一种重组I型人源化胶原蛋白C1L4T及其制备方法和用途技术

技术编号:31378567 阅读:21 留言:0更新日期:2021-12-15 11:20
本发明专利技术公开了一种重组I型人源化胶原蛋白C1L4T及其制备方法和用途。本发明专利技术提供的重组I型人源化胶原蛋白C1L4T包含以SEQ ID No.3所示的序列,所述重组I型人源化胶原蛋白C1L4T任选地包含以SEQ ID No.2所示的序列,优选地,以SEQ ID No.2所示的序列和以SEQ ID No.3所示的序列直接相连。本发明专利技术所制备的重组I型人源化胶原蛋白C1L4T相比I型胶原蛋白本身分子量较小,同时具有更加良好的细胞黏附效果,此外其氨基酸序列中部分来源于天然胶原蛋白氨基酸序列,生物相容性较好,制备方法简单,在低成本下即可获得较高产量的胶原蛋白。本下即可获得较高产量的胶原蛋白。本下即可获得较高产量的胶原蛋白。

【技术实现步骤摘要】
ID No.4所示的氨基酸序列;保留以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的细胞黏附效果的与以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列具有不小于80%的同一性的氨基酸序列;保留以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的细胞黏附效果的在以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列中添加、取代、缺失或插入1个或多个氨基酸残基的氨基酸序列;保留以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的细胞黏附效果的由核苷酸序列编码的氨基酸序列,所述核苷酸序列与编码以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的多核苷酸序列在严格条件下杂交,所述严格条件是中等至非常高等严格条件。
[0013]第二方面,本专利技术提供了多核苷酸,其编码上述重组I型人源化胶原蛋白C1L4T。
[0014]第三方面,本专利技术提供了表达载体,其包含上述第二方面所提供的多核苷酸。
[0015]第四方面,本专利技术提供了宿主细胞,其包含上述第三方面所提供的表达载体。
[0016]第五方面,本专利技术提供了上述重组I型人源化胶原蛋白C1L4T的生产方法,其包括以下步骤:

在培养基中培养上述第四方面提供的宿主细胞并生产蛋白;

收获并纯化所述蛋白,优选用Ni柱和/或离子交换层析纯化所述蛋白;

任选地对所述蛋白进行酶切,优选用PPase蛋白酶酶切所述蛋白。
[0017]第六方面,本专利技术提供了上述重组I型人源化胶原蛋白C1L4T在制备产品中的用途,其中所述产品优选是组织工程产品、化妆品、保健品或药物。
[0018]第七方面,本专利技术提供了包含上述重组I型人源化胶原蛋白C1L4T的产品,其中所述产品优选是组织工程产品、化妆品、保健品或药物。
[0019]第八方面,本专利技术提供了上述重组I型人源化胶原蛋白C1L4T在制备具有促进细胞黏附作用的产品中的用途。
[0020]专利技术的效果
[0021]通过上述技术方案的实施,本专利技术所制备的重组I型人源化胶原蛋白C1L4T相比I型胶原蛋白本身分子量较小,同时具有更加良好的细胞黏附效果,此外其氨基酸序列中部分来源于天然胶原蛋白氨基酸序列,生物相容性较好,制备方法简单,在低成本下即可获得较高产量的胶原蛋白。
附图说明
[0022]图1为重组表达质粒pET32a

C1L4T的图谱,其中C1L4T对应的氨基酸序列为SEQ ID No.4。
[0023]图2为蛋白C1L4T诱导表达及纯化后的凝胶电泳图,第1泳道为分子量Marker,第2泳道为用Ni柱提纯后的C1L4T蛋白,第3泳道为PPase酶切后的C1L4T蛋白。
[0024]图3为商品化的人胶原蛋白和蛋白C1L4T的细胞黏附活性检测结果。
具体实施方式
[0025]以下对本专利技术的实施方式进行说明,但本专利技术不限定于此。
[0026]本专利技术中,使用“可以”表示的含义包括了进行某种处理以及不进行某种处理两方面的含义。
[0027]在本专利技术中,“任选的”或“任选地”是指接下来描述的事件或情况可发生或可不发生,并且该描述包括该事件发生的情况和该事件不发生的情况。
[0028]本专利技术中,“组织工程产品”是指用于组织工程的产品。组织工程是一门以细胞生物学和材料科学相结合,进行体外或体内构建组织或器官的新兴学科。
[0029]本专利技术中,“医疗器械”是指直接或者间接用于人体的仪器、设备、器具、体外诊断试剂及校准物、材料以及其他类似或者相关的物品。
[0030]在本专利技术中,“同一性”是指所检测的序列与目标序列之间相同的碱基或氨基酸占整个序列的比例。在氨基酸序列比对中相似性还包括,除了完全相同的残基外,在对应位置的两个残基是否具有相似的特性,如侧链基团的大小、电荷性、亲疏水性等。
[0031]在本专利技术中,氨基酸“添加”指在氨基酸序列的C端或N端添加氨基酸,只要本专利技术的蛋白保留原本的氨基酸序列的细胞黏附效果。
[0032]在本专利技术中,氨基酸“缺失”指可以从氨基酸序列中删除1、2或3个以上氨基酸,只要本专利技术的蛋白保留原本的氨基酸序列的细胞黏附效果。
[0033]在本专利技术中,氨基酸“插入”指在氨基酸序列中的适当位置插入氨基酸残基,插入的氨基酸残基也可以全部或部分彼此相邻,或插入的氨基酸之间都不彼此相邻,只要本专利技术的蛋白保留原本的氨基酸序列的细胞黏附效果。
[0034]在本专利技术中,氨基酸“取代”指在氨基酸序列中的某个位置的某个氨基酸残基被其他氨基酸残基替代,只要本专利技术的蛋白保留原本的氨基酸序列的细胞黏附效果;其中,“取代”可以是保守氨基酸取代,指与原本的氨基酸序列相比,有3个,更佳地2个氨基酸或1个氨基酸被性质相似或相近的氨基酸所替换而形成肽。这些保守性变异肽可以根据下表进行氨基酸替换而产生。
[0035]最初的残基代表性的取代优选的取代Ala(A)Val;Leu;IleValArg(R)Lys;Gln;AsnLysAsn(N)Gln;His;Lys;ArgGlnAsp(D)GluGluCys(C)SerSerGln(Q)AsnAsnGlu(E)AspAspGly(G)Pro;AlaAlaHis(H)Asn;Gln;Lys;ArgArgIle(I)Leu;Val;Met;Ala;PheLeuLeu(L)Ile;Val;Met;Ala;PheIleLys(K)Arg;Gln;AsnArgMet(M)Leu;Phe;IleLeuPhe(F)Leu;Val;Ile;Ala;TyrLeuPro(P)AlaAlaSer(S)ThrThrThr(T)SerSerTrp(W)Tyr;PheTyrTyr(Y)Trp;Phe;Thr;SerPhe
Val(V)Ile;Leu;Met;Phe;AlaLeu
[0036]本专利技术中,“中等至非常高等严格条件”包括“中等严格条件”,“中

高严格条件”,“高严格条件”或“非常高严格条件”,其描述了核酸杂交和洗涤的条件。进行杂交反应的指导参见Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons,N.Y.(1989),6.3.1

6.3.6,其通过引用并入本文。在该文献中描述了含水的和非含水的方法,且可以使用任一种。例如,具体的杂交条件如下:(1)低严格性杂交条件在6
×
氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中,在约45℃,然后在至少50℃,在0.2
×
SSC,0.1%SDS中洗涤2次(对于低严格性条件,可以将洗涤温度升高到55℃);(2)中等严格性杂交条件在6
×
SSC,在约45℃,然后在60℃,在0.2
×
SSC,0.1%SDS中洗涤1次或多次;(3)高严格性杂交条件在6
×
SSC,在约45℃,然后在65℃,在0.2
×
SSC,0.1%SDS中洗涤1次或多次且优选;(4)非常高的严格性杂交条件是0.5M磷酸本文档来自技高网
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组I型人源化胶原蛋白C1L4T,其中,所述重组I型人源化胶原蛋白C1L4T包含以SEQ ID No.3所示的序列。2.根据权利要求1所述的重组I型人源化胶原蛋白C1L4T,其特征在于,所述重组I型人源化胶原蛋白C1L4T任选地包含以SEQ ID No.2所示的序列;优选地,以SEQ ID No.2所示的序列和以SEQ ID No.3所示的序列直接相连。3.根据权利要求1或2所述的重组I型人源化胶原蛋白C1L4T,其特征在于,所述重组I型人源化胶原蛋白C1L4T包含以下序列中的至少一种:以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列;保留以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的细胞黏附效果的与以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列具有不小于80%的同一性的氨基酸序列;保留以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的细胞黏附效果的在以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列中添加、取代、缺失或插入1个或多个氨基酸残基的氨基酸序列;保留以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的细胞黏附效果的由核苷酸序列编码的氨基酸序列,所述核苷酸序列与编码以SEQ ID No.4所示的氨基酸序列的多核苷酸序列在...

【专利技术属性】
技术研发人员:杨霞武庚风张永健
申请(专利权)人:山西锦波生物医药股份有限公司
类型:发明
国别省市:

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