一种ASB17在制备TRAF6相关炎症性疾病药物中的用途制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，公开了一种ASB17在制备TRAF6相关炎症性疾病药物中的用途，所述ASB17的Human ASB17Sequence.txt序列如SEQID NO：1所示，所述ASB17的Mouse ASB17Sequence.txt序列如SEQ ID NO：2所示；所述验证ASB17制备治疗TRAF6相关炎症性疾病药物的方法包括：小鼠原代细胞BMDCs和BMDMs分离；蛋白质免疫印迹、免疫共沉淀以及免疫荧光；蛋白质稳定性检测及泛素化实验。本发明专利技术通过研究推测，ASB17和TRAF6相互作用，能够抑制TRAF6K48泛素化和稳定TRAF6，促进TRAF6介导的炎症反应。炎症反应。炎症反应。

【技术实现步骤摘要】
一种ASB17在制备TRAF6相关炎症性疾病药物中的用途


[0001]本专利技术属于生物医药
，尤其涉及一种ASB17在制备TRAF6相关炎症性疾病药物中的用途。

技术介绍

[0002]目前，树突状细胞(DCs)是抵抗病原体必不可少的，但也可能有助于免疫病理。它们连接先天性和获得性免疫反应，对宿主防御入侵病原体发挥着必不可少的作用。I型常规DCs(cDC1s)和cDC2s分别以BATF3/IRF
‑
8和IRF4依赖的方式从共同的DCs前体发育而来，而浆细胞样DCs(pDCs)可能来自共同的DCs和共同的淋巴祖细胞。树突状细胞对病原体的检测主要由模式识别受体 (PRRs)介导，PRRs对树突状细胞的激活和随后的免疫反应至关重要。PRRs 中有TLRs，由人类中的10个和小鼠中的12个成员组成。有趣的是，仅在小鼠中表达的TLR11和TLR12很少感受到病原体相关的分子模式分子(PAMP)。相反，TLR4在小鼠和人类的许多细胞类型中表达，包括cDC1s、cDC2s和pDCs，并在革兰氏阴性细菌脂多糖(LPS)参与后诱导NF...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种ASB17在制备TRAF6相关炎症性疾病药物中的用途。2.如权利要求1所述的ASB17在制备TRAF6相关炎症性疾病药物中的用途，其特征在于，所述ASB17的Human ASB17 Sequence.txt序列如SEQ ID NO：1所示，所述ASB17的Mouse ASB17 Sequence.txt序列如SEQ ID NO：2所示。3.一种应用如权利要求1～2任意一项所述的ASB17在制备TRAF6相关炎症性疾病药物中的用途的验证ASB17制备治疗TRAF6相关炎症性疾病药物的方法，其特征在于，所述验证ASB17制备治疗TRAF6相关炎症性疾病药物的方法包括以下步骤：步骤一，小鼠原代细胞BMDCs和BMDMs分离；步骤二，蛋白质免疫印迹、免疫共沉淀以及免疫荧光；步骤三，蛋白质稳定性检测及泛素化实验。4.如权利要求3所述的验证ASB17制备治疗TRAF6相关炎症性疾病药物的方法，其特征在于，步骤一中，所述小鼠原代细胞BMDCs和BMDMs分离，包括：(1)分离小鼠骨髓来源树突状细胞BMDCs准备6到8周龄的野生小鼠和ASB17
‑
/
‑
小鼠，无菌条件下，取出所有股骨和胫骨，在70％酒精的中浸泡5min，PBS洗2次；用注射器吸取PBS冲洗骨髓至培养皿中，至骨完全变为白色；细胞悬液过滤，离心，RPMI 1640培养基(包含20ng/ml GM
‑
CSF)重悬，100mm细胞培养皿中培养；第3天，向培养皿中再加入10ml RPMI 1640培养基；第6天和第8天，培养液离心后用完全培养液重悬细胞沉淀，随后铺至原细胞皿；第10天得到BMDCs；(2)分离小鼠骨髓来源巨噬细胞BMDMs准备6到8周龄的野生小鼠和ASB17
‑
/
‑
小鼠，无菌条件下，取出所有股骨和胫骨并在70％酒精的中浸泡5min，PBS洗2次；用注射器反复冲洗出骨髓至培养皿中，至骨变白；悬液过滤，再离心，用红细胞裂解液除去红细胞；向培养皿中加入RPMI 1640培养基；第3天和第5天换为新鲜RPMI 1640培养基，第6天即为BMDMs。5.如权利要求3所述的验证ASB17制备治疗TRAF6相关炎症性疾病药物的方法，其特征在于，步骤二中，所述蛋白质免疫印迹，包括：用裂解液处理细胞，并超声破碎后，再用Bradford法测定细胞蛋白的浓度；得到的细胞裂解液经过处理后，在8～12％的SDS
‑
PAGE胶中跑胶2h，SDS
‑
PAGE胶上跑开的蛋白质经转膜设备，经2h转到NC膜上；将NC膜用5％的脱脂牛奶封闭，经过一抗4℃孵育过夜和二抗室温孵育1h，再由化学显色液显色，最后通过化学发光仪观察目的蛋白条带；其中，所述脱脂牛奶由PBST配制。6.如权利要求3所述的验证ASB17制备治疗TRAF6相关炎症性疾病药物的方法，其特征在于，步骤二中，所述免疫共沉淀，包括：(1)转染后36～48h，收取细胞样品，用预冷的PBS润洗细胞1～2次，再用胰酶消化；随后用含有血清的培养基终止胰酶消化，1.5ml EP管收集细胞，低速离心后去掉上清，再用预冷的PBS吹洗细胞2次，最后得到细胞沉淀；(2)按照细胞量加入500～1000μl的RIPA裂解液以及蛋白酶抑制剂，在4℃冰箱中，旋转摇床上裂解细胞30min；裂解结束后，对剩余的细胞进行超声波破碎处理，随后4℃，转速12000rpm离心10min；(3)离心后，将上清分为两部分，其中100μl加入到新的1.5ml EP管中，随后和25μl的5
×
SDS Loading Buffer混匀，100℃加热10min，快速离心后放于
‑
20℃保存；剩余的上清900μl，将20μl用RIPA裂解液洗净后的Protein A/G珠子加入其中，并在4℃，旋转摇床上吸附2h；(4)吸附结束后，1000g离心，用移液枪将上清转移到新的1.5ml EP管中；将1μg免疫沉淀抗体加入到溶液内，4℃旋转摇床过夜12～14h；(5)第二天，将40μl用RIPA裂解液洗好的Protein A/G珠子加入溶液中，4℃旋转摇床吸附2h；(6)2h后，将所述EP管4℃，转速1...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴建国，杨戈，万品，潭秋萍，
申请(专利权)人：佛山病原微生物研究院，
类型：发明
国别省市：