.0307g的谷胱甘肽粉末溶于100mL的超纯水中，得到1mM的谷胱甘肽溶液。
[0017]2、谷胱甘肽的检测：取1.5mL配得的谷胱甘肽溶液至离心管中，以1μM为梯度分别稀释11管谷胱甘肽溶液，浓度从小到大为0，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10μM的谷胱甘肽溶液，各取10μL加入到银纳米簇体系中，确保体系量一定，反应10分钟后用酶标仪检测，观察其曲线峰值并记录数据。
[0018]3、D
‑
青霉胺溶液的制备：称取0.0149g的D
‑
青霉胺粉末溶于100mL的超纯水中，得到1mM的D
‑
青霉胺溶液。
[0019]4、D
‑
青霉胺的检测：取1mL配得的D
‑
青霉胺溶液至离心管中，以10μM为梯度分别稀释6管D
‑
青霉胺溶液，浓度从小到大为0，10，20，30，40，50μM的D
‑
青霉胺溶液，各取10μL加入到银纳米簇体系中，确保体系量一定，反应10分钟后用酶标仪检测，观察其曲线峰值并记录数据。
[0020]5、选择性测试：为了检测其他氨基酸对谷胱甘肽与D
‑
青霉胺的检测是否有干扰，使用丝氨酸、脯氨酸、缬氨酸和丙氨酸做检测，它们的溶液浓度均为50μM。
[0021]优选的，所述方法在银纳米簇制备1小时20分钟时加入谷胱甘肽或D
‑
青霉胺，固定10分钟后检测；酶标仪的具体工作条件是关闭育温器，激发波长480nm，发射光谱波长扫描范围520～680nm，增益为140，步幅为1，进行荧光检测，可得荧光在560nm处有最高峰。
[0022]本专利技术的优点及有益效果：
[0023]本专利技术以探索一种高效、专一性强的荧光检测巯基药物的方法为目标，用DNA作为模板合成能特异性识别并结合巯基的银纳米簇，由于巯基药物可以与DNA
‑
Ag纳米簇形成S
‑
Ag配位键，使得原本有荧光现象的纳米簇荧光淬灭。在无巯基药物的条件下，可以检测出荧光，在巯基药物存在的条件下荧光淬灭，且不同浓度下的谷胱甘肽和D
‑
青霉胺淬灭效果不同，以此进行巯基药物浓度的检测，为巯基类药物检测提供新的思路与手段。
附图说明
[0024]图1为本专利技术银纳米簇合成原理图。
[0025]图2为单链DNA荧光强度随时间的变化趋势图。
[0026]图3为本专利技术银纳米簇在固定时间下与不同浓度的谷胱甘肽反应后的荧光光谱的变化结果。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种银纳米簇，其特征在于它以单链DNA为模板制备而成，具体制备方法如下：将单链DNA放入离心机中以4000rpm的速度离心30秒，加入59μLpH为7.4的PBS缓冲溶液，震荡混匀，得到100mM浓度的单链DNA；取配备完成的单链DNA溶液6μL于干净的离心管中，加入294μL的PBS溶液稀释，混合均匀；再取75μL的稀释液于另一干净离心管中，同时加入Ag
+
溶液9μL，暗反应15min后加入4.5μL的7.6*10
‑6g/mL的NaBH4溶液；最后加入1.5μLPBS缓冲液反应60min得银纳米簇DNA
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Ag，用酶标仪检测其荧光强度。2.根据权利要求1所述的银纳米簇，其特征在于所述的单链DNA碱基序列为AAT TCC CCC CCC CCC CAATT。3.根据权利要求1所述的银纳米簇，其特征在于酶标仪的具体工作条件是关闭育温器，激发波长480nm，发射光谱波长扫描范围520～680nm，增益为140，步幅为1，进行荧光检测；在pH为7.4的条件下，制备时间为1.5h时，DNA
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Ag纳米簇荧光值达到最大。4.一种用权利要求1
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3任一所述银纳米簇进行巯基药物检测的方法，其特征在于巯基药物为谷胱甘肽与D
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青霉胺，具体方法如下：1)谷胱甘肽溶液的制备：称取0.0307g的谷胱甘肽粉末溶于100mL的超纯水中，得到1mM的谷胱甘肽溶液；2)谷胱甘肽的检测：取1.5mL配得的...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘燕，谢楚楚，王永红，
申请(专利权)人：中南林业科技大学，
类型：发明
国别省市：