一种外泌体的提取方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种外泌体的提取方法，主要包括将血清/血浆(枸橼酸钠采血管)过LDLR亲和层析柱以及对收集液采用氧化物进行富集浓缩的操作步骤。本发明专利技术采用LDLR亲和层析首先除去血清/血浆中的低密度脂蛋白，并采用氧化物对收集的缓冲液进行了浓缩，建立了一种从血清中纯化外泌体的方法。纳米流式检测颗粒数、蛋白质免疫印迹检测外泌体表面标志物、透射电子显微镜检测表明提取的外泌体得率高，本发明专利技术所提取的外泌体进一步结合裂解方法，将外泌体内部物质释放出来，核酸与蛋白层面均可以做后续研究。本发明专利技术具有操作步骤简单、提取时间短，制备获得的外泌体纯度高、并且适用于小量样本以及性价比高的优点，适合在体外诊断领域推广应用。用。用。

【技术实现步骤摘要】
一种外泌体的提取方法及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种外泌体的提取方法及其应用。

技术介绍

[0002]相较传统的组织活检技术，液体活检作为癌症的一种检测手段，具有非侵入性、准确性高、取样简便、价格低廉等多种显著优势。取血进行的液体活检损伤小，因此成为了癌症诊断领域热门技术。
[0003]其中，在液体活检中采用外泌体具有更多的优势，如能够全面反馈信息，创伤小，特异性更高，以及具有高稳定性。
[0004]外泌体作为定量和定性信息的来源时，可以告知恶性疾病和肿瘤负担的存在。外泌体液体活检的检测样本可以是血液、尿液、唾液或脑脊液等有肿瘤相关生物标志物的体液。癌细胞衍生的外泌体含有能反映癌细胞起源的特异性核酸和蛋白质。外泌体在体液中广泛分布，数量丰富，具有较好的稳定性。因此比ctDNA和CTC更易得到理想的检测浓度。
[0005]外泌体是由含有膜蛋白的脂质双层膜构成的小囊泡，其内含有蛋白、核酸、脂质等物质。
[0006]外泌体携带大量核酸物质，包括miRNA、mRNA、DNA、长链非编码RNA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种外泌体的提取方法，其特征在于，包括：(1)取待检测血清/血浆，过LDLR亲和层析柱，PBS缓冲液冲洗，收集流穿液；(2)对步骤(1)中的收集的流穿液采用氧化物进行富集浓缩。2.根据权利要求1所述的外泌体的提取方法，其特征在于：所述氧化物选自二氧化钛(TiO2)、ZrO2、、Y2O3、ITO、In2O3或Mn2O3中的一种或几种。3.根据权利要求2所述的外泌体的提取方法，其特征在于：所述氧化物为ZrO2。4.根据权利要求2所述的提取方法，其中所述的步骤(2)为：将步骤(1)中的收集的洗脱缓冲液与氧化物沉淀混匀，震荡孵育30min，离心，弃上清，沉淀中加入PBS缓冲液洗涤，离心弃上清，加入PBS后混匀沉淀，即为外泌体与氧化物的混合物。5.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于，采用PBS缓冲液洗涤的次数为2
‑
3次。6.根据权利要求2

【专利技术属性】
技术研发人员：付洁，王伊，李华柏，李雪洁，
申请(专利权)人：广西金则医学科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：