基因递送组合物以及西地那非在提高目的基因表达中的应用制造技术

本发明专利技术涉及基因递送组合物、包含该基因递送组合物的药物、西地那非在提高重组AAV载体介导的目的基因表达中的应用，以及西地那非在降低AAV载体的中和抗体中的应用。西地那非的应用可以提高AAV载体在基因治疗中的安全性和有效性。有效性。有效性。

【技术实现步骤摘要】
基因递送组合物以及西地那非在提高目的基因表达中的应用


[0001]本公开涉及基因递送组合物、包含该基因递送组合物的药物、西地那非在提高重组AAV载体介导的目的基因表达中的应用以及西地那非在降低AAV载体的中和抗体中的应用。

技术介绍

[0002]腺相关病毒(Adeno
‑
associated virus，AAV)技术是目前广泛应用于基因治疗领域的重要技术之一。AAV病毒具有低致病性、高效的长期基因表达、易于基因操作等优点。然而，AAV载体在应用方面也存在一定的限制。利用基因疗法治疗疾病(如杜氏肌营养不良症(DMD))时，有时需要通过循环系统全身注射给予高剂量的AAV载体，才能够达到治疗效果。此外，利用AAV9载体治疗脑部疾病时也需要很高的剂量才能透过血脑屏障，进而感染靶组织并递送表达正常蛋白的基因。然而，临床数据显示，高剂量的AAV载体会引起较重的免疫反应，导致不必要的副作用。高剂量的AAV载体一方面会引起肝脏的毒性反应，另一方面由于产生中和抗体会降低基因治疗的效果。
[0003]因此，期望增加AAV介导的基因的蛋白表达，从而可以在不显著降低目的基因表达的情况下实现病毒载体剂量的降低，进而减轻基因治疗中因高剂量AAV载体而引起的不良反应。

技术实现思路

[0004]本专利技术人出人意料地发现，西地那非(一种5型磷酸二酯酶抑制剂)不仅可以提高重组AAV载体介导的目的基因的表达，还可以降低AAV载体的中和抗体。
[0005]因此，在第一方面，本公开提供一种基因递送组合物，其包含西地那非和重组腺相关病毒(AAV)载体，该重组AAV载体包含AAV衣壳蛋白和目的基因。
[0006]在一个实施方式中，目的基因编码治疗性蛋白质或非治疗性蛋白质。
[0007]在一个优选实施方式中，治疗性蛋白质包括在受试者体内具有治疗疾病作用的蛋白质，疾病包括：癌症、自身免疫性疾病、暴露于感染性因子导致的疾病以及遗传性疾病。
[0008]在一个优选实施方式中，非治疗性蛋白质包括在受试者体内具有除治疗疾病之外的有益作用的蛋白质，例如具有营养强化或美容功效的蛋白质。
[0009]在一个实施方式中，AAV衣壳蛋白为天然AAV衣壳蛋白或人工改造的AAV衣壳蛋白。在一个优选实施方式中，AAV选自：AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11，AAV12、AAV
‑
DJ、AAV
‑
DJ8、AAV
‑
DJ9、AAVrh8、AAVrh8R和AAVrh10，更优选为AAV9。
[0010]在一个实施方式中，基因递送组合物包含1
×
109至1
×
10
15
vg的重组AAV载体和5μg至100mg的西地那非。在一个优选实施方式中，基因递送组合物包含1
×
10
12
至2
×
10
13
vg的重组AAV载体和1mg至50mg的西地那非。
[0011]在第二方面，本公开提供用第一方面所述的基因递送组合物转染或转导的分离的
宿主细胞。
[0012]在第三方面，本公开提供一种药物，其包含根据第一方面所述的基因递送组合物和赋形剂。
[0013]在一个实施方式中，赋形剂包括多元醇、糖、缓冲剂、防腐剂和无机盐中的一种以上。
[0014]在一个实施方式中，药物为注射剂如注射液和注射用无菌粉末的形式
[0015]在一个实施方式中，药物通过全身途径或局部途径施用，例如静脉内施用、肌内施用、皮下施用、经口施用、局部接触、腹膜内施用和病灶内施用。
[0016]在第四方面，本公开提供西地那非在提高重组AAV载体介导的目的基因表达中的应用，其中，所述重组AAV载体包含AAV衣壳蛋白和目的基因；所述AAV衣壳蛋白为天然AAV衣壳蛋白或人工改造的AAV衣壳蛋白，所述目的基因编码治疗性蛋白质或非治疗性蛋白质。
[0017]在第五方面，本公开提供一种提高重组AAV载体介导的目的基因表达的方法，包括：向有需要的受试者施用包含目的基因的重组AAV载体；以及，向所述受试者施用西地那非，所述目的基因编码治疗性蛋白质或非治疗性蛋白质。
[0018]在一个优选实施方式中，向所述受试者施用1
×
10
11
至2
×
10
14
vg/kg的重组AAV载体。在一个更优选实施方式中，向所述受试者施用1
×
10
12
至2
×
10
14
vg/kg、优选5
×
10
12
至2
×
10
14
vg/kg、更优选5
×
10
12
至5
×
10
13
vg/kg，更优选1
×
10
13
vg/kg至5
×
10
13
vg/kg，特别优选3
×
10
13
vg/kg至5
×
10
13
vg/kg的重组AAV载体。
[0019]在一个优选实施方式中，向所述受试者施用5至50mg/kg的西地那非。在一个更优选实施方式中，向所述受试者施用10至50mg/kg、优选20至50mg/kg、更优选30至50mg/kg，特别优选40至50mg/kg的西地那非。
[0020]在第六方面，本公开提供西地那非在降低AAV载体的中和抗体中的应用。
[0021]在一个优选实施方式中，AAV载体为重组AAV载体。
[0022]在一个实施方式中，重组AAV载体包含目的基因，所述目的基因编码治疗性蛋白质或非治疗性蛋白质。
[0023]在第七方面，本公开提供一种降低AAV载体的中和抗体的方法，包括：向有需要的受试者施用AAV载体；以及，向所述受试者施用西地那非。
[0024]在一个优选实施方式中，AAV载体为重组AAV载体。
[0025]在一个实施方式中，重组AAV载体包含目的基因，所述目的基因编码治疗性蛋白质或非治疗性蛋白质。
[0026]在一个优选实施方式中，向所述受试者施用1
×
10
11
至2
×
10
14
vg/kg的重组AAV载体。在一个更优选实施方式中，向所述受试者施用1
×
10
12
至2
×
10
14
vg/kg、优选5
×
10
12
至2
×
10
14
vg/kg、更优选5
×
10
12
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.基因递送组合物，其包含：西地那非，和重组腺相关病毒(AAV)载体，其中，所述重组AAV载体包含AAV衣壳蛋白和目的基因。2.根据权利要求1所述的基因递送组合物，其中，所述目的基因编码治疗性蛋白质或非治疗性蛋白质，所述治疗性蛋白质包括在受试者体内具有治疗疾病作用的蛋白质，所述疾病包括：癌症、自身免疫性疾病、暴露于感染性因子导致的疾病以及遗传性疾病；所述非治疗性蛋白质包括在受试者体内具有除治疗疾病之外的有益作用的蛋白质，例如具有营养强化或美容功效的蛋白质。3.根据权利要求1或2所述的基因递送组合物，其中，所述AAV衣壳蛋白为天然AAV衣壳蛋白或人工改造的AAV衣壳蛋白；优选地，所述AAV选自：AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11，AAV12、AAV
‑
DJ、AAV
‑
DJ8、AAV
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DJ9、AAVrh8、AAVrh8R和AAVrh10，更优选为AAV9。4.根据权利要求1至3中任一项所述的基因递送组合物，其中，所述基因递送组合物包含1
×
109至1
×
10
15
vg的重组AAV载体和5μg至100mg的西地那非，优选1
×
10
12
至2
×
10
13
vg的重组AAV载体和1mg至50mg的西地那非。5.用权利要求1至4中任一项所述的基因递送组合物转染或转导的分离的宿主细胞。6.药物，其包含权利要求1至4中任一项所述的基因递送组合物和赋形剂，所述赋形剂包括多元醇、糖、缓冲剂、防...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴侠，周凯艺，肖啸，袁梦，
申请(专利权)人：华东理工大学，
类型：发明
国别省市：