具有滑膜炎症抑制功能的纳米材料的制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了具有滑膜炎症抑制功能的纳米材料的制备方法及应用，属于生物技术领域，其技术方案要点是：包括如下步骤：S1、shRNA

【技术实现步骤摘要】
具有滑膜炎症抑制功能的纳米材料的制备方法及应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及具有滑膜炎症抑制功能的纳米材料的制备方法及应用。

技术介绍

[0002]越来越多地证据表明骨关节炎(OA)是一种与炎症相关的免疫性疾病，关节滑膜在其中扮演重要角色。关节滑膜可分为两层，即较薄而靠近关节腔的滑膜内层和滑膜下层，表层有2
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3层细胞，在电镜下可确认出两种细胞，但两者之间无明显界线，它们是巨噬细胞样滑膜细胞和成纤维样滑膜细胞。
[0003]滑膜炎过程中，巨噬细胞的数量急剧增加。这种大量增长一部分来源于滑膜中原有的巨噬细胞逃避凋亡路径，但更多的来自于血液循环时浸润的巨噬细胞。巨噬细胞是一种高度可变的细胞，应答于其所在微环境的不同，主要有两种极化形式，M1型和M2型，M1型巨噬细胞是骨关节炎炎症因子产生、软骨降解、骨赘形成的主要巨噬细胞亚群，而M2型巨噬细胞通过分泌抗炎因子，对骨关节炎具有保护作用。
[0004]滑膜可大量分泌瘦素(leptin)，其表达水平与OA的进展和严重程度显著相关，Leptin通过其受体本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.具有滑膜炎症抑制功能的纳米材料的制备方法，其特征是：包括如下步骤：S1、shRNA
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LeptinR的构建：将合成的shRNA
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LeptinR片段插入到质粒载体中获得重组质粒载体，然后再将所述重组质粒载体载体转化到大肠杆菌中，并提取获得shRNA
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LeptinR质粒；S2、巨噬细胞膜制备：A.取对数生长期的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(M0)，待密度达到70％时，加入IL
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4和IL
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13，作用24h后，收集M2型巨噬细胞；B.采用预冷的Tris
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镁盐缓冲盐重悬细胞，然后通过微型挤出器反复挤出20次以破坏细胞，再采用蔗糖梯度离心法提取细胞膜；S3、载基因纳米粒M2H@RPK的制备，采用静电吸附法制备纳米粒M2H@RPK，其具体步骤为：a.将S1步骤中shRNA
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LeptinR质粒与iRGD混合，静置5min，形成iRGD与shRNA
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LeptinR的共混物；再加入PEI和抗炎肽KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA(KFAK)，得到复合物RPK(KFAK
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iRGD
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PEI
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shRNA
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LeptinR)，静置混合5min；b.向复合物RPK中加入HA，混合均匀，并通过自组装得到纳米粒H@RPK(HA@K...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨成莉，周凯，胡丹蓉，钱志勇，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：