转氨酶突变体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种转氨酶突变体及其应用。其中，转氨酶突变体在SEQ ID NO：1所示序列基础上发生氨基酸突变，氨基酸突变为W60Y、Y168A、V379W、V379L、V379M、C418Q及C418W的单点突变或组合突变，这些转氨酶突变体的活性、稳定性、对温度、pH及有机溶剂耐受性提高，解决了现有技术中转氨酶在极端环境中的耐受性差的问题，适用于酶工程领域。适用于酶工程领域。

【技术实现步骤摘要】
转氨酶突变体及其应用


[0001]本专利技术涉及酶工程领域，具体而言，涉及一种转氨酶突变体及其应用。

技术介绍

[0002]手性胺是合成许多手性药物的重要中间体，也是含氨基的光学纯药物的主要成分。神经类药物、血管药物、抗高血压药物、抗感染药物及疫苗等都是以手性胺作为中间体。转氨酶以酮类化合物为原料，通过立体选择性地转氨基作用，可以高效生产手性胺。但游离酶酶促方法在放大生产应用中存在很多问题，如酶活性低及酶用量大导致发酵成本增加；易受反应体系中有机溶剂的影响而变性失活，后处理回收产物是乳化现象严重，三废产生量大等。另外，在分离产品胺的过程中，只能通过使酶变性失活形成沉淀后除去并丢弃，无法再利用。
[0003]固定化酶的研究始于1910年，正式研究于20世纪60年代，70年代已在全世界普遍开展。酶的固定化(Immobilization of enzymes)是用固体材料将酶束缚或限制于一定区域内，仍能进行其特有的催化反应、并可回收及重复利用的一类技术。与游离酶相比，固定化酶在保持其高效专一及温和的酶催化反应特性的同时，又克服了游离酶的不足之本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种转氨酶突变体，其特征在于，所述转氨酶突变体在SEQ ID NO：1所示序列基础上发生氨基酸突变，所述氨基酸突变为C418Q、C418W、W60Y、Y168A、V379W、V379L、V379M、W60Y+Y168A、W60Y+V379W、W60Y+V379L、W60Y+V379M、W60Y+C418Q、W60Y+C418W、Y168A+V379W、Y168A+V379L、Y168A+V379M、Y168A+C418Q、Y168A+C418W、V379W+C418Q、V379W+C418W、V379L+C418Q、V379L+C418W、V379M+C418Q、V379M+C418W、W60Y+Y168A+V379W、W60Y+Y168A+V379L、W60Y+Y168A+V379M、W60Y+Y168A+C418Q、W60Y+Y168A+C418W、W60Y+V379W+C418Q、W60Y+V379W+C418W、W60Y+V379L+C418Q、W60Y+V379L+C418W、W60Y+V379M+C418Q、W60Y+V379M+C418W、Y168A+V379W+C418Q、Y168A+V379W+C418W、Y168A+V379L+C418Q、Y168A+V379L+C418W、Y168A+V379M+C418Q、Y168A+V379M+C418W、W60Y+Y168A+V379W+C418Q、W60Y+Y168A+V379L+C418Q、W60Y+Y168A+V379M+C418Q、W60Y+Y168A+V379W+C418W、W60Y+Y168A+V379L+C418W或W60Y+Y168A+V379M+C418W。2.一种DNA分子，其特征在于，所述DNA分子编码权利要求1所述的转氨酶突变体。3.一种重组质粒，其特征在于，所述重组质粒连接有权利要求2所述的DNA分子。4.一种固定化转氨酶，其特征在于，所述固定化转氨酶包括权利要求1所述的转氨酶突变体。5.根据权利要求4所述的固定化转氨酶，其特征在于，所述固定化转氨酶为所述转氨酶突变体的交联固定化酶聚集体；优选地，所述交联固定化酶聚集体为戊二醛交联的固定化酶聚集体；优选地，所述交联固定化酶聚集体为与戊二醛活化的PEI交联的固定化酶聚集体；更优选地，所述交联固定化酶聚集体为与辅因子活化的PEI经戊二醛交联的固定化酶聚集体。6.根据权利要求4所述的固定化转氨酶，其特征在于，所述固定化转氨酶为所述转氨酶突变体与载体结合的固定化酶；优选地，所述载体为交联聚合物树脂球；优选地，所述树脂球包括大孔吸附树脂球、氨基型树脂球或环氧型树脂球；优选地，所述大孔吸附树脂球的基质为无官能团的聚苯乙烯；更优选地，所述大孔吸附树脂包括NKA9、LXEP120、AB
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8、ECR8806、XAD
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7或D3520；优选地，所述氨基型树脂球为具有氨基官能团的交联聚合物树脂球；更优选地，所述氨基型树脂球的官能团为C1
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C4或C5
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C10长度的氨基官能团；更优选地，所述氨基型树脂球的官能团为具有C2或C6长度碳链手臂的氨基官能团；更优选地，所述氨基型树脂球为聚甲基丙烯酸酯树脂球、聚苯乙烯树脂球或甲基丙烯酸酯与苯乙烯共聚物的树脂球；更优选地，所述氨基型树脂球包括Lifetech
TM
ECR8309、Lifetech
TM
ECR8409、LX1000HA或LXEPHA；优选地，所述环氧型树脂球为具有环氧基官能团的聚合物树脂球；更优选地，所述环氧型树脂球具有C2
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C8长度碳链手臂的环氧基官...

【专利技术属性】
技术研发人员：洪浩，詹姆斯，
申请(专利权)人：凯莱英医药集团天津股份有限公司，
类型：发明
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