特异性鉴别阿胶及其原料中驴、马和骡源性成分的通用引物、检测方法及应用技术

本发明专利技术提供了特异性鉴别阿胶及其原料中驴、马和骡源性成分的通用引物、检测方法及应用，属于动物种源性成分分子检测技术领域。本发明专利技术中所述的引物是指一对能同时特异性扩增驴特异性序列SEQ ID NO.1和马特异性序列SEQ ID NO.2的通用引物。本发明专利技术提供的检测方法可对PCR扩增产物进行电泳检测或高分辨率熔解分析，根据扩增片段大小或标准化熔解曲线和熔解峰图对驴、马和骡源性成分进行有效鉴定和区分。本发明专利技术为阿胶及其原料中驴、马和骡源性成分的快速鉴别提供了简便、高效、可靠的检测方法，为阿胶企业原料采购及其阿胶制品真实性保驾护航。驾护航。

【技术实现步骤摘要】
特异性鉴别阿胶及其原料中驴、马和骡源性成分的通用引物、检测方法及应用


[0001]本专利技术属于动物分子生物学检测
，具体涉及一种特异性鉴别阿胶及其原料中驴、马和骡源性成分的通用引物、检测方法和应用。

技术介绍

[0002]阿胶是以干燥或新鲜的驴皮为原料，经炖制浓缩而成的固体凝胶，是一类名贵中药，2000多年来被广泛应用于益气养血。近年来随着人们对自身健康的日益关注，阿胶的消费量也呈现不断增加的势头。然而，受驴养殖量的限制，驴皮供应远远不能满足目前市场需求。因此，一些非法养殖者和生产商将牛、马、猪、骡皮等各种动物皮张混入阿胶产品中，以牟取暴利。阿胶掺假不仅会影响其药用功效，损害消费者的健康和经济利益，还会使企业和政府都失信于消费者，造成了极坏的社会影响。因此，对阿胶及其原料建立一套简便、可靠、准确的检测方法具有重要意义。
[0003]马、骡与驴同属马科动物，其皮张在外观上与驴皮非常相似，因此在阿胶原料采购中很难准确区分。近年来，基于特异性蛋白质/多肽的方法已被开发用于阿胶鉴定。但由于其前处理繁琐且成本高昂而较难推广。基于DNA 的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于特异性鉴别阿胶及其原料中驴、马和骡源性成分的通用引物，其特征在于，其包括能同时特异性扩增如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列的引物。2.如权利要求1所述的通用引物，其特征在于，所述引物的序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。3.如权利要求1或2所述的通用引物在驴、马和骡源性成分鉴别中的应用。4.一种用于鉴别驴、马和骡源性成分的检测试剂盒，其特征在于，其包括如权利要求1或2所述的通用引物。5.如权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于，其还包括Taq酶、PCR buffer、dNTP Mixture或/和SsoFast EvaGreen Supermix。6.一种用于鉴别驴、马和骡源性成分的检测方法，其特征在于，其包括如下步骤：(1)提取样品基因组DNA；(2)用序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的通用引物进行PCR反应或PCR
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HRM反应，并以驴和马的DNA模板或含SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示序列为阳性对照，以双蒸水为空白对照；(3)对扩增产物进行电泳检测或HRM分析，并对结果进行判定。7.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，在步骤(2)中，PCR反应体系采用20.0μL体系，包括终浓度为0.025U/μL的Taq酶、1
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PCR Buffer、各0.2mM的dNTP，0.15μM的如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的引物及样品DNA；PCR反应程序为：98℃预变性3min；98℃变性20s、66℃退火15s、72℃延伸15s，循环32次；72℃终延伸2min。8.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，在步骤(2)中，PCR
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HRM反应体系采用20.0μL体系，包括终浓度为1
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的SsoFast EvaGreen Supermix，0.15μM的如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的引物及...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘榜，王文君，周翔，师曼娜，危铁安，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：