高血压血清细胞外囊泡蛋白标志物及其应用制造技术

本申请提供了细胞外囊泡，特别是血清细胞外囊泡中的SPARC作为高血压或高血压相关疾病的标志物的应用；本申请还提供了相应试剂盒、检测方法和检测系统。实验表明使用细胞外囊泡作为标志物诊断高血压或预测高血压及相关疾病风险有良好的敏感性和特异性，具备临床应用前景。前景。前景。

【技术实现步骤摘要】
高血压血清细胞外囊泡蛋白标志物及其应用


[0001]本申请属于医学检测，特别是高血压检测领域。具体地，本申请提供了细胞外囊泡，特别是血清细胞外囊泡中的SPARC作为高血压或高血压相关疾病的标志物的应用；本申请还提供了相应试剂盒、检测方法和检测系统。

技术介绍

[0002]高血压是心血管疾病的主要危险因素，也是中国人死亡的首要原因【1】。一项全国性调查显示，我国18岁以上人群约2.4亿患有高血压【2】。目前我国高血压可调节的危险因素研究仍旧缺乏，但可以肯定的是改善高血压及相关疾病症状会极大的减少致残致死率。
[0003]血压(BP)控制机制，例如心输出量、外周血管阻力和循环血容量，会导致多种高血压表型。每种机制都可能在不同程度上增加高血压患者的血压，为每个患者选择最合适的治疗方法是很重要的。高血压发病机制涉及肾素
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血管紧张素
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醛固酮系统【3】，血管平滑肌【4】和血管内皮功能障碍【5】，以及受损的血小板功能【6】和抗利尿激素【3】等相关因素。但是，对大多数情况下，对高血压病发病机制仍无法清楚描述。例如，内皮功能障碍，这不仅是高血压的使动因素，而且导致高血压进一步恶化【7】。因此，探索价格适宜、微创或非侵入性诊断工具来辅助血压监测，评估高血压进展阶段，并建立高血压的早期评价指标，例如内皮细胞或平滑肌损伤的初始阶段，有很重要的临床意义，这将这有助于临床医生对心血管疾病的精准诊疗。血液是最常用的临床液体活检样本来源，监测血清或血浆的蛋白组分也成为现在评价疾病易感性、是否患病以及疾病进程重要手段。已经有很多血清/血浆蛋白作为疾病的标志物在临床诊断中广泛检测。目前，通过血清进行高血压和对照人群的比较血液样本研究及生物标志物鉴定已经有一些报道，例如，流行病学数据表明，血浆脂联素水平是肥胖相关高血压发展的生物标志物和可能的介质【8】。
[0004]细胞外囊泡(extracellular vesicle,EV)是高血压潜在的生物标志物来源。EV是几乎所有细胞都可以分泌的且存在于各种体液中的纳米级小囊泡【9】。由于EV携带蛋白质、RNA和脂质，因此它们还被称为效应器和细胞间沟通的桥梁。EV的内容物还可以反映母细胞的状态。分泌细胞对EVs的内容物具有靶向精密调节和高度选择性，在不同病理生理状态下，细胞分泌出包含有特定内容物的EVs至细胞外环境(血液、尿液、唾液、前列腺液、羊水和胸腔积液等)中【10】，以旁分泌的方式作用于周围的细胞或通过体液进行系统分布【11】。因此，EVs可以作为新的生物标志物来源以优化临床相关的高血压的精准诊断，确定早期终末器官损伤，并确定高血压的新机制，从而指导和优化高血压临床治疗。高血压分子标志物目前已经报道的主要是来源于高血压患者液态活检样品(包括尿液，血液，唾液)的蛋白、代谢性小分子、miRNA等标志物，与这些标志物相比，使用EVs内容物作为诊断生物标志物有明显的优势：(1)EVs含有组织、细胞或疾病特异性的蛋白质和核酸；(2)脂质双层为细胞外囊泡内的RNA、DNA和蛋白质提供保护，使其免受细胞外环境中的核酸酶和蛋白酶的影响；(3)EVs的相对硬度使其有可能使用广泛的方法从一系列体液(即血浆、血清、尿液、唾液、精液、乳汁、水液和脑脊液)中分离和富集。EV的这些优势使其作为生物标志物的来源更有突出的优
点和前景。至从2016年1月21日第一家细胞外囊泡诊断公司(Exosome Diagnostics,Inc.)成立并且推出了以ExoDx
TM
Lung(ALK)为代表的诊断试剂盒用于临床诊断以来，国际上和国内多家以细胞外囊泡为基础的诊断公司相继成立，致力于细胞外囊泡的疾病生物标志物的研究和相关产品的研发。
[0005]SPARC也被称为BM
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40或者骨连接蛋白，是一种32KD的细胞糖蛋白，主要通过调节细胞粘附、增殖和基质沉积来调节细胞与细胞外基质的相互作用【12】。SPARC在形态发生和重塑与修复的组织中高度表达【13】。而血小板生长因子、血管内皮生长因子和胰岛素样生长因子的活性受SPARC的负向调节【14】。在冠状动脉疾病患者中，脂肪组织及血浆中SPARC表达升高。SPARC还介导了与糖尿病和肥胖相关的病理机制。例如，在糖尿病肾病的啮齿动物模型【15】及糖尿病合并纤维化性肾损伤患者【16】的肾活检结果显示SPARC表达明显升高；另外，研究人员在人脂肪组织中检测了SPARC水平发现，其表达在皮下脂肪中占主导地位且SPARC的表达还受到脂肪含量、瘦素、血糖以及胰岛素水平的影响【17】。肥胖人群SPARC mRNA表达高于非肥胖人群,同时SPARC还能通过Wnt/连环蛋白信号途径抑制脂肪形成【18】。SPARC的临床相关研究主要集中于糖尿病及其并发症，原发性高血压中SPARC的相关研究很有限，仅有的几篇基础研究表明在血管紧张素II诱导的高血压对肾脏的损害在SPARC敲除小鼠中得到了改善【19】；SPARC表达的增加还有助于压力超负荷心脏中胶原蛋白的合成后处理并增加舒张期硬度【20】。而细胞外囊泡中的SPARC水平与系统性高血压相关性的临床研究尚未见报道。

技术实现思路

[0006]为了进一步研究SPARC水平与系统性高血压相关性，我们用了Luminex定量检测手段，通过比较高血压患者和非高血压患者的血清EV蛋白差异，鉴定到了血清细胞外囊泡蛋白酸性富含半胱氨酸的分泌蛋白(SPARC)在高血压患者的血清细胞外囊泡表达增加，并且与非高血压对照相比，含量变化有显著统计学差异。
[0007]一方面，本申请提供了检测细胞外囊泡中的SPARC含量的试剂在制备诊断高血压或预测高血压及相关疾病风险的试剂盒中的应用。
[0008]进一步地，所述检测细胞外囊泡中的SPARC含量的试剂包括细胞外囊泡提取试剂。
[0009]进一步地，所述检测细胞外囊泡中的SPARC含量的试剂包括测量细胞外囊泡中的SPARC含量或测量细胞外囊泡中SPARCmRNA水平的试剂。
[0010]进一步地，所述测量细胞外囊泡中的SPARC含量的试剂为Luminex试剂、ELISA试剂、质谱用试剂、流式细胞术试剂或western blot试剂；优选检测法试剂。
[0011]另一方面，本申请提供了细胞外囊泡中的SPARC作为高血压或高血压及相关疾病风险的标志物的应用。
[0012]另一方面，本申请提供了一种诊断高血压或预测高血压及相关疾病风险的非诊断方法，其特征在于，所述方法包括检测细胞外囊泡中的SPARC含量的步骤。
[0013]进一步地，所述检测细胞外囊泡中的SPARC含量的步骤包括细胞外囊泡提取步骤，以及测量血清细胞外囊泡中的SPARC含量或测量细胞外囊泡中SPARCmRNA水平的步骤。
[0014]进一步地，所述检测细胞外囊泡中的SPARC含量使用法、ELISA、质谱、流式细胞术或western blot；优选法。
[0015]进一步地，所述方法中细胞外囊泡中的SPARC含量高于19.428ng/mL时，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测细胞外囊泡中的SPARC含量的试剂在制备诊断高血压或预测高血压及相关疾病风险的试剂盒中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其中所述检测细胞外囊泡中的SPARC含量的试剂包括细胞外囊泡提取试剂。3.根据权利要求1或2所述的应用，其中所述检测细胞外囊泡中的SPARC含量的试剂包括测量细胞外囊泡中的SPARC含量或测量细胞外囊泡中SPARCmRNA水平的试剂。4.根据权利要求3所述的应用，其中所述测量细胞外囊泡中的SPARC含量的试剂为检测法试剂、ELISA试剂、质谱用试剂、流式细胞术试剂或western blot试剂；优选检测法试剂。5.细胞外囊泡中的SPARC作为高血压或高血压相关疾病的标志物的应用。6.诊断高血压或预测高血压及相关疾病风险的非诊断方法，其特征在于，所述方法包括检测细胞外囊泡中的SPARC含量的步骤。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述检测细胞外囊泡中的SPARC含量的步骤包括细胞外囊泡提取步骤，以及测量血清细胞外囊泡中的SPARC含量或测量细胞外囊泡中SPARC mRNA水平的步...

【专利技术属性】
技术研发人员：张慧娜，李欣玮，
申请(专利权)人：北京市心肺血管疾病研究所，
类型：发明
国别省市：