抗-EGFRVIII抗体及其抗原结合片段制造技术

本发明专利技术提供了特异性结合表皮生长因子受体变体III(EGFRvIII)的抗原结合剂，诸如抗体或其抗原结合片段、嵌合抗原受体(CAR)、双特异性T

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗
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EGFRVIII抗体及其抗原结合片段


[0001]本公开内容提供了特异性结合表皮生长因子受体变体III(EGFRvIII)的抗原结合剂，诸如抗体或其抗原结合片段、嵌合抗原受体(CAR)、双特异性T
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细胞衔接物(BiTE)等。本公开内容的EGFRvIII
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特异性抗体或其抗原结合片段、CAR或BiTE可以用于例如治疗癌症。本公开内容特别涵盖靶向表达EGFRvIII的细胞的抗体药物缀合物。

技术介绍

[0002]表皮生长因子受体变体III(EGFRvIII)在25
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64％的多形性成胶质细胞瘤(glioblastoma multiforme，GBM)中扩增、高度表达和存在。应当指出，不同的检测方法会产生不一致的结果，但是已经使用多种互补技术在乳腺癌以及头和颈鳞状细胞癌(HNSCC)的子集中检测到了EGFRvIII mRNA和蛋白表达(综述见Gan等人2013)。与在上皮、间质和神经元起源的组织中表达并在正常细胞过程(诸如增殖、分化和发育)中起主要作用的野生型(wt)表皮生长因子受体(EGFR)不同，EGFRvIII不在正常组织上表达。
[0003]EGFRvIII变体源自EGFR基因的外显子2
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7的框架内缺失，所述缺失导致编码细胞外结构域的267个氨基酸残基的序列的除去。新形成的剪接连接点编码甘氨酸残基，其在野生型人EGFR中没有对应物，且因此形成新表位。此外，众多研究表明，正常组织缺乏EGFRvIII。因此，EGFRvIII含有可用于抗体靶向疗法的新的肿瘤特异性细胞表面表位。但是，与人类序列的其余部分相比，EGFRvIII新表位的免疫原性不是很强，并且迄今为止产生的许多抗体尚未证实特异性地识别EGFRvIII(综述见Gan等人2013)。
[0004]在极少数情况下，已经描述了针对EGFRvIII新表位的单克隆抗体(mAb)，包括抗体13.1.2(美国专利号7,736,644)，该抗体也由Amgen开发为抗体药物缀合物(ADC)(AMG 595:Hamblett K.J,等人,Molecular Cancer Therapeutics,第14(7)卷,第1614
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24页,2015)。美国专利号9,562,102也描述了由Abbvie开发的806抗体(ABT
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806、ABT
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414)，其结合EGFRvIII以及在过表达EGFR的肿瘤细胞上的扩增的EGFR的子集(Cleary,JM等人,Invest New Drugs,33(3),第671
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8页,2015；Reilly,EB.,Molecular Cancer Therapeutics,第14(5)卷,第1141
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51页,2015)。尽管在临床前模型中该抗体已被证实优先结合肿瘤EGFR，但该抗体与在人类皮肤中存在的野生型EGFR的结合已被证明是ABT
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806在某些患者中表现出的皮肤毒性的原因(Cleary等人2015)。
[0005]特异性地靶向在表达EGFR的细胞中不存在或不可接近的EGFRvIII的表位的抗体或其抗原结合片段将有益于癌症患者的治疗。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供了特异性结合表皮生长因子受体变体III(EGFRvIII)的抗原结合剂，诸如抗体或其抗原结合片段、嵌合抗原受体(CAR)、双特异性T
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细胞衔接物(bispecific T
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cell engagers，BiTE)等。
[0007]如下文更详细地描述的，一些抗
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EGFRvIII抗体或其抗原结合片段可以结合在癌
细胞(例如，成胶质细胞瘤细胞)的表面处的EGFRvIII。在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段不会显著结合在癌细胞(例如，U87MG
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EGFR WT)上表达的EGFR。
[0008]本公开内容的抗体或其抗原结合片段可以被癌细胞内化，且因此可以在其一个方面用于递送货物分子。本公开内容特别涵盖缀合至治疗部分的抗
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EGFRvIII抗体或其抗原结合片段。本文描述的抗
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EGFRvIII抗体可以用于抑制表达EGFRvIII的肿瘤细胞的生长。
[0009]在本公开内容的某些实施方案中，所述抗
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EGFRvIII抗体或其抗原结合片段可以能够结合在天然的EGFRvIII(例如，天然的重组EGFRvIII)和变性的EGFRvIII(例如，变性的重组EGFRvIII)中存在的表位。
[0010]通常，本公开内容的抗体或其抗原结合片段可以能够结合肽，所述肽包含由EGFRvIII的氨基酸残基1
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76(SEQ ID NO:119)组成的EGFRvIII片段。所述抗体或其抗原结合片段的子集能够结合EGFRvIII的氨基酸残基1
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18(SEQ ID NO:125)，且抗体的另一个子集能够结合EGFRvIII的氨基酸残基15
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37(SEQ ID NO:6)。
[0011]更具体地，本公开内容提供了可以能够结合在图4a和/或4b中说明的EGFRvIII片段中的一种或多种的抗
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EGFRvIII抗体或其抗原结合片段。
[0012]本公开内容涵盖的抗
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EGFRvIII抗体或其抗原结合片段的实施方案包括，例如：
[0013]‑
能够结合肽的抗体，所述肽包含由EGFRvIII的氨基酸残基1
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18(SEQ ID NO:125)组成的EGFRvIII片段；
[0014]‑
能够结合肽的抗体，所述肽包含由EGFRvIII的氨基酸残基3
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18(SEQ ID NO:129)组成的EGFRvIII片段；
[0015]‑
能够结合肽的抗体，所述肽包含由EGFRvIII的氨基酸残基15
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37(SEQ ID NO:6)组成的EGFRvIII片段；或
[0016]‑
能够结合肽的抗体，所述肽包含由EGFRvIII的氨基酸残基19
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37(SEQ ID NO:142)组成的EGFRvIII片段。
[0017]本公开内容涵盖的一些特定抗
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EFGRvIII抗体或其抗原结合片段包括不需要EGFRvIII的氨基酸残基1
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2的存在即可结合的那些。特别涵盖能够结合以下中的一种或多种EGFRvIII片段的抗
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EFGRvIII抗体或其抗原结合片段：片段19
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76(SEQ ID NO:138)、片段19
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62(SEQ ID NO:139)、片段19
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49(SEQ ID NO:140)、片本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种抗原结合剂，其包含特异性结合表皮生长因子受体变体III(EGFRvIII)的抗体的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域包含：a.轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的CDRL1、SEQ ID NO:9的CDRL2序列和SEQ ID NO:10的CDRL3序列；所述重链可变区包含SEQ ID NO:13的CDRH1序列、SEQ ID NO:14的CDRH2序列和SEQ ID NO:15的CDRH3序列；b.轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列的CDRL3；所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列的CDRH3；c.轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列的CDRL3；所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列的CDRH3；d.轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的CDRL3；所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列的CDRH3；e.轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列的CDRL3；所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列的CDRH3；f.轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列的CDRL3；所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列的CDRH3；g.轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:69所示的氨基酸序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列的CDRL3；所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:80所示的氨基酸序列的CDRH3；和h.轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:73所示的氨基酸序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:75所示的氨基酸序列的CDRL3；所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:80所示的氨基酸序列的CDRH3。2.权利要求1所述的抗原结合剂，其中所述抗原结合剂包含：a.轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或与SEQ ID NO:7基本上相同的序列；所述重链可变区包含与SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或与SEQ ID NO:12基本上相同的序列；b.轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列
具有至少80％同一性或与SEQ ID NO:17基本上相同的氨基酸序列；所述重链可变区包含与SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或与SEQ ID NO:22基本上相同的氨基酸序列；c.轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或与SEQ ID NO:27基本上相同的氨基酸序列；所述重链可变区包含与SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或与SEQ ID NO:32基本上相同的氨基酸序列；d.轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或与SEQ ID NO:37基本上相同的氨基酸序列；所述重链可变区包含与SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或与SEQ ID NO:42基本上相同的氨基酸序列；e.轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或与SEQ ID NO:47基本上相同的氨基酸序列；所述重链可变区包含与SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或与SEQ ID NO:52基本上相同的氨基酸序列；f.轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或与SEQ ID NO:57基本上相同的氨基酸序列；所述重链可变区包含与SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或与SEQ ID NO:62基本上相同的氨基酸序列；g.轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或与SEQ ID NO:67基本上相同的氨基酸序列；所述重链可变区包含与SEQ ID NO:77所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或与SEQ ID NO:77基本上相同的氨基酸序列、SEQ ID NO:92所示或与SEQ ID NO:92基本上相同的氨基酸序列、或SEQ ID NO:102所示或与SEQ ID NO:102基本上相同的氨基酸序列；或h.轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:72所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或与SEQ ID NO:72基本上相同的氨基酸序列；所述重链可变区包含与SEQ ID NO:77所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或与SEQ ID NO:77基本上相同的氨基酸序列、或SEQ ID NO:92所示或与SEQ ID NO:92基本上相同的氨基酸序列。3.权利要求1或2所述的抗原结合剂，其中所述抗原结合剂是抗体或其抗原结合片段、嵌合抗原受体、双特异性T
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细胞衔接物、双特异性杀伤细胞衔接物、三特异性杀伤细胞衔接物或任何免疫治疗性化合物。4.抗体或其抗原结合片段，其特异性结合EGFRvIII且包含：a.轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的CDRL1、SEQ ID NO:9的CDRL2序列和SEQ ID NO:10的CDRL3序列；所述重链可变区包含SEQ ID NO:13的CDRH1序列、SEQ ID NO:14的CDRH2序列和SEQ ID NO:15的CDRH3序列；b.轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列的CDRL3；所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列的CDRH3；
c.轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列的CDRL3；所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列的CDRH3；d.轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的CDRL3；所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列的CDRH3；e.轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列的CDRL3；所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列的CDRH3；f.轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列的CDRL3；所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列的CDRH3；g.轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:69所示的氨基酸序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列的CDRL3；所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:80所示的氨基酸序列的CDRH3；和h.轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:73所示的氨基酸序列的CDRL1、具有SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:75所示的氨基酸序列的CDRL3；所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列的CDRH1、具有SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列的CDRH2和具有SEQ ID NO:80所示的氨基酸序列的CDRH3。5.权利要求4所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是单克隆抗体、多克隆抗体、人源化抗体、嵌合抗体、人抗体、单链抗体或多特异性抗体。6.特异性结合EGFRvIII的抗体或其抗原结合片段，其包含：a.轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:118所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或与SEQ ID NO:118基本上相同的氨基酸序列；所述重链可变区包含与SEQ ID NO:116所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或与SEQ ID NO:116基本上相同的氨基酸序列；b.轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:115所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或与SEQ ID NO:115基本上相同的氨基酸序列；所述重链可变区包含与SEQ ID NO:116所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或与SEQ ID NO:116基本上相同的氨基酸序列；或c.轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:118所示的氨基酸序列具有至少80％同一性或与SEQ ID...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：加拿大国家研究委员会，
类型：发明
国别省市：