一种规模化制备鸡胚成纤维细胞的方法技术

本发明专利技术涉及一种规模化制备鸡胚成纤维细胞的方法。包括以下步骤：(1)挑选鸡胚并进行初步消毒；(2)对鸡胚进行再次消毒；(3)取鸡胚；(4)处理鸡胚；(5)清洗鸡胚；(6)消化鸡胚；(7)组织细胞离心；(8)组织细胞重悬；(9)组织细胞过滤；(10)分装；(11)细胞培养。本发明专利技术提供了一种规模化制备鸡胚成纤维细胞的方法，与现有的制备方法相比，本制备方法实现了对鸡胚成纤维细胞的无菌制备、提升规模效率制备以及降低成本制备，实现了低制备成本下的高效、规模化制备，保证了鸡胚成纤维细胞的质量，解决了生物制品规模化生产的瓶颈问题，满足工业化生产对鸡胚成纤维细胞的需要。成纤维细胞的需要。成纤维细胞的需要。

【技术实现步骤摘要】
一种规模化制备鸡胚成纤维细胞的方法


[0001]本专利技术属于兽用生物制品
，尤其涉及一种规模化制备鸡胚成纤维细胞的方法。

技术介绍

[0002]鸡胚成纤维细胞是生物制品生产和检验的常用原代细胞，目前鸡胚成纤维细胞的培养工艺有多种方式：有进行实验室试验的方瓶培养，有进行疫苗生产的转瓶培养、细胞工厂培养以及生物反应器培养，但无论何种培养方法，原代成纤维细胞的制备都是不可逾越的一步。其中，方瓶培养是指在方瓶中进行细胞培养，方瓶(T
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flask)是动物细胞培养中使用的一种专用瓶子。使用时平放，上下平面平行，侧面开有带螺纹的口，细胞接种后可以贴壁于瓶内下表面。转瓶培养是指采用回转的转瓶进行细胞培养，转瓶固定在支架上，倾斜度为5～10
°
，或将转瓶放在一排排转轴之间，使转瓶随着转轴以每小时6～12转缓慢转动。细胞贴附于玻璃壁四周，细胞贴壁和生长只有一个表面面积，经转动一方面使培养液流动，利于细胞吸收营养和进行代谢，一方面使细胞有机会接触气体，有利于细胞呼吸和发生氧化还原作用，有利于细胞生长繁殖。细胞工厂培养是指本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种规模化制备鸡胚成纤维细胞的方法，其特征是：包括以下步骤，(1)挑选鸡胚并进行初步消毒：在鸡胚前孵化室通过照胚挑选发育良好的多枚SPF鸡胚，将鸡胚送入消毒室，使用消毒液喷雾消毒鸡胚表面，之后将鸡胚转移至温室内；(2)对鸡胚进行再次消毒：将鸡胚从温室中取出，用刷子蘸取碘酒并对鸡胚上部进行消毒，待碘酒晾干后，使用无水乙醇进行鸡胚脱碘；(3)取鸡胚：打开鸡胚气室部位，将鸡胚取出，放入平皿中；(4)处理鸡胚：采用工具夹取并去除鸡胚的眼睛；(5)清洗鸡胚：将鸡胚加入清洗器中，将汉克氏液注入清洗器中，摇晃鸡胚清洗器使鸡胚与汉克氏液充分混合，之后将清洗器中的汉克氏液吸出，如此重复清洗鸡胚多次；(6)消化鸡胚：把清洗后的鸡胚倒入磁力消化瓶中，高转速搅拌令消化瓶中的鸡胚全部打碎，成为糊状悬浮组织，之后调至低转速搅拌并加入胰酶，在胰酶的作用下，充分消化鸡胚组织；(7)组织细胞离心：消化好的鸡胚悬浮组织，在无菌条件下向消化液中加入血清以中和胰酶，采用离心机进行离心处理；(8)组织细胞重悬：弃去离心后的上层清液，向离心管中加入细胞生长液并摇晃离心管，使组织细胞脱离离心管管壁，之后加入混合瓶中并振摇混合瓶，使组织细胞成为悬浮液；(9)组织细胞过滤：将组织细胞重悬液吸入带有纱布囊式过滤装置的分装罐中，细胞悬液通过纱布囊式过滤装置，使得细胞悬液中的未消化鸡胚组织得到过滤截留，之后向分装罐内补加细胞培养液；(10)分装：将分装罐内的细胞悬浮液分装至多个细胞工厂；(11)细胞培养：将细胞工厂放入温室中静止培养，得到单层鸡胚成纤维细胞。2.如权利要求1所述的规模化制备鸡胚成纤维细胞的方法，其特征是：步骤(1)中，选取的SPF鸡胚为9日龄，温室内的室温为38℃。3.如权利要求2所述的规模化制备鸡胚成纤维细胞的方法，其特征是：步骤(2)中，从温室内取出鸡胚的时间为...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔松奇，魏文江，田春利，姚沾沾，余海涛，张丹丹，李娥，张娜，李晓静，
申请(专利权)人：豪威生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：