一种基于前蛋白转化酶枯草溶菌素9基因靶点的纳米递送系统的制备技术方案

本发明专利技术提供了一种基于前蛋白转化酶枯草溶菌素9基因靶点的聚二甲双胍CRISPR/Cas9纳米递送系统的制备方法，涉及药物化学，药剂学，分子生物学等技术领域。所述纳米递送系统的合成方法包括：1)2

【技术实现步骤摘要】
一种基于前蛋白转化酶枯草溶菌素9基因靶点的纳米递送系统的制备


[0001]本专利技术涉及有机化学，药剂学，分子生物学等多项领域。具体包括聚二甲双胍脂质纳米颗粒等有机分子的化学合成、分子的自组装策略以及与CRISPR/Cas9技术相关的生物信息学和基因工程学。

技术介绍

[0002]基因定点修饰是研究基因功能的重要手段之一，也可被用于人类疾病的治疗，因此这类技术成为现代分子生物学的研究热点。成簇的规律间隔的短回文重复序列(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/Cas9)系统，简称CRISPR/Cas9，是目前前沿的基因编辑工具之一，它主要是基于细菌的获得性免疫系统改造而成，其特点是制作简单、成本低、作用高效。目前，通过CRISPR/Cas9在靶细胞实现基因编辑的主要方式有3种：
①
递送Cas9的蛋白和gRNA；
②
递送编码Cas9以及gRNA的质粒；
③
递送Cas9
‑
mRNA和gRNA。在这三种方本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于前蛋白转化酶枯草溶菌素9基因靶点的聚二甲双胍CRISPR/Cas9纳米递送系统的制备方法，包括步骤：(1)2
‑
氰基
‑5‑
((2
‑
甲氧基聚乙二醇)氨基)
‑5‑
氧代戊烷
‑2‑
基苯二硫代甲酸酯的合成；(2)甲基丙烯酸丙酯的合成；(3)N
‑
(2
‑
(3
‑
氨基甲酰胍)乙基)甲基丙烯酰胺的合成；(4)聚二甲双胍脂质纳米颗粒的合成；(5)gRNA的体外转录合成；(6)聚二甲双胍CRISPR/Cas9纳米递送系统的构建。2.根据权利要求1所述的方法，2
‑
氰基
‑5‑
((2
‑
甲氧基聚乙二醇)氨基)
‑5‑
氧代戊烷
‑2‑
基苯二硫代甲酸酯的合成及纯化步骤：取4，4
’
偶氮(4
‑
氰戊酸)5.839g，双硫代苯甲酰基4.25g，溶解于80mL乙酸乙酯中，加热回流反应16h。乙酸乙酯：正己烷/2：3柱层析纯化，得5.3g红色油状产物，产率68％。之后，将上述产物、77.6mg碳二亚胺、46mg N
‑
羟基琥珀酰亚胺溶解于4mL二氯甲烷中，活化2
‑
3h，称取100mg甲氧基聚乙二醇，溶解于二氯甲烷中，取活化好的产物加入其中，反应过夜，之后滴加4℃乙醚重结晶，3000rpm离心，倒去上清液，冻干，得粉红色产物。3.根据权利要求1所述的方法，甲基丙烯酸丙酯的合成步骤：取正丙醇、三乙胺，溶解于二氯甲烷中，冰浴搅拌，缓缓加入甲基丙烯酰胺，加热反应至室温，反应过夜，过滤并收集溶液，旋蒸浓缩滤液，得浅黄色油状产物。4.根据权利要求1所述的方法，N
‑
(2

【专利技术属性】
技术研发人员：于超，赵云飞，王帆，李韵，陈俊，
申请(专利权)人：重庆医科大学，
类型：发明
国别省市：