一种多肽在制备抗肿瘤药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种多肽在制备抗肿瘤药物中的应用。所述的多肽是应用机器学习从抗菌肽数据库中筛选出的抗菌肽，包括32个氨基酸残基，氨基酸序列为：Gly Ile Leu Ser Ser Ile Lys Gly Val Ala Lys Gly Val Ala Lys Asn Val Ala Ala Gln Leu Leu Asp Thr Leu Lys Cys Lys Ile Thr Gly Cys。该多肽对A549、MCF7、ＨｅＬａ肿瘤细胞均有明显有抑制作用，易选择性杀伤A549，具有良好的安全性，可作为肺癌候选药物。癌候选药物。癌候选药物。

【技术实现步骤摘要】
一种多肽在制备抗肿瘤药物中的应用
[0001]

[0002]本专利技术属于生物化学中的多肽药物
，具体涉及一种多肽在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0003]
技术介绍

[0004]根据 2021 年发布的最新全球癌症统计数据显示，癌症发病率和死亡率正逐年上升。传统的癌症治疗方法主要有手术、放射疗法、化学药物和大分子靶向药物。然而，当前癌症治疗仍面临着化学药物和受体靶向抗癌药物耐药性增加的挑战。
[0005]研究人员发现了一类广泛存在于哺乳动物、两栖动物、昆虫、植物和微生物中具有抗肿瘤活性的生物活性肽，命名为多肽。多肽一般带有从+2 至+9不等的净电荷且同时具有亲水性和疏水性，属于一种阳离子两亲性多肽，并具有结构简单、易合成、易化学修饰和低免疫原性等特点。大量研究表明，多肽可能发展成为一类具有潜力的新型癌症治疗药物。
[0006]机器学习在药物活性预测方面具有出色的表现，尤其针对化合物小分子的研究已非常深入，逐渐发展成为化学药物发现必备的实用技术。近些年，利用机器学习对多肽和蛋白质的相关特性预测正迅速发展，与其他相关计算生物技术组合应用可发挥很好的预测效果。
[0007]
技术实现思路

[0008]本专利技术旨在提供一种多肽RANATUERIN
‑
2Lb在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0009]上述专利技术目的是通过以下技术方案实现的：利用机器学习筛选出来的高效低毒的多肽通过化学合成用于抗肿瘤的应用。
[0010]通过机器学习构建预测高效低毒多肽的混合模型，利用模型从抗菌肽数据库中筛选出有抗癌活性且低毒的多肽RANATUERIN
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2Lb该多肽RANATUERIN
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2Lb的氨基酸序列为：Gly Ile Leu Ser Ser Ile Lys Gly Val Ala Lys Gly Val Ala Lys Asn Val Ala Ala Gln Leu Leu Asp Thr Leu Lys Cys Lys Ile Thr Gly Cys（GILSSIKGVAKGVAKNVAAQLLDTLKCKITGC）通过本专利技术的抗癌细胞实验充分表明，本专利技术的多肽RANATUERIN
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2Lb具有良好的抗癌活性，而且具有较好的安全性，可开发为潜在的抗癌候选药物。而且本多肽易选择性杀伤非小细胞肺癌A549，可作为肺癌候选药物。
[0011]多肽RANATUERIN
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2Lb的抗癌活性和溶血性的测定方法（1）多肽RANATUERIN
‑
2Lb的抗癌活性测定方法培养 MCF7、A549、HeLa、LoVo 和 293T 至对数生长期，用胰蛋白酶消化细胞，制备
培养基倍比稀释多肽浓度（128 μM、64 μM、32 μM、16 μM、8 μM、4 μM、2 μM、1 μM、0.5 μM）。取出 96 孔板，吸出培养液，每孔加入 100 μL 上述不同浓度的多肽溶液，阴性对照组和空白组加入含 2%血清的 DMEM 培养基，培养 24h，每组设置 3 个复孔。在 96 孔板中每孔加入 10 μL，5 mg/mL 的 MTT 溶液，37℃静置孵育 4h 后，弃掉培养基，加入 150 μL/每孔 DMSO 溶液振荡 10 min 溶解甲瓒结晶。使用多功能酶标仪在 570 nm 和 630 nm 处测定吸光度差值，细胞增殖抑制率（%）=（OD 对照
ꢀ‑ꢀ
OD 测试）/（ OD 对照
ꢀ‑ꢀ
OD 空白）
×
100%，抑制率以三次重复数据的平均标准偏差表示。
[0017]图1结果显示RANATUERIN
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2Lb 对A549、MCF7 和 HeLa 细胞抑制作用较强，其中对A549杀伤作用最强，而对结肠癌LoVo 细胞的杀伤作用较弱，对 293T 细胞的毒性较低。
[0018]2.2 多肽RANATUERIN
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2Lb的溶血性取 2%绵羊红细胞 4 mL，用 4 mL PBS 冲洗 2 次，3000 rpm 离心 5 min，弃上清，4 mL PBS 重悬绵羊红细胞。称取 2 mg 多肽溶于 2 mLPBS 缓冲液，制备浓度为 1000 μg/mL 的多肽母液。之后，将多肽母液稀释成 256 μM 的工作浓度，用 PBS 缓冲液继续倍比稀释为以下浓度 128 μM、64 μM、32 μM、16 μM、8 μM、4 μM 和 2 μM。 在 96 孔板中每孔加入 100 μL2% 绵羊红细胞，然后加入 100 μL 不同浓度（2 μM、4 μM、8 μM、16 μM、32 μM、64 μM、128 μM 和 256 μM）的多肽溶液；阴性对照和阳性对照分别加入 100 uLPBS 缓冲液和 100μL 0.1%（w/v）的 Triton X
‑
100；每组设置 3 个复孔，37℃孵育 1h。将 96 孔板取出，使用平板离心机 3000 rpm 离心 5 min，小心吸取 100μL 上清液转移到一块新的 96 孔板中（每孔对应位置与之前相同），在酶标仪 540 nm 处测定吸光度。溶血率（%）=(absorbancesample
‑
absorbancenegative)/(absorbancepositive
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absorbancenegtive)
×
100%图2 结果显示，RANATUERIN
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2Lb完全没有溶血性。
[0019]上述实验结果表明RANATUERIN
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2Lb具有良好的抗癌活性，更易选择性杀伤非小细胞肺癌A549，具有良好的安全性，无溶血性。因此RANATUERIN
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2Lb可作为开发新型抗肿瘤的候选药物。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多肽在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于：所述的多肽序列为 SEQ ID NO...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴旻，赵玉红，冯宇琪，沈乐，杨欣宇，夏喆，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：