一种马尾松愈伤组织染色体制片方法技术

本发明专利技术公开了一种马尾松愈伤组织染色体制片方法，包括以下步骤：S1、培育马尾松愈伤组织，转接后3天在早上8：00~9：00取生长旺盛部分，作为愈伤组织样本。S2、将取好得愈伤组织样本置于0.15%的秋水仙素中进行6~8h预处理，置于25℃避光条件下；S3、经过预处理的愈伤组织，用蒸馏水冲洗5~6次后，投入到固定液中固定20h，其中固定时温度为4℃，固定液有比例3：1的乙醇与冰醋酸组成；S4、取出愈伤组织，分别在95%与85%的酒精中各30min，最后将材料存放于70%的酒精中；S5、取出愈伤组织，用蒸馏水冲洗30min，在预热60℃的1mol/L的盐酸中恒温解离8~10min，去除盐酸并水洗30min备用。通过核型分析确定染色体倍性，可对倍性育种等提供关键技术，本方法简便易行，成本低。成本低。成本低。

【技术实现步骤摘要】
一种马尾松愈伤组织染色体制片方法


[0001]本专利技术涉及马尾松制片
，特别涉及一种马尾松愈伤组织染色体制片方法。

技术介绍

[0002]马尾松是松科松属的常绿高大乔木，俗名青松、山松，是我国东部地区分布最广泛的针叶树种。分布于江苏、浙江、福建、广东、台湾等地区。马尾松的经济价值极高，浑身是宝。木材可供一般建筑和家具及火柴等用材；木质耐腐，造船、枕木、矿柱等用；木材纤维长，是比较好的新闻纸与水泥袋等包装纸原料；松树采割的松脂可提取松香和松节油，是工业部门不可缺少的原料。
[0003]马尾松的胚乳愈伤组织是由单倍体的胚乳细胞中发育形成而来，理论上是单倍性的，这可为马尾松的倍性育种提供技术支持。但目前尚无适宜的制片方式，对马尾松愈伤组织进行核型分析及染色体倍性鉴定， 本专利技术通过试验，在特定的采集时间，预处理时间与药物浓度以及解离时间等条件下，可以获得最佳的染色体制片。
[0004]为此，我们提出一种马尾松愈伤组织染色体制片方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术的主要目的在于提供一种马尾松愈伤组织染色体制片方法，可以有效解决
技术介绍
中的问题。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：一种马尾松愈伤组织染色体制片方法，包括以下步骤：S1、培育马尾松愈伤组织，转接后3天在早上8：00~9：00取生长旺盛部分，作为愈伤组织样本；S2、将取好得愈伤组织样本置于0.15%的秋水仙素中进行6~8h预处理，置于25℃避光条件下；S3、经过预处理的愈伤组织，用蒸馏水冲洗5~6次后，投入到固定液中固定20h，其中固定时温度为4℃，固定液有比例3：1的乙醇与冰醋酸组成；S4、取出愈伤组织，分别在95%与85%的酒精中各30min，最后将材料存放于70%的酒精中；S5、取出愈伤组织，用蒸馏水冲洗30min，在预热60℃的1mol/L的盐酸中恒温解离8~10min，去除盐酸并水洗30min备用；S6、取直径1mm材料置于载玻片，用镊子夹碎，使用改良石炭酸复红染液滴染，再压片观察。
[0007]进一步地，S1中，材料的采集时间为早上8：00。
[0008]进一步地，S2中，预处理时间为7h。
[0009]进一步地，S3中，蒸馏水冲洗次数为5次。
[0010]进一步地，S5中，解离时间为10min。
[0011]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：选取转接后3天生长旺盛的愈伤组织，在上午8：00~9：00时间段采集，在结合具体的预处理液进行预处理，以及采用酸解法进行解离，可以批量制得形态较清晰的染色体制片，染色体的离散程度较大，能更清晰观测细胞内染色体的长度、着丝粒位置、臂比、随体大小等特征，通过核型分析确定染色体倍性，可对倍性育种等提供关键技术。本方法简便易行，成本低，且本方法的效果好，易于操作和掌握，能够提高工作效率，省时省力。
附图说明
[0012]图1为本专利技术一种马尾松愈伤组织染色体制片方法的预处理4小时对染色体形态影响的示意图。
[0013]图2为本专利技术一种马尾松愈伤组织染色体制片方法的预处理5小时对染色体形态影响的示意图。
[0014]图3为本专利技术一种马尾松愈伤组织染色体制片方法的预处理6小时对染色体形态影响的示意图。
[0015]图4为本专利技术一种马尾松愈伤组织染色体制片方法的预处理7小时对染色体形态影响的示意图。
[0016]图5为本专利技术一种马尾松愈伤组织染色体制片方法的预处理8小时皱缩过度的染色体示意图。
[0017]图6为本专利技术一种马尾松愈伤组织染色体制片方法的解离5min对细胞离散程度影响的示意图。
[0018]图7为本专利技术一种马尾松愈伤组织染色体制片方法的解离8min对细胞离散程度影响的示意图。
[0019]图8为本专利技术一种马尾松愈伤组织染色体制片方法的解离10min对细胞离散程度影响的示意图。
[0020]图9为本专利技术一种马尾松愈伤组织染色体制片方法的解离12min对细胞离散程度影响的示意图。
[0021]图10为本专利技术一种马尾松愈伤组织染色体制片方法的解离15min对细胞离散程度影响的示意图。
[0022]图11为本专利技术一种马尾松愈伤组织染色体制片方法的解离20min对细胞离散程度影响的示意图。
[0023]图12为本专利技术一种马尾松愈伤组织染色体制片方法的染色体示意图。
具体实施方式
[0024]为使本专利技术实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本专利技术。
[0025]如图1
‑
12所示；实施例一一种马尾松愈伤组织染色体制片方法，包括以下步骤：
S1、培育马尾松愈伤组织，转接后3天在早上8：00~9：00取生长旺盛部分，作为愈伤组织样本；S2、将取好得愈伤组织样本置于0.15%的秋水仙素中进行6~8h预处理，置于25℃避光条件下；S3、经过预处理的愈伤组织，用蒸馏水冲洗5~6次后，投入到固定液中固定20h，其中固定时温度为4℃，固定液有比例3：1的乙醇与冰醋酸组成；S4、取出愈伤组织，分别在95%与85%的酒精中各30min，最后将材料存放于70%的酒精中；S5、取出愈伤组织，用蒸馏水冲洗30min，在预热60℃的1mol/L的盐酸中恒温解离8~10min，去除盐酸并水洗30min备用；S6、取直径1mm材料置于载玻片，用镊子夹碎，使用改良石炭酸复红染液滴染，再压片观察。
[0026]其中，S1中，材料的采集时间为早上8：00。
[0027]其中，S2中，预处理时间为7h。
[0028]其中，S3中，蒸馏水冲洗次数为5次。
[0029]其中，S5中，解离时间为10min。
[0030]实施例二一种马尾松愈伤组织染色体制片方法，包括以下步骤：S1、培育马尾松愈伤组织，转接后3天在早上8：00~9：00取生长旺盛部分，作为愈伤组织样本；S2、将取好得愈伤组织样本置于0.15%的秋水仙素中进行6~8h预处理，置于25℃避光条件下；S3、经过预处理的愈伤组织，用蒸馏水冲洗5~6次后，投入到固定液中固定20h，其中固定时温度为4℃，固定液有比例3：1的乙醇与冰醋酸组成；S4、取出愈伤组织，分别在95%与85%的酒精中各30min，最后将材料存放于70%的酒精中；S5、取出愈伤组织，用蒸馏水冲洗30min，在预热60℃的1mol/L的盐酸中恒温解离8~10min，去除盐酸并水洗30min备用；S6、取直径1mm材料置于载玻片，用镊子夹碎，使用改良石炭酸复红染液滴染，再压片观察。
[0031]其中，S1中，材料的采集时间为早上8：00。
[0032]其中，S2中，预处理时间为7h。
[0033]其中，S3中，蒸馏水冲洗次数为6次。
[0034]其中，S5中，解离时间为10min。
[0035]实施例三一种马尾松愈伤组织染色体制片方法，包括以下步骤：S1、培育马尾松愈伤组织，转接后3天在早上8：00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种马尾松愈伤组织染色体制片方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、培育马尾松愈伤组织，转接后3天在早上8：00~9：00取生长旺盛部分，作为愈伤组织样本；S2、将取好得愈伤组织样本置于0.15%的秋水仙素中进行6~8h预处理，置于25℃避光条件下；S3、经过预处理的愈伤组织，用蒸馏水冲洗5~6次后，投入到固定液中固定20h，其中固定时温度为4℃，固定液有比例3：1的乙醇与冰醋酸组成；S4、取出愈伤组织，分别在95%与85%的酒精中各30min，最后将材料存放于70%的酒精中；S5、取出愈伤组织，用蒸馏水冲洗30min，在预热60℃的1mol/L的盐酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：田雨风，徐刚，丁贵杰，
申请(专利权)人：贵州大学，
类型：发明
国别省市：