靶向Cdcp1基因的小干扰RNA及其在制备慢性疼痛治疗药物中的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医疗技术领域，本发明专利技术公开了三组靶向人和小鼠CDCP1基因的siRNA及其在慢性疼痛治疗中的应用。通过设计并合成三组靶向CDCP1基因的siRNA，体外实验表明这三组siRNA均能有效降低CDCP1基因的表达。行为学结果表明该组siRNA可以显著抑制外周神经损伤诱导产生的机械性痛觉过敏；将其眶下孔内注射入三叉神经疼痛模型小鼠，分子生物学实验表明该siRNA能够在体内显著降低小鼠三叉神经节中Cdcp1的表达升高。本发明专利技术为慢性疼痛治疗药物的研发提供了新靶点和新方法。提供了靶向CDCP1基因的非化学修饰及化学修饰核酸分子，对慢性疼痛具有较好的治疗效果，为临床治疗慢性疼痛奠定了基础，具有重大的应用推广价值。具有重大的应用推广价值。具有重大的应用推广价值。

【技术实现步骤摘要】
靶向Cdcp1基因的小干扰RNA及其在制备慢性疼痛治疗药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，涉及用于研究、诊断和治疗对CUB结构域蛋白1(CUB domain
‑
containing protein 1,CDCP1)基因表达和/或活性的调节响应和/或调节CDCP1基因表达通路的性状、疾病或状况的化合物、组合物和方法；具体涉及一种抑制Cdcp1(CUB结构域蛋白1)基因表达的小干扰RNA及其在制备慢性疼痛治疗药物中的应用。

技术介绍

[0002]慢性疼痛是由感觉神经系统疾病或神经损伤引起的，如癌症、帕金森病、糖尿病等都能引起慢性疼痛。慢性疼痛主要包括三叉神经痛、卒中后神经痛、坐骨神经痛等。慢性疼痛会使人食欲缺乏，睡眠紊乱，可严重影响患者的生活质量。据文献中临床数据(Pain:NeuPSIG guidelines on neuropathic pain assessment,2011,Volume 152,Issue 1)显示，目前全世界神经病理性疼痛患者的发病率约3.3％
‑
8.2％。但是慢性疼痛的病因多种多样，致病机制比较复杂，人们对其研究有限，临床仍缺乏镇痛效果好的药物。目前市场上的治疗药物主要有麻醉性镇痛药、解热消炎镇痛药、催眠镇痛药、抗癫痫药和抗抑郁药。大多数的止痛药都会给人体健康造成一定的副作用，如肝功能损害、消化不良、头晕等。慢性疼痛的疼痛程度重，而治疗效果却不理想，会持续存在，因此，需要发现新的镇痛靶点，研发新的药物来抑制或缓解神经性疼痛。
[0003]小分子干扰RNA(small interfering Ribonucleic Acid，siRNA)是一种双链RNA，可以造成目的mRNA特异性降解，从而使基因转录后沉默，参与RNA干扰。在疾病治疗中，使siRNA进入细胞内，干扰特定疾病基因RNA的功能，使蛋白质的翻译停止而起到基因治疗的作用。和传统临床治疗药物相比，siRNA药物毒副作用小、效率高，是一种最具潜力的基因治疗方法。在2018年，美国食品和药物管理局就已批准Alnylam制药公司的产品Onpattro(patisiran)，用于治疗成年患者由遗传性转甲状腺素介导的淀粉样变性引起的周围神经疾病。近年来，针对多种疾病的siRNA已经相继进入临床试验的不同阶段。
[0004]经专利技术人研究发现，在三叉神经结扎(partial infraorbital nerve transection,pIONT)损伤诱导的三叉神经疼痛小鼠模型的三叉神经节(trigeminal ganglion,TG)中的Cdcp1的表达显著上调。

技术实现思路

[0005]专利技术目的：针对现有技术中存在问题或不足，本专利技术提供一种抑制Cdcp1基因表达的小干扰RNA及其在制备慢性疼痛治疗药物中的应用，能有效下调或抑制Cdcp1蛋白的表达，减少Cdcp1蛋白的分泌。
[0006]为实现上述专利技术目的，本专利技术的实施例提供一种抑制Cdcp1基因表达的小干扰RNA，其特征在于，至少包括Cdcp1 siRNA 1、Cdcp1 siRNA 2或Cdcp1siRNA 3中的一种；其中，
[0007]Cdcp1 siRNA 1
[0008]正义序列：5
′‑
GCAGGAACGUCUCAGGCUUTT
‑3′
；
[0009]反义序列：5
′‑
AAGCCUGAGACGUUCCUGCTT
‑3′
；
[0010]Cdcp1 siRNA 2
[0011]正义序列：5
′‑
GCUUAUGACCUGGCAGUUUTT
‑3′
；
[0012]反义序列：5
′‑
AAACUGCCAGGUCAUAAGCTT
‑3′
；
[0013]Cdcp1 siRNA 3
[0014]正义序列：5
′‑
GGUUUGUUCCUGGGUGCUUTT
‑3′
；
[0015]反义序列：5
′‑
AAGCACCCAGGAACAAACCTT
‑3′
。
[0016]进一步的，所述Cdcp1 siRNA 1、Cdcp1 siRNA 2或Cdcp1 siRNA 3三组抑制Cdcp1表达的siRNA，其靶点均设计在Cdcp1基因的保守区域，且位于编码区。
[0017]本专利技术的实施例还提供一种抑制Cdcp1表达的siRNA在制备治疗慢性疼痛药物方面的应用。
[0018]进一步的，所述siRNA选自Cdcp1 siRNA 1、Cdcp1 siRNA 2或Cdcp1siRNA 3中。
[0019]本专利技术的实施例另外还提供一种治疗慢性疼痛的药物，其特征在于，至少包括抑制Cdcp1表达的siRNA。
[0020]进一步的，所述siRNA选自Cdcp1 siRNA 1、Cdcp1 siRNA 2或Cdcp1siRNA 3中。
[0021]优选的，所述药物中还具有医学上可接受的添加剂。
[0022]本专利技术的上述技术方案的有益效果如下：
[0023](1)本专利技术提供了三组靶向Cdcp1基因的化学修饰核酸siRNA分子(Cdcp1 siRNA 1、Cdcp1 siRNA 2或Cdcp1 siRNA 3)，Cdcp1 siRNA 1、Cdcp1siRNA 2或Cdcp1 siRNA 3能够在体内有效降低Cdcp1基因的表达；抑制Cdcp1基因表达能够有效缓解pIONT诱导产生的机械性痛觉过敏，本专利技术为临床治疗慢性疼痛奠定了基础，具有重大的应用推广价值。
[0024](2)本专利技术的实施例通过实验验证了三组可以有效抑制Cdcp1基因表达的siRNA，可用于药物研发；眶下孔内注射Cdcp1 siRNA能缓解外周神经结扎损伤引起的机械性痛觉过敏并下调Cdcp1的表达。因此，通过应用小干扰RNA下调或抑制Cdcp1的蛋白表达，是治疗慢性疼痛的一种有效途径。
附图说明
[0025]图1为本专利技术的实施例一中Cdcp1 siRNA 1靶序列位于人和小鼠Cdcp1基因序列保守区域图。
[0026]图2为本专利技术的实施例一中Cdcp1 siRNA 2靶序列位于人和小鼠Cdcp1基因序列保守区域图。
[0027]图3为本专利技术的实施例一中Cdcp1 siRNA 3靶序列位于人和小鼠Cdcp1基因序列保守区域图。
[0028]图4为本专利技术的实施例二中pIONT三叉神经疼痛模型三叉神经节中Cdcp1 mRNA表达增加的Real
‑
time PCR结果图。
[0029]图5为本专利技术的实施例三中体外实验验证Cdcp1 siRNA的沉默效率的结果图。
[0030]图6为本专利技术的实施例四中siRNA干扰后抑制了小鼠面部的机械性触诱发痛的结
果图。
[0031]图7为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抑制Cdcp1(CUB结构域蛋白1)基因表达的小干扰RNA，其特征在于，至少包括Cdcp1 siRNA 1、Cdcp1 siRNA 2和Cdcp1 siRNA 3；其中，Cdcp1 siRNA 1正义序列：5
′‑
GCAGGAACGUCUCAGGCUUTT
‑3′
；反义序列：5
′‑
AAGCCUGAGACGUUCCUGCTT
‑3′
；Cdcp1 siRNA 2正义序列：5
′‑
GCUUAUGACCUGGCAGUUUTT
‑3′
；反义序列：5
′‑
AAACUGCCAGGUCAUAAGCTT
‑3′
；Cdcp1 siRNA 3正义序列：5
′‑
GGUUUGUUCCUGGGUGCUUTT
‑3′
；反义序列：5
′‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱林鹏，马灵杰，高永静，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：