一种中性粒细胞胞外诱捕网提取和定量的方法技术

本发明专利技术涉及动物细胞成分提取和定量技术领域，具体涉及一种中性粒细胞胞外诱捕网提取和定量的方法。所述方法包括以下步骤：S1.中性粒细胞的提取；S2.中性粒细胞的培养；S3.NETs的诱导；S4.NETs的收集；S5.NETs的定量。本发明专利技术方法以较低的诱导物Ionomycin浓度和较短的诱导时间，能快速、简便、稳定诱导提取NETs，采用蛋白核酸分析仪即可对NETs中的核酸和蛋白成分进行定量分析。本发明专利技术方法在建立NETs快速检测方法或试剂盒、筛选促进或抑制NETs相关药物或针对性治疗药物的等相关研究中十分重要，在生物医学检测领域也具有显著的重要意义。生物医学检测领域也具有显著的重要意义。生物医学检测领域也具有显著的重要意义。

【技术实现步骤摘要】
一种中性粒细胞胞外诱捕网提取和定量的方法


[0001]本专利技术涉及动物细胞成分提取和定量
，具体涉及一种中性粒细胞胞外诱捕网提取和定量的方法。

技术介绍

[0002]中性粒细胞是人体中含量最为丰富的免疫细胞，在感染性疾病、肿瘤和自身免疫性疾病中发挥了重要作用。近年来研究发现，中性粒细胞除了具有经典的趋化、吞噬、脱颗粒以及呼吸爆发功能外，中性粒细胞还可以生成中性粒细胞胞外诱捕网(Neutrophil extracellular traps，NETs)。NETs是指中性粒细胞收到特定刺激后染色质膨胀，DNA从胞内释放至胞外所形成的网状结构，该网状结构中还包含了组蛋白、髓过氧化物酶和中性粒细胞弹性蛋白酶等颗粒蛋白。NETs可能参与了一系列的生理和病理学过程调控，其在感染、自身免疫性疾病、肿瘤及血栓形成等方面可能存在重要作用，对其进行研究可能发现新的致病机制，寻找到新的治疗途径。因此，开发一种能稳定提取NETs的方法对于临床研究具有重要意义。
[0003]传统的NETs提取方法是使用刺激物诱导中性粒细胞生成NETs，而后直接将细胞培养液本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种中性粒细胞胞外诱捕网提取和定量的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：S1.中性粒细胞的提取：取受试动物骨髓组织碾碎，用PBS冲洗后于600
‑
800
×
g离心5
‑
7min，1
‑
2mL PBS重悬骨髓细胞，得细胞悬液；向离心管中依次缓慢加入2
‑
4mL 78％Percoll、2
‑
4mL 69％Percoll、2
‑
4mL 52％Percoll和细胞悬液，于1500
‑
1700
×
g室温下梯度密度离心30
‑
35min；取出78％Percoll和69％Percoll中间的细胞层，加入PBS冲洗，于600
‑
800
×
g室温离心5
‑
7min后去除上清液；用3
‑
5mL红细胞裂解液重悬细胞，于冰上裂解3
‑
5分钟，吹打细胞悬液3
‑
5次，加入10
‑
12mL PBS停止裂解，于600
‑
800
×
g室温离心5
‑
7min后弃去上清；S2.中性粒细胞的培养：采用含10％FBS的RPMI1640溶液作为培养基重悬细胞，将受试动物中性粒细胞接种于多聚赖氨酸包被的培养皿中进行培养；S3.NETs的诱导：采用1
‑
3μmol/L Ionomycin刺激中性粒细胞6
‑
8小时，诱导NETs生成；S4.NETs的收集：吸除上清后加入含10％FBS的RPMI1640培养基反复冲洗培养皿底5
‑
7次，收集冲洗液；将冲洗液于1000
‑
1200
×
...

【专利技术属性】
技术研发人员：王旭，黄雨朦，姬倩，李荣坤，袁啸，戴春华，
申请(专利权)人：江苏大学附属医院，
类型：发明
国别省市：