一种两色金鸡菊的新用途及分析方法技术

本发明专利技术提供了两色金鸡菊在制备肠道菌群调节药物方面的新用途，分析方法通过建立动物糖尿病模型，引入高通量测序技术，为后期研究两色金鸡菊治疗糖尿病的作用机制拓展新的方向和思路。向和思路。向和思路。

【技术实现步骤摘要】
一种两色金鸡菊的新用途及分析方法


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其是涉及一种两色金鸡菊的新用途及分析方法。

技术介绍

[0002]两色金鸡菊(Coreopsis tinctoria Nutt.)又名昆仑雪菊，为菊科金鸡菊属植物的干燥头状花序，始载于《新华本草纲要》，味甘，性平，归大肠经，具有清热解毒、活血化瘀等的功效，可治疗燥热烦渴、高血压、高血糖、心慌、胃肠不适等症状。两色金鸡菊作为新疆地区临床应用广泛的维吾尔族民族药，其药用价值正在被逐渐发现。

技术实现思路

[0003]本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种两色金鸡菊的新用途。
[0004]本专利技术所要解决的另一技术问题在于提供一种用于测定两色金鸡菊对肠道菌群影响的分析方法。
[0005]本专利技术采用的技术方案是：
[0006]两色金鸡菊在制备肠道菌群调节药物方面的新用途。
[0007]优选的，上述两色金鸡菊的新用途，所述肠道菌为乳杆菌属(Lactobacillus)、琥珀酸弧菌属(Succinivibrio)、密螺旋体属(Treponema)和/或未明确瘤胃菌属(unidentified
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Ruminococcaceae)。
[0008]优选的，上述两色金鸡菊的新用途，所述两色金鸡菊是由下述方法制备得到的：精密称量两色金鸡菊样品50～100g于2L烧杯中，倒入1～2L沸水，盖上锡箔纸，冲泡25～35min，将茶汤滤出，继续加1～2L沸水冲泡25～35min，模拟茶叶冲泡过程，滤出茶汤，合并两次茶汤，摇匀，滤液经减压回收纯水，浓缩至稠膏状，即得两色金鸡菊浸膏。
[0009]优选的，上述两色金鸡菊的新用途，所述两色金鸡菊是由下述方法制备得到的：精密称量两色金鸡菊样品60～100g于2L烧杯中，倒入1.5～2L沸水，盖上锡箔纸，冲泡30～35min，将茶汤滤出，继续加1.5～2L沸水冲泡30～35min，模拟茶叶冲泡过程，滤出茶汤，合并两次茶汤，摇匀，滤液经减压回收纯水，浓缩至稠膏状，即得两色金鸡菊浸膏。
[0010]优选的，上述两色金鸡菊的新用途，所述减压条件为温度50～55℃，真空度0.001Mpa至0.01Mpa。
[0011]一种用于测定两色金鸡菊对肠道菌群影响的分析方法，步骤如下：
[0012](1)向动物模型中灌胃方式进行给药，收集动物粪便样本，提取DNA，以16S rDNA可变区引物进行PCR扩增，并对PCR产物进行混样及纯化，之后构建文库，进行上机检测；
[0013](2)对测序数据进行处理，作OUT聚类和物种注释，比较分析肠道菌群的alpha和beta多样性。
[0014]优选的，上述用于测定两色金鸡菊对肠道菌群影响的分析方法，所述步骤(1)采用CTAB或SDS方法对样本地基因组DNA进行提取。
[0015]优选的，上述用于测定两色金鸡菊对肠道菌群影响的分析方法，所述步骤(1)中使
用带Barcode的特异引物进行PCR。
[0016]优选的，上述用于测定两色金鸡菊对肠道菌群影响的分析方法，所述步骤(1)中PCR产物使用2％浓度的琼脂糖凝胶进行电泳检测，对检测合格的PCR产物进行磁珠纯化，采用酶标定量，根据PCR产物浓度进行等量混样，充分混匀后使用2％的琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。
[0017]优选的，上述用于测定两色金鸡菊对肠道菌群影响的分析方法，所述步骤(1)中构建文库使用DNA PCR
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Free Sample Preparation Kit建库试剂盒，构建好的文库经过Qubit和Q
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PCR定量，文库合格后，使用NovaSeq6000进行上机测序。
[0018]优选的，上述用于测定两色金鸡菊对肠道菌群影响的分析方法，所述步骤(2)中将步骤(1)获得的下机数据进行处理，根据Barcode序列和PCR扩增引物序列拆分出各样本数据，截去Barcode和引物序列后使用FLASH对每个样本的reads进行拼接，得到原始数据，后经过严格的过滤处理得到高质量的数据。
[0019]优选的，上述用于测定两色金鸡菊对肠道菌群影响的分析方法，所述步骤(2)中OUT聚类利用Uparse算法对所有样本的高质量数据进行聚类，默认以97％的一致性将序列聚类成OTUs。
[0020]优选的，上述用于测定两色金鸡菊对肠道菌群影响的分析方法，所述步骤(2)中对OTUs序列进行物种注释，用Mothur方法与SILVA138的SSUrRNA数据库进行物种注释分析，获得分类学信息统计各样本的群落组成。
[0021]优选的，上述用于测定两色金鸡菊对肠道菌群影响的分析方法，所述步骤(2)中比较分析肠道菌群的alpha和beta多样性，其中发现乳杆菌属(Lactobacillus)、琥珀酸弧菌属(Succinivibrio)、密螺旋体属(Treponema)和未明确瘤胃菌属(unidentified
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Ruminococcaceae)相对丰度变化显著。
[0022]本专利技术的有益效果是：
[0023]上述两色金鸡菊的新用途，为制备肠道菌群调节药物提供了新的思路。分析方法通过建立动物(大鼠)糖尿病模型，引入高通量测序技术，旨在探究两色金鸡菊对宿主肠道菌群的调节作用、评估其对肠道菌群组成结构和代谢产物的影响，以及糖尿病发病机制与肠道微生物间的联系，初步探讨两色金鸡菊抗糖尿病作用的可能机制，为后期研究两色金鸡菊治疗糖尿病的作用机制拓展新的方向和思路。
附图说明
[0024]图1为探究两色金鸡菊对糖尿病大鼠肠道菌群影响分析技术流程图。
[0025]图2为实施例1中样品Genus分类水平中物种丰度图。NC
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正常组；Mod
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模型组；Met
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二甲双胍组；JH
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两色金鸡菊高剂量组；JL
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两色金鸡菊低剂量组。
具体实施方式
[0026]为了使本领域的技术人员更好的理解本专利技术的技术方案，下面结合附图及具体实施方式对本专利技术所述技术方案作进一步的详细说明。
[0027]实施例1
[0028]探究两色金鸡菊对糖尿病大鼠肠道菌群影响，方法如图1所示：
[0029](1)两色金鸡菊浸膏的制备
[0030]精密称量两色金鸡菊样品80g于2L烧杯中，倒入2L沸水，盖上锡箔纸，冲泡30min，将茶汤滤出，继续加2L沸水冲泡30min，模拟茶叶冲泡过程，滤出茶汤，合并两次茶汤，摇匀，滤液在温度50℃，真空度0.005Mpa下减压回收纯水，浓缩至稠膏状，即得两色金鸡菊浸膏。
[0031](2)糖尿病大鼠模型的建立
[0032]SD雄性大鼠，体重180
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200g，高脂高糖饲料喂养4周以上，造成胰岛素抵抗，糖耐量检测合格后，尾静脉注射STZ(由pH4.5的柠檬酸缓冲液配制)诱导糖尿病，以空腹血糖高于16.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.两色金鸡菊在制备肠道菌群调节药物方面的新用途。2.根据权利要求1所述的两色金鸡菊的新用途，其特征在于：所述肠道菌为乳杆菌属、琥珀酸弧菌属、密螺旋体属和/或未明确瘤胃菌属。3.根据权利要求1所述的两色金鸡菊的新用途，其特征在于：所述两色金鸡菊是由下述方法制备得到的：精密称量两色金鸡菊样品50～100g于2L烧杯中，倒入1～2L沸水，盖上锡箔纸，冲泡25～35min，将茶汤滤出，继续加1～2L沸水冲泡25～35min，模拟茶叶冲泡过程，滤出茶汤，合并两次茶汤，摇匀，滤液经减压回收纯水，浓缩至稠膏状，即得两色金鸡菊浸膏。4.根据权利要求3所述的两色金鸡菊的新用途，其特征在于：所述减压条件为温度50～55℃，真空度0.001Mpa至0.01Mpa。5.一种用于测定两色金鸡菊对肠道菌群影响的分析方法，其特征在于：步骤如下：(1)向动物模型中灌胃方式进行给药，收集动物粪便样本，提取DNA，以16S rDNA可变区引物进行PCR扩增，并对PCR产物进行混样及纯化，之后构建文库，进行上机检测；(2)对测序数据进行处理，作OUT聚类和物种注释，比较分析肠道菌群的alpha和beta多样性。6.根据权利要求5所述的用于测定两色金鸡菊对肠道菌群影...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈晓鹏，刘静，李春霞，何巧玉，
申请(专利权)人：天津中医药大学，
类型：发明
国别省市：