一种胶原蛋白植入剂及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种胶原蛋白植入剂及其制备方法，涉及美容领域。所述的胶原蛋白植入剂，包括如下组分：胶原蛋白纤维和pH＝7的磷酸盐缓冲液。本发明专利技术还提供了胶原蛋白纤维的制备方法，采用本发明专利技术提供的方法得到的胶原分子自聚集后有形状分明的纤维结构，每条纤维暴露完全并相互交错形成纤维网，同时能清晰观测到胶原纤维的周期性横纹D带，能形成较好的纤维形态具有更高的分子规整度；胶原纤维粗细均匀，具有更好的弹性强度；另外，本申请为全球首款用跟腱胶原制作和可区块链安全溯源的材料来源，采用病毒灭活前处理技术和精准酶切去端肽技术，可完全去除潜在的过敏风险，制备的植入剂具有更自然塑形的填充效果和较长的体内降解周期。周期。周期。

【技术实现步骤摘要】
一种胶原蛋白植入剂及其制备方法


[0001]本专利技术涉及美容领域，具体地，本专利技术涉及一种胶原蛋白植入剂及其制备方法。

技术介绍

[0002]随着社会与经济的发展和人们生活水平的日渐提高，人们对自身形象的关注度与日俱增，如何保持面部年轻化成为现代人们关注的焦点之一，而皮肤填充剂是当下社会最受瞩目的恢复年轻态的技术。理想的软组织可注射植入剂应该具有原料易得及良好的生物相容性和稳定性，具备安全可靠、适应性强、创伤小且效果维持时间长、不需做过敏测试、无不良反应、操作方便且储存时间长等优点，而目前市场上的相关产品还不是最理想的可注射植入剂。
[0003]目前市场上可用于整形美容外科的可注射填充材料包括：胶原蛋白、透明质酸钠、羟基磷灰石、聚乳酸、A型肉毒素。这几类材料还可以与不可吸收的高分子材料(如聚甲基丙烯酸甲酯，简称“PMMA”)复合作为填充剂。
[0004](1)透明质酸
[0005]透明质酸及其衍生产品作为皮肤填充剂已大量应用于整形美容行业，目前国内市场共有不下30家制造商提供的数十个品牌的透明质酸注射产品，因此这也是目前市面上使用最广，最易获得的皮肤填充剂产品。但是在大量的临床使用中发现，反复注射透明质酸后，皮肤松陷不回弹，有颗粒感，且瘀斑、疼痛和治疗后肿胀的发生率比胶原更高。
[0006](2)羟基磷灰石和左旋聚乳酸
[0007]羟基磷灰石和左旋聚乳酸均用于修复深层缺陷，疗效可维持1
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2年。但羟基磷灰石多用于骨轮廓填充，且多与其它生物材料组成复合材料进行填充。左旋聚乳酸目前只被FDA批准使用于人类免疫缺陷病毒感染相关的面部脂肪萎缩。
[0008](3)A型肉毒素
[0009]A型肉毒素是肉毒杆菌在繁殖中分泌的一种有毒性的蛋白质，是一种神经毒素。最早临床主要是用于麻痹肌肉神经，治疗肌肉痉挛症，治疗效果良好，后来加拿大一位眼科教授偶然才发现可使眼部皱纹消失，于是开始用于美容注射，但是这种产品注射技术要求特别高，过量易导致中毒。
[0010](4)胶原蛋白填充剂
[0011]其中胶原蛋白是一类天然蛋白质，作为皮肤组织的主要组分，是纠正面部软组织缺陷的较为理想的材料。
[0012]以牛皮为原料的产品主要有Zyderm、Zyplast和长春博泰的肤美达，在注射前30天需进行皮试以防止患者出现过敏反应，并且产品的提取收率底、成本高，大大地局限了其大规模、高通量生产及市场应用。
[0013]以猪皮为原料的产品如双美胶原蛋白植入剂，是由猪皮纯化而成的I型胶原蛋白经过无菌操作方式分散于磷酸盐生理盐水缓冲液充填于无菌注射针筒中制成。该产品的缺点为猪源性胶原，存在猪口蹄疫、猪瘟和猪细小病毒等感染风险，如何有效地保证产品的安
全性是制约其发展的主要瓶颈。
[0014]人重组胶原蛋白是以大肠杆菌、酵母菌等作为基因工程载体，通过对发酵培养、诱导表达后的发酵液进行离心，对离心后的上清液进行浓缩、纯化，得到的一种类似于人体内胶原蛋白结构的类人胶原蛋白。缺点是其胶原蛋白的一级结构虽然与人体胶原蛋白、动物源性胶原蛋白的一级结构基本相似，即Gly
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X
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Y胶原肽链，但在基因表达过程中胶原的二级结构遭到破坏，不具有天然的胶原三股螺旋结构，其分子量为90KD左右，因此不具有填充作用。
[0015]如中国专利申请201710383159.X中公开了一种胶原蛋白植入剂，按照重量百分比计，包括：2
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8％的胶原蛋白，0.1
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0.5％的添加剂，和余量的磷酸生理缓冲液，其使用的胶原蛋白是采用微生物发酵法获得的重组人源胶原蛋白，由于在基因表达过程中胶原的二级结构遭到破坏，不具有天然的胶原三股螺旋结构，因此填充作用较差。
[0016]以上各种类型的美容植入剂产品均存在一定程度的缺陷，目前国家药监局对面部填充植入剂类产品的要求非常严格，如：要明确分子量大小，分子的空间结构、杂蛋白含量、病毒灭活及免疫原性的控制等，需满足的技术条件很高。
[0017]因此，需要提供一种安全有效的胶原蛋白植入剂及其制备方法。

技术实现思路

[0018]针对现有技术中存在的的不足，本专利技术旨在提供一种胶原蛋白植入剂及其制备方法。
[0019]其中，所述的胶原蛋白为从动物跟腱中提取的可注射到真皮深层以填补由于软组织缺损造成皮肤缺陷的胶原蛋白。
[0020]本专利技术提供的胶原蛋白保留了胶原的三股螺旋和三维立体结构和极高的天然活性成分，在保证填充效果的同时降低了在临床使用后可能存在的过敏反应。
[0021]其次，本专利技术提供的胶原蛋白植入剂注射到人体真皮深层后，极易与人体组织相融并刺激皮下产生大量的胶原蛋白，同时生成毛细血管网有效地改善面部微循环，最终达到皮肤的自然年轻状态。
[0022]为达到本专利技术的技术效果，本专利技术是通过以下技术方案来实现：
[0023]一方面，本专利技术提供了一种从动物跟腱中提取植入剂可用胶原蛋白纤维的方法，包括如下步骤：
[0024](1)动物跟腱的前处理
[0025]取一定量的动物跟腱在酸中浸泡，剔除跟腱中的筋膜并进行切片，用NaCl溶液浸泡、清洗，去除上清液并收集沉淀物A，备用。
[0026](2)酶解消化
[0027]将(1)中收集的沉淀物A捣碎溶解在酸溶液中，加入蛋白酶在进行酶解；得到酶解产物；调节pH为7
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10反应，然后离心沉淀，收集沉淀物B，备用。
[0028](3)助滤吸附
[0029]将(2)中收集的沉淀物B用酸溶解后，加入一定量的助滤剂搅拌后过滤，收集上清液，备用。
[0030](4)分离纯化
[0031]将步骤(3)中的上清液进行浓缩后，通过阳离子交换介质吸附胶原蛋白后再洗脱分离，最后得到洗脱液。
[0032](5)除菌过滤
[0033]将(4)中收集的洗脱液用超滤系统进行浓缩后，用0.22um的过滤膜除菌过滤，得到无菌可溶性胶原溶液；
[0034](6)胶原蛋白纤维的制备
[0035]向步骤(5)得到的可溶性胶原溶液中加0.1M
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1M的Na2HPO4调节pH为6
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9，静置过夜后，10000rpm/min
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15000rpm/min离心，弃去上清液并收集沉淀物，即得到胶原蛋白纤维。
[0036]上述步骤(1)中所述的动物跟腱包括但不限于牛跟腱、猪跟腱、马跟腱和羊跟腱中的一种或几种；优选为牛跟腱、马跟腱和羊跟腱中的一种或几种；再优选为牛跟腱。
[0037]上述步骤(1)中所述的酸包括但不限于冰醋酸、磷酸和盐酸中的一种或几种；优选为冰醋酸或/和盐酸。
[0038]上述步骤(1)中所述的酸的质量分数为1
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20％；优选为5
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15％；再优选为8
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12％；进一步优选为10
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胶原蛋白植入剂，其特征在于：包括如下组分：胶原蛋白纤维和pH＝7的磷酸盐缓冲液；所述的胶原蛋白纤维的浓度为
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
20
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65mg/ml；所述的磷酸盐缓冲液(pH＝7)，包括以下组分：氯化钠(NaCl)
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9mg/ml；磷酸氢二钠(Na2HPO4×
2H2O)0.05
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0.5mg/ml；注射用水
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余量。2.根据权利要求1所述的胶原蛋白植入剂，其特征在于：所述的胶原蛋白纤维通过如下步骤制得：(1)动物跟腱的前处理取一定量的动物跟腱在酸中浸泡，剔除跟腱中的筋膜并进行切片，用NaCl溶液浸泡、清洗，去除上清液并收集沉淀物A，备用。(2)酶解消化将(1)中收集的沉淀物A捣碎溶解在酸溶液中，加入蛋白酶在进行酶解；得到酶解产物；调节pH为7
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10反应，然后离心沉淀，收集沉淀物B，备用。(3)助滤吸附将(2)中收集的沉淀物B用酸溶解后，加入一定量的助滤剂搅拌后过滤，收集上清液，备用。(4)分离纯化将步骤(3)中的上清液进行浓缩后，通过阳离子交换介质吸附胶原蛋白后再洗脱分离，最后得到洗脱液。(5)除菌过滤将(4)中收集的洗脱液用超滤系统进行浓缩后，用0.22um的过滤膜除菌过滤，得到无菌可溶性胶原溶液；(6)胶原蛋白纤维的制备向步骤(5)得到的可溶性胶原溶液中加0.1M
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1M的Na2HPO4调节pH为6
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9，静置过...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐冬慧，张智武，夏伟，
申请(专利权)人：浙江崇山生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：