一种泡沫分离β-葡萄糖苷酶融合蛋白的方法技术

本发明专利技术属于重组蛋白分离纯化技术领域，主要涉及一种分离纯化β

【技术实现步骤摘要】
一种泡沫分离
β
‑
葡萄糖苷酶融合蛋白的方法


[0001]本专利技术属于重组蛋白分离纯化领域，具体公开了一种泡沫分离β
‑
葡萄糖苷酶融合蛋白的方法。

技术介绍

[0002]β
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葡萄糖苷酶(β
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Glu)是一种能够水解结合于末端非还原性的β
‑
D
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葡萄糖苷键的水解酶，它可以将植物中的一些风味前体物质分解为拥有自然气味的香气物质，还可以协助其它纤维素酶降解纤维素。此外，它还参与生物体的糖代谢，对维持生物体的正常生理功能具有重要作用。因此，研究分离纯化β
‑
Glu 具有重要的现实意义。
[0003]目前常用的分离纯化β
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Glu的方法主要有：硫酸铵/丙酮分级沉淀、凝胶过滤、葡聚糖凝胶柱层析、高效液相色谱和DEAE阴离子交换层析等方法。这些方法的缺陷在于需要多种方法结合使用，单一的方法并不能完成β
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Glu的分离纯化。这些方法操作工艺复杂，且成本较高，产量和纯化倍数较低，因本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种泡沫分离β
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葡萄糖苷酶融合蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.制备含有融合蛋白GLEGB的粗酶液：构建表达融合蛋白GLEGB的质粒，转入表达菌中诱导表达；破碎菌体后离心取上清，即为含有融合蛋白GLEGB的粗酶液；所述融合蛋白GLEGB为将类弹性蛋白ELP，石墨烯结合肽GB用连接肽linker连接至葡萄糖苷酶Glu所融合形成的Glu
‑
linker
‑
ELP
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GB融合蛋白GLEGB；S2.粗酶液的泡沫性能测定；使用泡沫分析仪分析不同浓度粗酶液样品泡沫高度和泡沫形态随时间的变化；S3.使用泡沫分离设备初步分离纯化粗酶液中的融合蛋白GLEGB；S4.结合ITC对融合蛋白GLEGB的进一步分离纯化。2.根据权利要求1所述的一种泡沫分离β
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葡萄糖苷酶融合蛋白的方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述Glu的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1所示；所述linker的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.2所示；所述ELP的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.3所示；所述GB的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.4所示。3.根据权利要求1所述的一种泡沫分离β
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葡萄糖苷酶融合蛋白的方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述构建的表达融合蛋白GLEGB的质粒为pET
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GLEGB，所述表达菌为大肠杆菌BL21。4.根据权利要求1所述的一种泡沫分离β
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葡萄糖苷酶融合蛋白的方法，其特征在于，所述步骤S2中，粗酶液的泡沫性能测定包括以下步骤：将一定体积的待测溶液缓慢倒入DFA
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100泡沫分析仪中，打开鼓气装置，固定气速鼓气一定时间后，将其关闭；等待泡沫消泡；测量过程中，调整发酵液的浓度，用泡沫分析仪器软件ADVANCE在线记录各样品泡沫高度和泡沫形态随时间的变化。5.根据权利要求1所述的一种泡沫分离β
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葡萄糖苷酶融合蛋白的方法，其特征在于，步骤S3中的泡沫分离设备包括空气压缩机(1)、气体流量计(2)、进料口(3)、阀门(4)、泡沫分离柱(5)、残留液体出口(6)和泡沫收集装置(7)；所述气体流量计(1)的输入端与空气压缩机(2)用软管相连，输出端与泡沫分离柱(5)底端相连；所述进料口(3)通过所述阀门(4)连通所述泡沫分离柱(5)侧壁的中上部；所述残留液体出口(6)设置在所述泡沫分离柱(5) 的下方的侧壁上，所述泡沫收集装置(7)位于泡沫分离柱(5)的顶端出口处。6.根据权利要求5所述的一种泡沫分离β

【专利技术属性】
技术研发人员：解雪乔，方思涵，苗向阳，黄文睿，
申请(专利权)人：苏州健雄职业技术学院，
类型：发明
国别省市：