用于组织特异性APOE调节的寡核苷酸制造技术

本公开内容涉及新ApoE靶向序列。还提供了用于治疗神经退行性和淀粉样物质相关疾病的新寡核苷酸。新寡核苷酸。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于组织特异性APOE调节的寡核苷酸
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2019年3月15日提交的美国临时申请序列No.62/819,189；于2019年6月21日提交的美国临时申请序列No.62/864,797和于2019年12月20日提交的美国临时申请序列No.62/951,441的权益，其全部公开内容在此通过引用并入本文。
[0003]关于联邦资助的研究或开发的声明
[0004]本专利技术是在美国国家卫生研究院授予的资助No.NS104022政府支持下完成的。政府对本专利技术具有一定的权利。
专利

[0005]本公开内容涉及新载脂蛋白E(apolipoprotein E，ApoE)靶向序列、新分支寡核苷酸以及用于治疗和预防神经退行性变的新方法。

技术介绍

[0006]患有包括阿尔茨海默病(Alzheimer
’
s disease，AD)和肌萎缩侧索硬化(Amyotrophic Lateral Sclerosis，ALS)的神经退行性疾病的患者的治疗选择是受限的。胆固醇转本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.RNA分子，其在长度上包含15至35个碱基，其包含与5
’
GUUUAAUAAAGAUUCACCAAGUUUCACGCAAA 3
’
或5
’
UGGACCCUAGUUUAAUAAAGAUUCACCAAG 3
’
基本上互补的互补区域。2.权利要求1所述的RNA分子，其包含与5
’
GAUUCACCAAGUUUA 3
’
、5
’
CAAGUUUCACGCAAA 3
’
和5
’
CCUAGUUUAAUAAAGAUUCA 3
’
中的一个或更多个基本上互补的互补区域。3.权利要求1或2所述的RNA分子，其中所述RNA分子包含单链(ss)RNA或双链(ds)RNA。4.权利要求3所述的dsRNA，其包含有义链和反义链，其中所述反义链包含与5
’
GUUUAAUAAAGAUUCACCAAGUUUCACGCAAA3
’
或5
’
UGGACCCUAGUUUAAUAAAGAUUCACCAAG3
’
基本上互补的互补区域。5.权利要求3或4所述的dsRNA分子，其中所述RNA分子在长度上包含15至25个碱基对。6.权利要求3至5中任一项所述的dsRNA，其中所述互补区域与5
’
GUUUAAUAAAGAUUCACCAAGUUUCACGCAAA 3
’
或5
’
UGGACCCUAGUUUAAUAAAGAUUCACCAAG3
’
中的至少10、11、12或13个连续核苷酸互补。7.权利要求3至6中任一项所述的dsRNA，其中所述互补区域含有不超过3个与5
’
GUUUAAUAAAGAUUCACCAAGUUUCACGCAAA 3
’
或5
’
UGGACCCUAGUUUAAUAAAGAUUCACCAAG3
’
的错配。8.权利要求3至7中任一项所述的dsRNA，其中所述互补区域与5
’
GUUUAAUAAAGAUUCACCAAGUUUCACGCAAA 3
’
或5
’
UGGACCCUAGUUUAAUAAAGAUUCACCAAG 3
’
完全互补。9.权利要求3至9中任一项所述的dsRNA，其中所述dsRNA是平末端的。10.权利要求3至9中任一项所述的dsRNA，其中所述dsRNA包含至少一个单链核苷酸突出端。11.权利要求3至10中任一项所述的dsRNA，其中所述dsRNA包含天然存在的核苷酸。12.权利要求3至11中任一项所述的dsRNA，其中所述dsRNA包含至少一个经修饰核苷酸。13.权利要求12所述的dsRNA，其中所述经修饰核苷酸包括2
’‑
O
‑
甲基修饰的核苷酸、包含5
’‑
硫代磷酸酯基团的核苷酸或与胆固醇基衍生物或十二烷酸双癸酰胺基团连接的末端核苷酸。14.权利要求12所述的dsRNA，其中所述经修饰核苷酸包括2
’‑
脱氧
‑2’‑
氟修饰的核苷酸、2
’‑
脱氧
‑
修饰的核苷酸、锁核苷酸、无碱基核苷酸、2
’‑
氨基
‑
修饰的核苷酸、2
’‑
烷基
‑
修饰的核苷酸、吗啉代核苷酸、氨基磷酸酯或包含非天然碱基的核苷酸。15.权利要求3至14中任一项所述的dsRNA，其中所述dsRNA包含至少一个2
’‑
O
‑
甲基修饰的核苷酸和至少一个包含5
’
硫代磷酸酯基团的核苷酸。16.权利要求3至15中任一项所述的dsRNA，其中所述dsRNA至少80％经化学修饰。17.权利要求3至10和12至16中任一项所述的dsRNA，其中所述dsRNA完全经化学修饰。18.权利要求3至17中任一项所述的dsRNA，其中所述dsRNA包含胆固醇部分。19.权利要求1至18中任一项所述的RNA分子，其中所述RNA分子包含5
’
端、3
’
端并对靶标具有互补性，其中：(1)所述RNA分子包含交替的2
’‑
甲氧基
‑
核糖核苷酸和2
’‑
氟
‑
核糖核苷酸；(2)从5
’
端起第2位和第14位处的核苷酸不是2
’‑
甲氧基核糖核苷酸；(3)所述核苷酸通过磷酸二酯或硫代磷酸酯连接而相连；以及(4)从3
’
端起第1
‑
2至1
‑
7位处的核苷酸通过硫代磷酸酯连接而与相邻核苷酸相连。
20.权利要求3至18中任一项所述的dsRNA，所述dsRNA具有5
’
端、3
’
端且与靶标互补，并且包含第一寡核苷酸和第二寡核苷酸，其中：(1)所述第一寡核苷酸包含与5
’
GUUUAAUAAAGAUUCACCAAGUUUCACGCAAA 3
’
或5
’
UGGACCCUAGUUUAAUAAAGAUUCACCAAG3
’
基本上互补的序列；(2)所述第一寡核苷酸的一部分与所述第二寡核苷酸的一部分互补；(3)所述第二寡核苷酸包含交替的2
’‑
甲氧基
‑
核糖核苷酸和2
’‑
氟
‑
核糖核苷酸；(4)从所述第二寡核苷酸的3
’
端起第2位和第14位处的核苷酸为2
’‑
甲氧基
‑
核糖核苷酸；以及(5)所述第二寡核苷酸的核苷酸通过磷酸二酯或硫代磷酸酯连接而相连。21.权利要求1至18中任一项所述的RNA分子，其中所述RNA分子包含5
’
端、3
’
端并对靶标具有互补性，其中：(1)所述RNA分子包含三个连续2
’‑
氟
‑
核糖核苷酸的区域；(2)从5
’
端起第2位和第14位处的核苷酸不是2
’‑
甲氧基
‑
核糖核苷酸；(3)所述核苷酸通过磷酸二酯或硫代磷酸酯连接而相连；(4)从3
’
端起1
‑
2至1
‑
7位处的核苷酸通过硫代磷酸酯连接而与相邻核苷酸相连；以及(5)从5
’
端起1
‑
2位处的核苷酸通过硫代磷酸酯连接而彼此相连。22.权利要求3至17中任一项所述的dsRNA，所述dsRNA具有5
’
端、3
’
端且与靶标互补，并且包含第一寡核苷酸和第二寡核苷酸，其中：(1)所述第一寡核苷酸包含与5
’
GUUUAAUAAAGAUUCACCAAGUUUCACGCAAA 3
’
或5
’
UGGACCCUAGUUUAAUAAAGAUUCACCAAG3
’
基本上互补的序列；(2)所述第一寡核苷酸的一部分与所述第二寡核苷酸的一部分互补；(3)所述第二寡核苷酸包含三个连续2
’‑
甲氧基
‑
核糖核苷酸的区域；(4)从所述第二寡核苷酸的3
’
端起第2位和第14位处的核苷酸为2
’‑
甲氧基
‑
核糖核苷酸；以及(5)所述第二寡核苷酸的核苷酸通过磷酸二酯或硫代磷酸酯连接而相连。23.权利要求20或22所述的RNA，其中所述第二寡核苷酸在所述第二寡核苷酸的3
’
端处与疏水分子相连。24.权利要求20、22和23中任一项所述的RNA，其中所述第二寡核苷酸与所述疏水分子之间的连接包括聚乙二醇或三乙二醇。25.权利要求20和22至24中任一项所述的RNA，其中从第二寡核苷酸的3
’
端起的第1和2位处的核苷酸通过硫代磷酸酯连接而与相邻核苷酸相连。26.权利要求20和22至25中任一项所述的RNA，其中从第二寡核苷酸的3
’
端起的第1和2位处的核苷酸以及从第二寡核苷酸的5
’
端起的第1和2位处的核苷酸通过硫代磷酸酯连接与相邻核糖核苷酸相连。27.用于抑制载脂蛋白E(ApoE)基因在生物体中的表达的药物组合物，其包含权利要求1至26中任一项所述的RNA以及可药用载体。28.权利要求27所述的药物组合物，其中所述dsRNA将所述ApoE基因的表达抑制至少50％。29.权利要求27所述的药物组合物，其中所述dsRNA将所述ApoE基因的表达抑制至少
90％。30.用于抑制细胞中ApoE基因表达的方法，所述方法包括：(a)将权利要求3至18、20和22中任一项所述的双链核糖核酸(dsRNA)引入所述细胞中，以及(b)将步骤(a)中所产生的细胞维持足以获得所述ApoE基因的mRNA转录物的降解的时间，从而抑制所述ApoE基因在所述细胞中的表达。31.治疗或管理神经退行性疾病的方法，所述方法包括向需要这样的治疗或管理的患者施用治疗有效量的权利要求3至18、20和22中任一项的所述dsRNA。32.权利要求31所述的方法，其中将所述dsRNA施用于所述患者的脑。33.权利要求31所述的方法，其中通过脑室内(ICV)注射施用所述dsRNA。34.权利要求32或33所述的方法，其中施用所述dsRNA引起海马体中ApoE基因mRNA减少。35.权利要求31至34中任一项所述的方法，其中施用所述dsRNA引起脊髓中ApoE基因mRNA减少。36.权利要求31至35中任一项所述的方法，其中所述dsRNA将所述ApoE基因的表达抑制至少50％。37.权利要求31至36中任一项所述的方法，其中所述dsRNA将所述ApoE基因的表达抑制至少90％。38.用于抑制ApoE基因在细胞中的表达的载体，所述载体包含与核苷酸序列可操作地连接的调节序列，所述核苷酸序列编码与5
’
GUUUAAUAAAGAUUCACCAAGUUUCACGCAAA 3
’
或5
’
UGGACCCUAGUUUAAUAAAGAUUCACCAAG3
’
基本上互补的RNA分子，其中所述RNA分子在长度上包含10至35个碱基，并且其中所述RNA分子在与表达所述ApoE基因的细胞接触后将所述ApoE基因的表达抑制至少50％。39.权利要求38所述的载体，其中所述RNA分子将所述ApoE基因的表达抑制至少90％。40.权利要求38所述的载体，其中所述RNA分子包括ssRNA或dsRNA。41.权利要求40所述的载体，其中所述dsRNA包含有义链和反义链，其中所述反义链包含与5
’
GUUUAAUAAAGAUUCACCAAGUUUCACGCAAA 3
’
或5
’
UGGACCCUAGUUUAAUAAAGAUUCACCAAG 3
’
基本上互补的互补区域。42.细胞，其包含权利要求38所述的载体。43.RNA分子，其在长度上包含15至50个碱基，其包含与5
’
GUUUAAUAAAGAUUCACCAAGUUUCACGCAAA3或5
’
UGGACCCUAGUUUAAUAAAGAUUCACCAAG 3”基本上互补的互补区域，其中所述RNA分子靶向ApoE基因mRNA的开放阅读框(ORF)或3
’
非翻译区(UTR)。44.权利要求43所述的RNA分子，其中所述RNA分子包括ssRNA或dsRNA。45.权利要求43或44所述的dsRNA，其包含有义链和反义链，其中所述反义链包含与5
’
GUUUAAUAAAGAUUCACCAAGUUUCACGCAAA 3
’
或5
’
UGGACCCUAGUUUAAUAAAGAUUCACCAAG3
’
基本上互补的互补区域。46.二分支RNA化合物，其包含两个RNA分子，每个RNA分子在长度上包含15至50个碱基，所述二分支RNA化合物包含与ApoE mRNA基本上互补的互补区域，其中所述两个RNA分子通过一个或更多个独立地选自接头、间隔子和分支点的部分彼此连接。
47.权利要求46所述的二分支RNA化合物，其包含与5
’
GUUUAAUAAAGAUUCACCAAGUUUCACGCAAA 3
’
或5
’
UGGACCCUAGUUUAAUAAAGAUUCACCAAG3
’
基本上互补的互补区域。48.权利要求46或47所述的二分支RNA化合物，其包含与5
’
GAUUCACCAAGUUUA3
’
、5
’
CAAGUUUCACGCAAA3
’
和5
’
CCUAGUUUAAUAAAGAUUCA3
’
中的一个或更多个基本上互补的互补区域。49.权利要求46至48中任一项所述的二分支RNA化合物，其中所述RNA分子包括ssRNA或dsRNA。50.权利要求46至49中任一项所述的二分支RNA化合物，其中所述RNA分子包含反义分子或间隔聚体分子。51.权利要求50所述的二分支RNA化合物，其中所述反义分子包括反义寡核苷酸。52.权利要求50或51所述的二分支RNA化合物，其中所述反义分子增强所述互补区域的降解。53.权利要求52所述的二分支RNA化合物，其中所述降解包括核酸酶降解。54.权利要求53所述的二分支RNA化合物，其中所述核酸酶降解由RNA酶H介导。55.分支寡核苷酸化合物，其包含两个或更多个核酸，其中：每个核酸在长度上包含15至50个碱基，每个核酸独立地包含与5
’
GUUUAAUAAAGAUUCACCAAGUUUCACGCAAA 3
’
或5
’
UGGACCCUAGUUUAAUAAAGAUUCACCAAG3
’
基本上互补的互补区域，以及所述两个或更多个核酸彼此共价连接，任选地通过选自接头、间隔子和分支点的一个或更多个部分共价连接。56.权利要求55所述的分支寡核苷酸化合物，其中每个核酸独立地包含与5
’
GAUUCACCAAGUUUA 3
’
、5
’
CAAGUUUCACGCAAA 3
’
和5
’
CCUAGUUUAAUAAAGAUUCA3
’
中的一个或更多个基本上互补的互补区域。57.权利要求55或56所述的分支寡核苷酸化合物，其中每个核酸在长度上包含15至25个碱基对。58.权利要求55至57中任一项所述的分支寡核苷酸化合物，其中每个核酸包含单链(ss)RNA或双链(ds)RNA。59.权利要求55至58中任一项所述的分支寡核苷酸化合物，其中每个核酸包含含有有义链和反义链的dsRNA，其中每条反义链独立地包含与5
’
GUUUAAUAAAGAUUCACCAAGUUUCACGCAAA3
’
或5
’
UGGACCCUAGUUUAAUAAAGAUUCACCAAG 3
’
基本上互补的互补区域。60.权利要求55至59中任一项所述的分支寡核苷酸化合物，其中每个互补区域独立地与5
’
GUUUAAUAAAGAUUCACCAAGUUUCACGCAAA3
’
或5
’
UGGACCCUAGUUUAAUAAAGAUUCA...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿纳斯塔西娅，
申请(专利权)人：马萨诸塞大学，
类型：发明
国别省市：