一种基于肽段的靶向蛋白质组精确定量方法技术

本发明专利技术公开了一种基于肽段的靶向蛋白质组精确定量方法，设计了一系列包含亲和标签且具有相似理化性质的相同氨基酸长度的多肽序列，包括亲和标签序列、标记蛋白的特征氨基酸序列、蛋白酶的酶切位点。将编码这些序列的核苷酸序列添加到不同基因的开放阅读框的5

【技术实现步骤摘要】
一种基于肽段的靶向蛋白质组精确定量方法


[0001]本专利技术涉及靶向蛋白质组学领域，特别涉及一种基于肽段的靶向蛋白质组定量方法。

技术介绍

[0002]靶向蛋白质组学，即只选取和检测目标蛋白相关的信号，忽略其他无关信号，以此实现对目标蛋白定量的高特异性和高准确性的鉴定。目前，靶向蛋白质组学技术主要包括SRM/MRM(Selected/Multiple reaction monitoring，选择/多反应监测)和PRM(Parallel reaction monitoring，平行反应监测)两种方法。其中，PRM结合了四级杆的高选择性以及Orbitrap的高分辨、高精度特性，能够对二级图谱进行独立的鉴定，方法流程更加便捷。相比SRM/MRM，它能在更复杂的背景下具有更好的抗干扰能力和检测灵敏度。
[0003]目前蛋白质定量的方法主要是依据特异性肽段的质谱强度或者谱图数目来计算蛋白质的质谱强度。肽段在质谱中的响应受到多个因素的影响。一方面，肽段的信号强度受到蛋白本身表达强度的影响，另一方面，其信号强度也与自身的物理化学性质和质谱检测效率有本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于靶向蛋白质组精确定量的核苷酸序列，其特征在于，包括编码亲和标签的核苷酸序列、标记蛋白的特征核苷酸序列、蛋白酶的酶切位点序列，所述蛋白酶的酶切位点序列不在编码亲和标签的核苷酸序列和标记蛋白特征核苷酸序列之间。2.根据权利要求1所述的用于靶向蛋白质组精确定量的核苷酸序列，其特征在于，所述亲和标签包括流感病毒血凝素表位HA、FLAG、GFP、His、GST、链霉亲和素结合肽段、Myc、V5中的任一种。3.根据权利要求1所述的用于靶向蛋白质组精确定量的核苷酸序列，其特征在于，所述标记蛋白的特征核苷酸序列编码1-8个氨基酸，优选为3-5个氨基酸。4.一种基于肽段的靶向蛋白质组精确定量方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)针对每个靶标蛋白设计对应的肽段序列；(2)将编码肽段的核苷酸序列导入细胞表达体系中表达；(3)将所用的细胞裂解，获得细胞裂解液后，酶解，获得所有蛋白的酶解肽段；(4)用亲和标签对应的特异性抗体对酶解后的细胞裂解液中的肽段序列进行亲和富集；(5)对亲和富集后的肽段序列进行质谱检测及定量。5.根据权利要求4所述的靶向蛋白质组精确定量方法，其特征在于，所述步骤(1)中的肽段序列包括亲和标签序列、标记蛋白的特征氨基酸序列、蛋白酶的酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁琛，戴俊彪，秦兆宇，程莉，岳雪彤，
申请(专利权)人：深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：